专利名称：一种含朱砂和/或雄黄的清开灵注射液配方及其制备工艺的制作方法 朱砂和雄黄作为药用在我国已有几千年的历史。由于二者具有较好的疗效，历代医药学家创造了许多名方，使用二者的方剂不断增加，而且应用广泛。宋代《太平惠民合剂局方》、明代《证治准绳》及四版《中华人民共和国药典》收载的含朱砂和雄黄的方剂统计结果表明，二者的用药频率一般在10％左右，高者可达30％。由以上的统计结果可以看出，在历代方剂中朱砂和雄黄的用药频率是较高的，同时也说明了历代中医药学家对它们的作用是肯定的。临床上经常使用的含朱砂和雄黄方剂、成药有几十种，如安宫牛黄丸、牛黄清心丸、紫雪丹、至宝丹及朱砂安神丸等名贵中成药。其中称瘟病四宝的安宫牛黄丸最为著称，是我国主要的出口创汇品种，具有清热解毒、化痰通络、醒脑开窍、改善脑循环及抑制病毒复制等作用，安宫牛黄丸主要由朱砂、雄黄，牛黄、水牛角、珍珠母、黄芩、栀子、金银花、板蓝根等药物组成。清开灵注射液是在安宫牛黄丸组方基础上开发的，但其去除化裁掉了安宫牛黄丸组方中占主要组分的朱砂和雄黄。清开灵注射液组方中去除朱砂、雄黄的主要原因主要有两方面一方面由于组方中占主要组分的朱砂和雄黄的主要化学成分分别为硫化汞(HgS)和硫化砷(As4S4)，而二者都是极难溶于水的化合物，造成注射液制备困难，消化系统吸收困难，药理学、毒理学、药效学研究困难等；另一方面，朱砂和雄黄中的重金属(砷，汞)含量很高，利用中药药典规定的矿物中药炮制方法，例如水飞等传统炮制工艺去除困难，不能有效降低朱砂和雄黄中的重金属元素含量，更无法定量控制药物中有效成份的含量，对人体会造成很大的危害，对药效的发挥产生不利的影响。因此，制备清开灵注射液时将朱砂和雄黄两味药去除。然而，这样做却人为地缩减了安宫牛黄丸的药效范围，未能体现朱砂和雄黄的药用价值。减弱了安宫牛黄丸的原有药效，同时也限制了清开灵注射液的应用范围以及安宫牛黄丸走向国际化和安宫牛黄丸的二次开发。中国发明专利申请2006102000675和中国发明专利申请2006102002736中公开了朱砂、雄黄的溶解及其去毒方法，在本发明中所用的朱砂，雄黄溶解液即是用上述专利方法制备的。这些方法一方面解决了朱砂、雄黄溶解的问题，不但使活性成分溶出以更有效的发挥作用，也可使溶解态的砷、汞元素与中药有效成分形成络合物，构成中药复方组合物的有效活性中心；另一方面可有效控制朱砂，雄黄中的重金属与砷的含量，降低朱砂、雄黄的毒性，充分体现朱砂和雄黄的药用价值。改善中药复方的疗效，增加其治疗适应症，更好的为临床服务。本发明涉及一种注射药物的配方及其制备方法。更确切地讲是一种在清开灵注射液原方的基础上，在原方中加入了朱砂和/或雄黄成分。配方中的朱砂、雄黄组分已经经过微生物法溶解、去毒，并且按照不同的比例与清开灵注射液混合，制备成新型清开灵注射液或粉针剂。发明目的本发明的目的在于提供一种加入了朱砂和雄黄两味药的、新型的适用于治疗高热昏迷、中风、抗肿瘤等疾病的，药效更显著、全面的清开灵注射剂或粉针剂。本发明的另一目的在于提供一种工艺简单、流程较短、成本低廉的利用微生物对矿物药的溶解降低药物中有毒重金属含量的、含朱砂和/或雄黄的清开灵注射液或粉针剂配方及其制备工艺。实施措施本发明的目的可以通过以下措施来实现中国发明专利申请2006102000675和中国发明专利申请2006102002736中公开了朱砂、雄黄提取物的溶解和重金属(含砷)的控制方法。按照上述两个专利中公开的方法制备好朱砂、雄黄的配制液备用。清开灵注射液按照国家标准制备。
新型清开灵注射液或粉针剂的制备分别将不同浓度的朱砂和/或雄黄配制液和制得的清开灵注射液混合，再经微孔滤膜过滤后，得到含朱砂和/或雄黄主要组分的清开灵注射液，或者冷冻干燥或喷雾干燥记得注射用粉针剂备用。
本发明与现有的清开灵注射液产品和生产工艺相比具有如下优点
本发明从合理利用中药，全面认识成药中每一组分的功效的原则出发，不但克服了国家标准的清开灵注射液去除朱砂和雄黄两味主要组分的弊端，而且又可控制重金属含量，且有效增强了清开灵注射液的药效。本发明制备工艺独特。切实达到控制中药中重金属的含量，增强药效，确保用药安全的目的，充分体现了传统中药的精髓。
本发明的药效理论如下现代药理学分析认为，朱砂具有镇静、抗惊厥，强心退热作用，雄黄具有清热解毒、抑制病毒复制、抗肿瘤等作用。朱砂，雄黄与牛黄，金银花、黄芩、栀子、板蓝根配伍，可协同其抗菌、抗病毒、抗炎退热作用。本发明所得到的新型清开灵注射液具有清热解毒、化痰通络、清营凉血、醒脑开窍之功效及改善脑循环、抑制病毒复制等作用。对缺血性脑损伤有保护作用，可以清除自由基，减轻脑组织脂质过氧化反应。减少脑细胞坏死，抗肿瘤等作用，同时将毒性控制到安全阈值。

以下提供本发明的三个具体的实施例，但这并不意味着本发明局限于这些具体实施实例，因为同领域技术人员可以根据本专业的一般知识使用本发明所用的以细菌法炮制的朱砂和/或雄黄进行组方。
实施例一按照国家标准清开灵注射剂的配方及其国家标准清开灵注射液或粉针剂制备方法制备清开灵注射液或粉针剂。
实施例二含朱砂和/或雄黄的新型清开灵注射液或粉针剂制备工艺其制备工艺包括如下步骤(1)按照中国发明专利申请2006102000675和中国发明专利申请2006102002736中公开的方法制备好朱砂、雄黄的配制液；(2)分别将不同浓度的朱砂、雄黄配制液与按国家标准制得的清开灵注射液按下面所示的比例混合；(3)混合液经微孔滤膜过滤后，得到含朱砂和/或雄黄的清开灵注射液，或者冷冻干燥或喷雾干燥即得注射用粉针剂备用。
一种含朱砂和/或雄黄的新型清开灵注射液或粉针剂配方组合物，是按以下重量比组成
甲目前国家标准的清开灵注射剂组分1-99％+雄黄组分1-99％。
乙目前国家标准的清开灵注射剂组分1-99％+朱砂组分1-99％。
丙目前国家标准的清开灵注射剂组分1-99％+雄黄组分1-99％+朱砂组分1-99％。
实施例三含朱砂和/或雄黄的清开灵注射液或粉针剂的抗肿瘤作用1、材料与方法(1)按实施例一所示方法由兰州大学临床前新药研究重点实验室按表一制备各种样品，均以1mmol/LNaOH溶液助溶，以培养液调至所需浓度。
(2)将HL-60细胞系(人急性早幼粒白血病细胞，由兰州大学基础医学院提供)孵育于37℃、5％CO2的二氧化碳培养箱中。用含10％小牛血清的RPMI1640培养液(SIGMA公司)每2～3天传代培养。
(3)分别将不同样品的药液加入长满单层的对数生长期细胞中，作用于不同的时间后以0.25％胰酶消化，收集各药液作用后的贴壁细胞，以PBS缓冲液洗涤2次，离心后去上清液，边振荡边滴入70％冷乙醇固定细胞，4℃保存。上机前PBS洗涤3次，加入适量PBS液与含RNA酶的碘化丙啶PI染液混匀，经45目尼龙网滤过后，调细胞浓度至1×106个/ml，以流式细胞仪测定亚二倍体细胞DNA含量的变化，测定细胞数为10000个。
(4)试验结果见下表



本发明涉及一种注射药物的配方及其制备方法，更确切地讲是一种在现行清开灵注射液原方的基础上，在原方中加入朱砂和/或雄黄成分。配方中的朱砂、雄黄组分已经经过生物法溶解、去毒，并且按照不同的比例与清开灵注射液混合，制备成新型清开灵注射液或粉针剂，旨在改善其疗效，增加其治疗适应症，充分体现传统中药的精髓，更好的为临床服务。