专利名称：结核及抗酸分枝杆菌组合快速药敏及菌型初步鉴定微量检测板的制作方法全世界每三个人中就有一人感染潜伏性结核病菌(即结核细菌)。只有在这些细菌 变为活动性时，人们才罹患结核。结核通常可采用四种标准或一线抗结核药物的疗程进行 治疗。如果这些药物被滥用或管理不当，则可发展为耐多药结核(MDR-TB)。用二线药物治 疗耐多药结核所需时间更长，更加昂贵，并且产生更多副作用。在这些二线药物也被滥用或 管理不当并因此也变得无效时，可发展为广泛耐药结核。至关重要的是，临床医生意识到耐 药性的可能性，并利用可能提供早期准确的药敏实验结果，以便尽快制定有效治疗方案。如 果在痰中发现结核细菌，即可作出诊断，但是这一结果不能区分该结核菌对哪种药物敏感 或耐药。因此要评价药物敏感性，必须在合适的实验室对细菌进行培养和检测。结核分枝杆菌生长十分缓慢。目前分枝杆菌培养药敏试验仍多采用传统方法(以 下简称《规程》法)，即绝对浓度法和比例法(全国临床检验操作规程第三版2006 916 917)。在传统改良罗(L-J)氏固体培养基上，要经4 8周培养才能生长出菌落，再经4周 才能获得药敏结果。以这种方式对结核、尤其是广泛耐药结核进行最后诊断，可能需要6-16 周。要缩短诊断所需时间，迫切需要新的结核快速诊断工具。为了便于区别不同的耐药结核病，世界卫生组织(WHO)把耐药结核病分为以下五 种单耐药结核病(DR-TB)体外试验证实结核患者感染的结核分枝杆菌对1种抗结 核药物耐药。多耐药结核病(PDR-TB)体外试验证实结核患者感染的结核分枝杆菌对不同时包 括异烟胼和利福平在内的两种以上抗结核药物耐药；耐多药结核病(MDR-TB)体外试验证实结核患者感染的结核分枝杆菌至少对一 线抗结核药物中的异烟胼和利福平耐药。广泛耐药结核病O(DR-TB)体外试验证实结核患者感染的结核分枝杆菌至少对 一线抗结核药物中的异烟胼和利福平耐药外，还同时对卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素中的 任一注射类药物和氧氟沙星、左氧氟沙星、莫西沙星中的任一氟喹诺酮类药物耐药。全耐药结核病(TDR-TB)体外试验证实结核患者感染的结核分枝杆菌对所有一 线抗结核药物和进行药敏试验的所有二线抗结核药物氧氟沙星、卡那霉素、阿米卡星、卷曲 霉素、乙硫异烟胺、丙硫异烟胺、环丝氨酸、对氨基水杨酸等均产生耐药。微孔板用于微生物药敏和鉴定的产品很多，通过创新设计，刘正华等提出了专用 于结核分枝杆菌药敏鉴定的细菌微量培养板(ZL 2007 2 0040393.4)。为提高药敏试验操 作的实用性，进一步改进细菌微量培养板，设计能进行一线和二线抗痨药物和非规程药物的药物敏感试验培养板，一次筛选出对耐药菌株的敏感药物，指导治疗用药。
图1是本实用新型结构示意图。图1矩形检测板上排列的圆是圆柱锥形微量培养孔，检测板或/与板盖上行与列 编有数字或字母的序号。板盖和排列各圆柱锥形微量培养孔的检测板(一体化的)均可以通 过注塑方式制备。使用时在各圆柱锥形微量培养孔加入试验浓度结核菌菌液，37°C恒温培 养箱内培养。3天后每隔对小时观察。通过超千倍放大系统，采集细菌生长图象，并与阴阳 对照孔图象比较，与阳性对照孔相似判为耐药，反之为敏感。在圆柱锥形微量培养孔内置有经真空冷冻干燥包被抗结核药物和培养基。所述包 被抗结核药物包括药敏试验组合、一线抗结核药组合、二线抗结核药组合，非规程药物抗结核组合及菌型鉴定组合。所述包被抗结核药物是一次检出单耐药结核菌、耐多药结核菌、广 泛耐药结核菌和全耐药结核的药物。包被抗结核药物包括药敏试验组合是包被常规的一线和二线抗结核药物、包被青 霉素类、碳青霉烯类及克拉维酸钾、氨基糖苷类、头孢类、喹诺酮及氟喹诺酮类、氨基糖苷 类、大环内酯类抗生素和一切经试验证明对结核及抗酸分枝杆菌有效的药物。本实用新型结核及抗酸分枝杆菌组合快速药敏及菌型初步鉴定微量检测板在具 有8行12列的圆柱锥形微量培养孔数量的条件下(通过置放不同的药物和培养基)可以一 块板完成药敏试验组合、一线抗结核药组合、二线抗结核药组合，非规程药物抗结核组合及 菌型鉴定组合的工作。培养基改良米氏(Middleblook) 7H-9液体培养基c药敏试验药物 药物浓度为ug/ml01、异烟胼(H)0.5 50002、利福平(R)1 500003、链霉素(S)5 50004、比嗪酰胺(Z)0.1 500[0029])05、乙胺丁醇(E)0.5 50006、对氨基水杨(PAS0.1 1000[0031]07、卡那霉素(Km)0.1 500 08、阿米卡星(AMK)1 50009、卷曲霉素(Cm)1 50010、环丝氨酸(Cs)0.1 50011、氧氟沙星(Ofx)0.1 50012、左氧氟沙星(Lfx)0.1 50013、乙硫异烟胺(Eto)1 . 50014、丙硫异烟胺(Pto)1 . 50015、莫西沙星(Mfx)1 . 50016、环丙沙星(Cfx)1 . 50017、加替沙星(Gfx)0.1 5000[0042]18、司帕沙星(Sfx)1 5000[0043]19、青霉素钠(PNa)1 . 500020、头孢西丁(Cfx)0.1 500021、头孢噻月亏(Cft)0.1 500022、阿莫西林(Amx)0.1 500023、美罗培南(MP)1 50024、亚胺培南(IPM)1 . 50025、克拉维酸钾(C)1 50026、红霉素(ERY)1 500 27、罗红霉素(Rox) 观、克拉霉素(CLM)0. 05 5000药物浓度ug/ml 0. 05 500[0053]29、妥布霉素(TM)0. 1 50030、强力霉素(DOX)0. 1 50031、甲硝唑(MDE)1 500032、替硝唑(TNE)1 5000噻吩-2-羧酸酰胼(TCH ) 1 5000对硝基-苯丙酸钠(PNB) 1 5000设计药敏试验组合一线药组合，二线药组合，初步鉴定组合，一次检出单耐药结 核菌、耐多药结核菌、广泛耐药结核菌和全耐药结核。包被青霉素类、克拉维酸钾及大环内 酯类抗生素用于结核及抗酸分枝杆菌药敏试验。 例如A1-A5培养孔为常用一线药组合，A6-A12 E1-3常用二线药组合，E4-12 G1-7耐药菌及非结核分枝杆菌用药组合，G8-G9初步鉴定组合。判定H/R仅一种药耐药单耐药H/R耐药+其他一种一线、二线药耐药 多耐药 H+R耐药 耐多药 H+R+Km/Am/Cm +Ofx/Lfx/Mfx 广泛耐药 A1-12+E1-3 都耐药 全耐药。