一种检测肿瘤血管的超声造影方法[0002]超声造影(ultrasoniccontrast)又称声学造影(acoustic contrast),是利用造影剂使后散射回声增强，明显提高超声诊断的分辨力、敏感性和特异性的技术。随着仪器性能的改进和新型声学造影剂的出现超声造影已能有效的增强心肌、肝、肾、脑等实质性器官的二维超声影像和血流多普勒信号，反映和观察正常组织和病变组织的血流灌注情况，已成为超声诊断的一个十分重要和很有前途的发展方向。超声造影是通过造影剂来增强血液的背向散射，使血流清楚显示，从而达到对某些疾病进行鉴别诊断目的的一种技术，由于在血液中的造影剂回声比心壁更均匀，而且造影剂是随血液流动的，不易产生伪像。[0003]随着声学造影剂和相关检测技术的飞速发展，超声检查在检测肿瘤内特征性血流信号，评估肿瘤血管生成方面显示出其特有的优势。但是目前的造影剂因体内条件的多变与不稳定性，对肿瘤新生血管的超声分子现象能力有限，不能够动态、清晰地显示肿瘤微细血管。
[0004]本发明克服了现有技术的不足，提供一种利用形态规则、大小均匀、分散度好，微泡间无聚集现象的造影剂，对肿瘤血管检测的超声造影方法。[0005]为达到上述目的，本发明采用的技术方案为:一种检测肿瘤血管的超声造影方法，其特征在于包括步骤: 第一步:建立患肿瘤的动物模型，从患有肿瘤的种兔体内取出有活力的肿瘤组织植入待实验的兔子体内； 第二步:制备声学造影剂，利用浓度为5%人血清白蛋白和40%的低分子右旋糖苷按质量比为1:3的比例混合均匀，采用声振仪声振，声振时匀速注入1.5ml全氟丙烷气体；
第三步:检测肿瘤参数，将待实验的兔子注射第二步中制备的造影剂，利用超声诊断仪扫查肿瘤大小、形态、内部回声及边缘情况，利用⑶FI和PDI技术观察造影剂注射前后肿瘤周边及内部血流情况；
第四步:进行免疫组化染色，利用过量的麻醉剂处死造影后的兔子，取超声检测部位的组织，利用浓度为4%的多聚甲醛固定，石蜡包埋切片进行免疫组化检查；
第五步:将⑶FI及PDI检测结果与免疫组化结果进行比较分析。
[0006]本发明一个较佳实施例中，进一步包括还包括处理造影前后获得的⑶FI图片步骤，将造影后的CDFI图片编码减去造影前的CDFI图像编码，差值为造影增强的强度，将该增强的强度进行彩色编码，将彩色编码与造影前的CDFI图像编码叠加，叠加后的图像为造影后的⑶FI图像。
[0007] 本发明一个较佳实施例中，进一步包括所述第一步中建立患肿瘤的动物模型包括步骤:
(1)、以速眠新0.2ml/kg体质量经肌肉注射麻醉待实验的兔子；
(2)、以浓度为8%的硫化钠脱去腹部肝区体毛，外用生理盐水洗净，剑突下正中切口，暴露肝右叶；
(3)、以眼科镊在肝右叶刺一深3cm的隧道，从患有肿瘤的种兔体内取出有活力的肿瘤组织Icm3，无菌生理盐水洗净，修剪成2~3mm3的组织块；
(4)、取修剪好的组织块2个植入隧道内，伤口止血处理，缝合覆膜、肌层和皮肤；
(5)、肿瘤植入后,词养兔子2~3周，用于后续实验。
[0008]本发明一个较佳实施例中，进一步包括所述第二步中声振功率为280W，声振时间为 90s。
[0009]本发明一个较佳实施例中，进一步包括所述第三步中造影剂的剂量为0.01ml/kg,耳缘静脉一次性注射后即刻以Iml生理盐水洗净。
[0010]本发明解决了中存在的缺陷，本发明的检测肿瘤血管的超声造影方法利用本发明的造影剂提高了彩色多普勒超声对肿瘤内彩色血流信号的检出能力，无论在CDFI或PDI条件下，肿瘤周边和内部的血流信号均出现明显的增强，可清晰显示血管数目明显地增加，大大提高肿瘤的诊断率。

[0011 ] 现在结合实施例对本发明作进一步详细的说明。
[0012]一种检测肿瘤血管的超声造影方法，以一种无创、快捷、可在活体重复实施的方式评价、监测肿瘤血管，包括如下步骤:
第一步:建立患肿瘤的动物模型，从患有肿瘤的种兔体内取出有活力的肿瘤组织植入待实验的兔子体内；该步中建立患肿瘤的动物模型包括步骤:
(1)、以速眠新0.2ml/kg体质量经肌肉注射麻醉待实验的兔子；
(2)、以浓度为8%的硫化钠脱去腹部肝区体毛，外用生理盐水洗净，剑突下正中切口，暴露肝右叶；
(3)、以眼科镊在肝右叶刺一深3cm的隧道，从患有肿瘤的种兔体内取出有活力的肿瘤组织Icm3，无菌生理盐水洗净，修剪成2~3mm3的组织块；
(4)、取修剪好的组织块2个植入隧道内，伤口止血处理，缝合覆膜、肌层和皮肤；
(5)、肿瘤植入后,词养兔子2~3周，用于后续实验。
[0013]第二步:制备声学造影剂，利用浓度为5%人血清白蛋白和40%的低分子右旋糖苷按质量比为1:3的比例混合均匀，采用声振仪声振，声振功率为280W，声振时间为90s，声振时匀速注入1.5ml全氟丙烷气体；声振后以库尔特颗粒记数仪计算该造影剂气体微泡的数量，浓度为1.6X109个/L，平均直径(4.3±0.1) μ m。由此可见，该声学造影剂形态规则、大小均匀、分散度好,微泡间无聚集现象,大大增强了声波的反射,显著增强二维和多普勒超声的信号，提高肿瘤血流的显示率，使造影前未能显示的低速细小血流得以显示；因该造影剂粘稠度低，在体内易扩散，渗透性较好，做超声影像时，能明显增强肿瘤周边和内部的血流信号，能够动态、清晰地显示肿瘤微细血管。
[0014]第三步，检测肿瘤参数，将待实验的兔子注射第二步中制备的造影剂，影剂的剂量为0.01ml/kg，耳缘静脉一次性注射后即刻以Iml生理盐水洗净，利用超声诊断仪扫查肿瘤大小、形态、内部回声及边缘情况，利用CDFI (能量多普勒血流图)和roi (能量多普勒图)技术观察造影剂注射前后肿瘤周边及内部血流情况，分别获取注射造影剂前的CDFI图片和注射造影剂后的⑶FI图片，应用造影⑶FI和PDI技术能客观地掌握肿瘤的血管特征，宏观地评价肿瘤内血供情况。
[0015]第四步:进行免疫组化染色，利用过量的麻醉剂处死造影后的兔子，取超声检测部位的组织，利用浓度为4%的多聚甲醛固定，石蜡包埋切片进行免疫组化检查；免疫组化结果可见，VEGF(血管内皮生产因子)表达率较明显，细胞浆呈棕黄色染色，弥漫性表达于癌巢中，靠近肿瘤边缘或坏死组织周围的表达较强。
[0016]第五步:将⑶FI及PDI检测结果与免疫组化结果进行比较分析；结果表明，造影后PDI检测的肿瘤内血流信号与肿瘤内VEGF表达具有显著的相关性，造影前后CDFI检测结果及造影前PDI检测结果与VEGF表达间均无明显相关。
[0017]进一步的，本发明的检测肿瘤血管的超声造影方法还包括处理造影前后获得的CDFI图片步骤，该步骤可在第三步之后或第五步之前实施，具体将造影后的CDFI图片编码减去造影前的CDFI图像编码，差值为造影增强的强度，将该增强的强度进行彩色编码，将彩色编码与造影前的⑶FI图像编码叠加，叠加后的图像为造影后的⑶FI图像。超声造影CDFI所显示的肿瘤内血流信号增强强度与动脉造影显示的肿瘤血管染色情况有显著的相关性。通过将彩色编码与造影前的CDFI图像编码叠加，叠加后的图像作为造影后的CDFI图像，能清晰显示微细血管，可以对造影后的图片进行直观分析，显像效果明显，便于对肿瘤血管的诊断。
[0018]本发明的检测肿瘤血管的超声造影方法利用本发明的造影剂提高了彩色多普勒超声对肿瘤内彩色血流信号的检出能力，无论在CDFI或PDI条件下，肿瘤周边和内部的血流信号均出现明显的增强，可清晰显示血管数目明显地增加，大大提高肿瘤的诊断率。
[0019]以上依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定技术性范围。