专利名称:喂养甲壳纲动物和水生贝壳类动物幼虫的饵料的制作方法本发明涉及一种饵料，可用于喂养甲壳纲动物的幼虫(除去咸水虾)，如龙虾，螃蟹，耳贝(awabi)和海胆以及水生贝壳类动物的幼虫，这些全是重要的海洋资源。全世界包括日本，在水产养殖业方面，由于年产量的稳定增长，表明技术进步十分明显。在水产养殖业领域内，有关种苗和小鱼的初期阶段的喂养还存在许多重要问题未解决，主要原因是这些鱼苗是太小的个体，要生产出即适合于微小个体标准又有营养并达到其他需要的形式的饲料是十分困难的。由于上述理由，在此阶段的喂养常需要依靠长期积累的经验以及所称的“第六感官”。而这样往往致使产量下降以及年产量也会发生显著变化。属于骨条藻和Cheatoceros的浮游和下沉的硅藻现被广泛用作对虾幼虫(溞状幼虫和幼体期)的最适宜的饲料。养殖硅藻所迂的困难是生长率过低，易受气候的影响，且易被其他微生物污染。近来已经在研究代替硅藻的饲料配方。然而，要把配制的饲料研磨成硅藻一样大小的5-50微米的粉末是困难的。而且，既使制成了这种粉末，也会因其颗粒太细而易于溶解在养殖的水中，不仅丧失了营养价值而且明显地污染了养殖的水。当培养水生贝壳类动物的种苗，如耳贝，海胆，鲍鱼和牡蛎时，用硅藻做为它们幼虫期的饲料。然而，由于生产硅藻本身所存在的问题使得幼虫种苗产量低以及产量不稳。另外，这些水生贝壳类动物摄入浮游硅藻然后再在几个月以上的时间内摄入下沉的硅藻。现发现生产下沉的硅藻比起生产浮游的硅藻需要更多的劳动力和时间，而且更易受天气的影响。本发明的一个目的是提供一种饲料，可用于喂养甲壳纲动物(咸水虾除外)的幼虫和水生贝壳类动物的幼虫，此饲料可取代硅藻。本发明进一步的目的是改善常规硅藻的饲养效果。
本发明所提供的饲料是用各种方法破坏单细胞海藻的细胞墙后所获得的，它已经解决了上述存在的问题。
更为特殊的是，本发明为甲壳纲动物(咸水虾除外)的幼虫和水生贝壳类动物的幼虫所提供的饲料是由细胞墙已被破坏的单细胞海藻所组成的。
本发明所引用的“单细胞海藻”是指生长在新鲜水和海水里的种类，主要指新鲜水和海水小球藻，硅藻和兰绿海藻。
此处所用的词语“新鲜水小球藻”通常分为普通小球藻、椭圆小球藻、粉核小球藻、寄生小球藻、密集小球藻、杂色小球藻、自养小球藻、变异性小球藻，夜间小球藻、嗜光小球藻以及类似物。
词语“海水小球藻”在水产养殖业领域内用于轮虫的培养，称作微细小球藻，普通小球藻及其类似物[见“日本会社科学养鱼业公报”，44卷，No.10，1109-1114页(1978);45卷，No.7，883-889页(1979)45卷，No.8，955-959页(1979)以及“油料化学”，31卷，No.2，77-90页(1982)]然而最近公开的材料说海水小球藻属于矮小缘藻属(见演讲发布，143页，在日本植物会社第50次讨论会上)。因此，海水小球藻的分类系统还未确切建立。为方便起见，本发明所采用的是用于水产养殖业领域内所用的词语。
此处所用的硅藻可分为Cheatoceros glacilis Cheatoceros simplex，骨条藻及其类似物。
由以下方法进行对细胞墙的破坏扩散干燥处理、超生波处理、磨碎处理、用酶溶解细胞墙的处理以及其他处理。所有的处理过程都是使用的湿细胞，湿细胞是培养单细胞海藻后再用水洗其几次所获得的。
扩散干燥处理将固体含量为2-10%，最好3-5%的湿细胞溶液进行吹风处理，进入风的温度为140°-160℃，排出风的温度为100-130℃。
超生玻处理用一台商业上合用的超声波发生器作用于湿细胞溶液，湿细胞溶液的固体含量与上述情况类似，同时冷却以保持溶液温度在60℃以上。
磨碎处理将海沙、玻璃渣以及类似物与湿细胞溶液混合在一起，然后将其置于一个磨碎机，如掺合器中，进行处理以破坏细胞墙。
酶溶解细胞墙处理所用的酶包括蛋白酶(由Amano Seiyaku公司生产的Papain牌)，纤维素酶(由Yakult公司生产的Onozuka纤维素R10，由Meiji Seika公司等等生产的Meicelase牌)，半木纤维素酶(由Yakult公司等等生产的Macerozyme)，溶果胶酶(Seishin Seiyaku公司等等生产的Pectoriase牌)及其类似物，这些酶可以单独应用或合并应用。然而在本发明中，任何限制不受所用的酶的类型的影响。还应注意，用酶处理时的条件(pH，温度，时间以及类似因素)要随所用酶类型的不同而改变，最好根据所用的酶选择合适的条件。
如果需要，应在单细胞海藻中加入一定量的水，这些单细胞海藻的细胞墙已被使用上述任何一种处理方法所破坏了。然后在单细胞海藻中加入一定量的在干的基质里含量大约1-50%，较好3-10%的磷脂，如黄豆卵磷脂，固醇，如胆甾醇和植物甾醇，甘油脂或三十二烷基磷酸酯，以制成均匀的分散相。以此种方法可获得更稳定的分散体系。
如果采用扩散干燥处理破坏细胞壁，可使用以下步骤将单细胞海藻的干燥品分散在水中，使其干燥品的含量为5-15%，再用高压均化器或多回旋均化器迫使其分散。原先几百个海藻聚集在一起现在被强力分散成单个的细胞或几个细胞的结块，使得甲壳纲动物和水生贝壳类动物的幼虫更容易吞食。
用各种高分子材料将所得的饲料结合成一个板块或膜状物，以此代替下沉的硅藻。所用的高分子材料包括褐藻酸，多糖，如琼脂、Koniaku甘露聚糖以及淀粉，蛋白如黄豆蛋白和鸡蛋白蛋白，合成高分子材料，如聚丙酰胺和羧甲基纤维素及其类似物。
本发明的饲料可用于对虾、螃蟹、耳贝、海胆、鲍鱼和牡蛎的种苗的培育。
例1将硅藻(骨条藻)，海水小球藻(微细小球藻)和新鲜水小球藻(普通小球藻)的活的分散相(含有10%重量的湿的团块)(1)未经处理(对照品)，或(2)用均化器磨碎，(3)超生波处理，(4)用纤维素酶进行酶处理。
进行磨碎处理将小量海沙加到活的分散相中，再将其置于多回旋均化器(3，000-10，000转/分钟)中在50℃以上的温度下处理5-10分钟。进行超生波处理将活的分散相置于商业可用的超生波粉碎器(Tosho电器公司生产)中，于20千赫兹下处理30分钟，同时进行冷却以维持液体温度在50℃以上。进行酶的处理，在分散相中分别以10g/l，5g/l，5g/l的量加入三种类型的纤维素酶(由Nobo公司生产的Cellcrast牌，由Amano Seiyaku公司生产的A-3纤维素酶，由Meiji Seika公司生产的Meicellulase牌)，在45℃下反应4小时。反应期间，每种分散相的PH值控制在6左右。反应完成后，将反应物加热到80℃使酶失去活性，即可得到试验的饲料。
用前述的饲料以下列方式喂养对虾的无节幼虫。将400，000对虾幼虫的个体倒入4个1吨的水罐中，密度是1升中100个个体。从无节幼虫变成状幼虫前，每天以5g/吨的饲料量分别喂养，5g是指湿细胞重量而言。其它喂养条件与使用的普通方法中的条件一致。伴随时间，生长率和幼虫变形的成活率列于表1。
表1 对虾的长度(mm)变化和成活率(%)变成溞状幼虫后的天 1 2 3 4 5数饲料对照 1.09(78)1.40(69)1.95(50)2.26(46)Mysis(45)磨碎处 1.09(80)1.42(74)1.89(56)2.30(50)Mysis(48)理的硅藻 超生波 1.10(82)1.50(73)2.01(54)2.35(46)Mysis(42)处理的纤维素 1.12(85)1.51(76)2.12(61)Mysis(60)3.18(55)酶处理的表1(续)对虾的长度(mm)变化和成活率(%)变成溞状幼虫后的天 1 2 3 4 5数饲料对照 1.02(60)1.40(30)1.65(25)1.78(10)1.85(3)磨碎处 1.09(82)1.43(74)1.95(56)2.31(49)Mysis(46)理的海水 超生波 1.09(80)1.54(75)2.10(62)2.34(52)Mysis(46)小球 处理的藻 纤维素 1.10(84)1.49(77)2.25(68)Mysis(63)3.31(58)酶处理的对照 1.03(65)1.38(28)1.60(25)1.79(12)1.89(2)磨碎处 1.07(80)1.38(70)1.71(50)2.92(42)2.10(35)新鲜 理的水小 超生波 1.07(78)1.46(68)2.91(51)2.10(46)Mysis(40)球藻 处理的纤维素 1.09(81)1.46(69)2.93(59)2.15(48)Mysis(41)酶处理的括号内的指数表示成活率。
从表1中可以看到，用纤维素酶对硅藻进行酶处理后其饲养效果增加了，尽管硅藻的原始可消化性相当高足以用作饲料。另一方面，活体形式的海水小球藻和新鲜水小球藻难以被消化，致使成活率急剧下降。但根据本发明对小球藻进行了处理后，其生长和成活率却大大改善了。
例2取海水小球藻(微细小球藻)和新鲜水小球藻(ellipsoidea小球藻)的活体分散相(含有按重量比的10%的湿团块)，用纤维素酶在相同于例1的条件下对其进行处理，然后在进入空气温度为150℃，排出空气温度为110℃的吹风情况下进行扩散干燥，所得的干燥粉末再进行脱水成为含量为5%的固体团块，再用高压均化器(在500公斤/厘米2的压力下操作)将其分成含有一个至几个细胞的小结块。将此做为饲料，用下列的方式喂养Pseudocentro，将Pseudocentrotus卵倒入3个500升的水罐中，密度是800，000个卵/吨，分别加入饲(饵)料，水温保持在20±1.0℃，同时，加入食物后测定食物的密度为50，000个细胞/毫升，随时间观察生长率。
结果表示在表2中，其生长率等于或高于用硅藻做饵料时的情况。
表2 Pseudocentrotus达到各个生长期所需要的天数与提供的饵料之间的关系生长期(臂状期)饵料4→6 6→8 8↓变形倾向硅藻 3天 9 147未处理的海水小球藻 后来没有 - -发现生长15未处理的新鲜水 6 后来没有 -小球藻 发现生长细胞墙已破坏了的 3 8 13海水小球藻细胞墙已破坏了的 4 12 17新鲜水小球藻例3将藻酸钠以3%的量加到已破坏了细胞墙的海水和新鲜水小球藻溶液中，这些溶液是按照例2中方法制备的，得到一种面糊似的产物。将此产物涂于一个塑料形成的有皱纹的板的表面上，再将此物浸泡于5%的氯化钙溶液中以形成凝胶，以此代替沉积的硅藻，用以喂养耳贝的种苗，其生长率几乎类似于用普通硅藻喂养的生长率。
例4将1份黄豆磷脂，0.2份胆甾醇和0.05份的三十二烷基磷酸酯加到100份的已破坏了细胞墙的海水小球藻分散相(含量按重量计是10%的湿性团块)中，再置于多回旋均化器中进行分散处理。将所得的分散相与不含任何磷脂，胆甾醇和三十二烷基磷酸酯的海水小球藻进行比较，前者既便贮存较长时间之后仍具有很难粘结的特性，而且还不会丧失其营养价值。
根据本发明，方便地使用培养的小球藻可使甲壳纲动物和水生贝壳类动物的幼虫产量稳定。
如果按照本发明的方法处理硅藻，将会进一步改善其饵料喂养效果。


含有已破环了细胞墙的单细胞海藻的饵料，此饲料可做为养殖甲壳纲动物和水生见壳类动物的幼虫时的饲料。使用此类饲料时，上述两类动物的成活率和生长率相当于或高于使用未经任何处理的硅藻时的成活率和生长率。