专利名称：针对调节哺乳动物皮肤状况的组合的能量和局部用组合物应用的制作方法处理皮肤以避免或减轻皮肤内在的老化和外在的环境相关的衰老的效应，是一项 数十亿美元的产业，为这一产业打下基础的是在新技术的开发和验证方面甚至更庞大的资金的投资。电磁(EM)能量通过向皮肤表面的应用而施用至皮肤数十年前即已为人所知，并已以多种不同形式和通过多种递送装置被实施。一般来讲，基于EM的皮肤处理方法可以被分为剥离性的和非剥离性的过程，尽管二者均利用EM能量应用的热释放效应。有各种各样的产品供消费者使用来改善皮肤状况并延缓和/或防止典型的老化迹象。此类迹象包括例如细纹、皱纹、色素沉着过度、灰黄、松垂、黑眼圈、肿眼、不均匀的皮肤色调、增大的毛孔、减少的表皮细胞代谢和异常的脱屑或表皮脱落。然而，对于某些消费者而言，各种各样可获得的产品以及在皮肤护理技术上的提高仍不能产生期望的结果，并且某些消费者感觉需要求助于更加侵入性的医疗方法。剥离性过程如剥离性激光已被证明对于大体形态上的表面重塑或皮肤的移除是有效的，例如在疤痕和纹身的移除过程中，并且已被证明对于处理和改善老化的和光损伤的皮肤的外观是有效的。尽管剥离性过程在面部皮肤的美容方面脆弱的口周和眶周区域对于改善细纹和皱纹的外观是有效的，其主要的缺点包括长时间的康复和复原周期，这使得消费者在不理想的长时期里承受严重受损的美容外观。此外，可能导致的感染、瘢痕形成和色素沉淀不匀这些潜在的副作用通常被消费者认为在美容方面是不可接受的，尤其是涉及面部皮肤时。因此，近来的研究和开发工作已聚焦在向消费者提供更廉价、更方便和更安全的非剥离性皮肤抗衰老和回春处理。涉及向皮肤施加热能以促进改善的皮肤外观的美容方案是本领域中为人们所熟知的。针对消费者居家使用的手持装置形式的电磁能量递送技术在市场上已存在了近十年时间。上述技术的改善和改进，以使对更深的靶皮肤组织的热诱导的有益效果最大化，同时使对靶组织和对外围和表面组织的不合乎期望的损伤均最小化为中心。据信选择性的热处理导致新的胶原形成，并且选择性的热损伤导致，特别是，真皮基质重塑。然而，目前可用的技术已知导致成问题的损伤，此类不合乎期望的持续的消极副作用包括过热、灼伤、红斑和色素不匀。过去，这些装置和组合物的功效仅仅通过外部方法来确定。即，如果在皮肤的外表层存在可见的改善，那么能量递送装置一定是起作用的。但是，几乎没有针对确定这些能量递送装置的最佳时间、温度和组成的方法。此外，被广泛接受的是，在皮肤表面发生的许多可见的变化，是在表面之下的皮肤的真皮和表皮层中发生的变化的结果。不知道一种装置是如何影响皮肤的在下面的层的，是难以确切知道如何控制和最大化这种装置的性能的。皮肤组织的选择性光热解作用是广泛应用的美容处理形式，特别是在包括单色激光能量和广谱强脉冲光(IPL)能量的施用的处理中。在这些技术中，光能被直接应用于皮肤的表面，而渗透依赖于穿过表皮的透射和真皮中的吸收。深色皮肤和表皮上的深色斑点可以妨碍透射并通过吸收能量阻碍处理的功效，并且还可以导致色素区域的过热，过热导致起疱、灼伤、和其他美容上不期望的效应。作为基于的热解作用的替代方案，电传导的射频(RF)电流也已作为美容皮肤处理方式被研究。RF电流和脉冲射频(pRF)在医药领域的使用是已知的，但是RF电流作为针对消费者自我递送的非剥离性的皮肤回春技术依然是相对创新性的。在RF电流向皮肤的应用中，双极RF电流的传送通过直接应用于皮肤的两个电极进行。因此，电流直接流过真皮层，从电极传导至电极，这使其区别于EM能量的应用，EM能量通过表皮聚焦，并且受到影响波长渗透深度的那些因素的限制。RF电流的施用理论上似乎提供了优于EM能量的应用的显著的皮肤处理优点。例如，不同于电磁能量，电传导的RF能量是不依赖于发色团的，这避免了与色素的和非色素的皮肤之间的吸收差异相关的并发症和功效问题，以及所导致的在具有较多的吸收能量的黑素的深色皮肤和可以反射光波的浅色皮肤的处理中的问题。在两种情况中，结果的一致性均是受损的，并且包含发色团的皮肤中的热控制依然是有问题的。然而，RF电流以可以提供热处理功效的能量水平向皮肤的施用受限于研究者不能够优化参数以实现所期望的有益效果而又不存在不合乎期望的皮肤损伤。RF电流通过皮肤表面之下的皮组织递送，而通过温度或湿度传感器进行的效应监测限于皮肤的可及表面。RF电流阻抗是组织组成和包括胶原密度和完整度、水化水平等在内的多种皮肤组织属性的函数。尽管电极之间的距离和对诸如脉冲长度和频率的参数的控制理论上可以被调节，以使效应最优化和避免安全问题，但没有某种设备或其他方式监测组织状况的变化的好处，此类调节几乎是不可能的。在基于EM的能量递送中，表面的皮肤通常达到最高的处理温度，使得在表面的温度监测能够避免对表皮下组织的非期望的损伤。然而，就RF电流而言，表皮下组织实际上达到比表面的皮肤更高的处理温度，使得损伤可能发生在较深的组织而在表面上没有可测量的表现。因此，在经过严格训练的医务人员的监督下和使用精良仪器的临床设置之外，单独基于RF电流的递送的针对消费者个人使用的装置和方案一般是被避免的，因为在不存在适当的表皮下监测机制的情况下，在有效的处理水平依然存在安全性问题。提供RF电流作为唯一的处理形式并且针对居家消费者使用的手持式能量递送装置事实上是未知的。一种声称如此的装置(STOP ，Ultragen Ltd)定位于在欧洲供消费者个人使用，但该装置的处理耐受度为了避免不合乎期望的损伤而被设定得如此低，使得控制条件下的临床功效的客观证据尚不存在。因此，RF在皮肤处理中的作用实质上限于作为与其他热释放过程相结合的附加的或预备性的功能。例如，在 2002 年，Bitter 和 Mulholland (“Report of a new techniquefor enhanced non-invasive skin rejuvenationusing a dual mode pulsed light andradio frequency energy sources !selective radiothermolysis，，，J. Cosmet Dermatol2002 ；1 :142-145)提出了基于RF电流和IPL的组合的处理方案，并且报告了基于100位测试受试者的面部处理的结果，尽管上述作者没有公开具体的处理设计参数。在该研究中，RF被报告增大了 IPL处理的效应。副作用包括美容上不合乎期望的色素沉着效应的报告，并且通过表面的冷却控制了消费者的疼痛知觉。RF还被提出在与定向的光能的应用结合的美容皮肤处理中是有用的，并受到研究。一般来讲，根据这一处理方案设计，RF附属于光能被使用，并根据光能的一些参数而被应用。例如，Hammes 等人(“Electro-optical synergy (ELOS ) for nonablativeskin rejuvenation apreliminary prospective study,，’Journal of European AcademyofDermatology. and Venereology 2006, 20,1070-1075)中，作者聚焦在RF 电流和光能之间协调的脉冲频率，并且提出在这些能量形式之间存在协同作用，这可以允许较低的、较少侵入性水平的光能的使用，并且还提出与RF单独的应用相关的副作用通过上述合并的方案被降低了或避免了。此外，采用这些装置的方案包括了响应于过热的针对使皮肤物理降温的方法、或者防止过热的方法。在另一个实例中，Altshuler的美国专利申请公布2008/0033516A1公开了皮肤组织的“温度控制的光生物激发”，其涉及加热皮肤至靶深度和用电磁辐射照射靶区域的组合。Altshuler提到基于低水平光照、低水平激光、单色和准单色光刺激的皮肤处理方法的现有技术，它们通常被认为提高了 ATP的生产、细胞增殖和蛋白质的生产，以及通过诱导低度炎症应答触发了生长应答，但也提到了不一致的结果的报告和对功效的临床证实的缺乏。Altshuler设想热能的应用可以增强光刺激应答。Altshuler教导了一定体积的皮肤的高热可以通过能够使所述体积的温度升高至优选介于37°和45°C之间的任何已知的来源实现，并具体例示了通过热空气、AC或DC电流、传导性热源、超声波或微波辐射的使用、或者380-2700nm范围内的任何适当波长的EM辐射进行的加热。然而，在Altshuler的所有实施方案中，是依靠EM能量来实现所期望的处理效果。Altshuler教导了热提供了光刺激的所期望的效应的协同强化，但是也提出了在不存在EM的情况下，热可以导致不合乎期望的生物刺激，例如减缓辐射诱导的DNA损伤的修复、热激蛋白(其建立了对随后的热的应用的耐受性)的生产、以及对包括在皮肤组织的再生和修复中所涉及的那些的酶学过程的修饰，并且一般地反向教导了热在不存在光照的情况下作为皮肤处理方式。Altshuler没有提出如何克服与不能够评估或监测表皮下皮肤状况相关的缺陷。此外，对目前存在的装置而言，消费者依从性一直都是个问题。消费者每天只有有限量的时间针对他们的美容方案。尽管装置的制造商想要推荐消费者使用这些装置较长的时间以确保他们得到最大的有益效果，但消费者却不大可能遵从。因此，在建议延长装置的使用和承认消费者在他们的一天中只有有限量的自由时间来使用装置之间存在一种权衡。在设计装置、组合物和方案时，消费者的体验也是重要的。例如，声波图是普遍使用的方法并且提供了巨大的医疗有益效果。但在声波图过程中使用的凝胶浓稠并且难以除去，导致了消费者的不适。此外，很多能量递送装置加热表面的皮肤太快或太热，导致了令人不悦的消费者体验。因此，一直需要能够充分改善皮肤状况以避免需要更加侵入性的医疗方法和避免与之相关的风险的方法。并且，存在对测定能量递送装置的功效的更好方法的需求，这些方法能够被用于建立消费者更加能够接受的体验，同时实现所期望的改善的皮肤外观的结果O本领域中还存在对安全和有效的非剥离性皮肤处理和回春装置、治疗方法和适合消费者个人使用的方案的需求。具体地，存在对通过促进胶原合成和真皮重塑处理表皮下皮肤而又不会导致对所处理的靶组织或周围的组织的不合乎期望的损伤方式的需求。本领域中存在对评估和监测基于RF电流的消费者执行的处理的效应，以优化针对提供所期望的有益效果的RF电流的应用的方法的需求，并且存在对优化的基于RF电流的治疗方法的需求，所述治疗方法避免了与基于EM的治疗方法相关的问题并且不依赖于与处理相结合的物理降温。发明 概述本发明涉及调节哺乳动物皮肤状况的方法。所述皮肤具有至少三层外层角质层；表皮；和真皮。所述方法包括以下步骤将第一个人护理组合物施用至期望调节的皮肤区域，其中所述第一个人护理组合物包含凝胶组合物。另一个步骤包括将能量递送至所述真皮以加热所述真皮中的胶原，使得所述真皮中经加热的胶原加热所述表皮和角质层直到所述角质层达到约37°C至约48°C的外部温度。然后控制至真皮的能量递送以将所述角质层的温度维持在约37°C至约48°C的范围内。递送的能量能够来自RF能量装置，并且所述RF能量经由两个或更多个电极递送，所述电极经由所述凝胶组合物接触所述角质层。所述能量递送装置不发光，并且所述能量递送装置不产生电磁能量有时是优选的。在一个实施方案中，所述凝胶组合物具有约1，000至约2，000 μ S/cm的电导率。 在本发明的另一个实施方案中，当所述RF能量装置开启时，所述RF能量装置在总功率的35%至约65%的范围内递送所述RF能量约20至约50秒，然后将功率提高至约65%至约100%，持续约20至约50秒，然后控制能量递送，使得所述角质层的温度维持在约37°C至约48°C的范围内。在本发明的另一个实施方案中，所述能量递送装置是手持式的，并且将所述能量递送装置应用于消费者眼睛的下方且在所述眼睛的下方移动至鱼尾纹区域的正上方，然后反转方向，并且所述能量递送装置沿这个路径来回移动约3至约6分钟。这个方法能够在所述消费者的另一只眼睛的下方被重复。此外，能够将所述能量递送装置应用于消费者眼睛的上方且在所述眼睛的上方移动至鱼尾纹区域的正下方，然后反转方向，并且所述能量递送装置沿这个路径来回移动约3至约6分钟。这个方法能够在所述消费者的另一只眼睛的上方被重复。本发明公开了多步骤的方案，所述方案包括以下步骤将所述能量递送装置应用于消费者的一只眼睛的下方且将所述能量递送装置移动至鱼尾纹区域的正上方，以连续的来回运动方式进行约3至约6分钟，然后将所述能量递送装置应用于所述消费者眼睛的上方且将所述能量递送装置移动至鱼尾纹区域的正下方，以连续的来回运动方式进行约3至约6分钟，在所述消费者的另一只眼睛上重复这两个步骤，使得所述消费者邻近两眼的鱼尾纹区域各自被处理约6至约12分钟。这个多步骤的方案每天能够被完成至少一次，方案处理期为每周3至5天，持续约3周至约6周。然后消费者能够等候约2至约8个月，然后重复所述多步骤的方案，进行所述方案处理期。优选地，在每个方案处理期之后，所述消费者眼睛周围的细纹和皱纹明显地减少。附图概述虽然本说明书通过特别指出并清楚地要求保护本发明的权利书要求作出结论，但应该相信由下列说明并结合附图可更好地理解本发明，其中图I人类皮肤中天然存在的损伤和修复循环的示意图2A，2B示出了人类胶原的特性；图3是RF电流施用功效的生物学模型的示意图；图4A，4B是编译基因的24小时平均倍数变化；图5A，5B是典型基因的24小时平均倍数变化； 图6A，6B是编译基因的I个月平均倍数变化；图7A，7B是典型基因的I个月平均倍数变化；图8A，8B是RF简单热传递的两幅图；图9是RF简单热传递的示意图； 图10消费者眼睛周围的鱼尾纹区域的示意图；图11是消费者皮肤的区域A ;图12是消费者皮肤的区域B ；图13是消费者皮肤的区域C ；图14是消费者皮肤的区域D ；图15是消费者皮肤的区域E ;并且图16是消费者皮肤的区域F。发明详述在本发明的所有实施方案中，除非另外特别说明，所有百分比均按所述总组合物的重量计。除非另外特别说明，所有比率均为重量比。所有范围是包括界限的且可合并的。有效数字的数目既不表示对所指示量的限制，也不表示对测量精确性的限制。除非另外特别说明，所有数值应理解为可被词“约”修饰。所有测量均被理解为是在25°C和环境条件下进行的，其中“环境条件”是指在一个大气压和50%相对湿度下的条件。应当了解，除非另外说明，在本文附加的权利要求书中列举的任何方法的步骤可以任何顺序进行。例如，在列举步骤(a)、(b)和(C)的方法权利要求书中，步骤(C)可在步骤(a)和(b)之前或之间进行。此外，尽管列举为不同的步骤，但单独的步骤可在周期之间部分地重叠进行或完全地重叠进行。本文“调节角质组织状况”是指改善皮肤状况和/或预防性调节皮肤状况，并且包括例如保护所述组织免遭紫外线辐射，以及调节皮肤老化迹象。本文“改善哺乳动物的皮肤状况”是指在所述组织的外观和感觉上导致视觉上和/或触觉上可感知的积极变化。可被调节和/或改善的状况包括但不限于以下的一种或多种状况减少皱纹和粗糙深纹、细纹、裂纹、肿块和粗大毛孔的出现；皮肤的增厚(例如，构造皮肤的表皮和/或真皮和/或皮下层，以及指/趾甲和毛干的角质层(如果适用的话)以缓解皮肤、毛发或指/趾甲萎缩)；增加真皮-表皮边缘的盘旋结构(还被称为网缘);防止由于例如皮肤功能性弹性蛋白的缺失、损伤和/或失活而造成皮肤或毛发弹性丧失，导致诸如弹性组织变性、松垂、丧失皮肤或毛发变形回复功能这些状况；减少脂肪团；改变皮肤、毛发或指/趾甲的着色，例如黑眼圈、疹斑(如由于例如红斑痤疮而造成的红色不均匀着色)、灰黄、由于毛细管扩张或蛛形血管造成的变色、干燥、脆化和灰白毛发。本文所用的“皮肤老化迹象”包括但不限于，由于皮肤老化而造成的外观视觉和触觉上可察觉的表现，以及任何宏观或微观现象。这些迹象由以下作用产生，所述作用包括但不限于纹理不连续性的发展，如皱纹和粗糙深纹、细纹、皮肤条纹、裂纹、肿块、粗大毛孔、不平坦性或粗糙性；脱屑；干燥；丧失皮肤弹性；变色(包括黑眼圈)；疹斑；变浅；皮肤色素沉着区域，如老年斑和雀斑；角质化；异常分化；皮肤角化不全；弹性组织变性；胶原分解；以及角质层、真皮、表皮、血管系统(如毛细管扩张或蛛状血管)以及尤其是紧靠皮肤的那些下层组织(如脂肪和/或肌肉)中的其它组织学变化。如本文所用，“色素沉着过度”是指其中色素沉着大于皮肤邻近区域色素沉着的皮肤区域(如眼点、老年斑等)。在本文中，“个人护理组合物”是指适于局部应用到哺乳动物皮肤上的组合物。本文所述的个人护理组合物可包含一种或多种护肤活性物质。如本文所用，“护肤活性物质”或“活性物质”是指例如通过提供 有益效果或改善所述皮肤而有助于调节皮肤和其它哺乳动物的皮肤状况的化合物。如本文所用，“能量递送装置”是指针对向哺乳动物皮肤和/或毛发递送能量的任何装置。在本文中，“递送能量”是指使皮肤表面和/或层暴露于由能量递送装置发射的能量，其中它可穿透至所需的皮肤层，包括毛干和/或毛囊。如本文所用，“恒定水平”是指在装置启动时间和装置停用时间之间，装置所递送的能量或能量输出保持在实质上恒定的水平上。如本文所用，“脉冲”是指在装置启动时间和装置停用时间之间。能量输出以可预计的形式变化，其特征在于较高输出时段(脉冲)与较低输出时段交替发生。脉冲的开始可以为突然的或渐进的。“可预计的”是指脉冲峰强度、脉冲形状、脉冲持续时间以及脉冲之间的时间间隔实质上是相同的。可改变脉冲持续时间以及在脉冲之间的时间。如本文所用，“手持式”是指装置具有适合一般成年人舒适持握的重量和尺寸。人类皮肤可以被分为两个主要的结构层表皮和表皮下面的真皮。表皮具有作为对环境的生物学屏障的角质层。在表皮的基底层，存在被称为黑素细胞的产生色素的细胞，它们是皮肤颜色的主要决定因素。下面的真皮提供了皮肤主要的结构支持。它主要由被称为胶原的胞外蛋白组成。胶原由成纤维细胞产生，并且作为三重螺旋由三条多肽链合成，这三条多肽链通过热不稳定的和热稳定的化学键相连。当包含胶原的组织受热时，这些蛋白基质的物理特性在特征性温度发生变化。随着加热发生胶原基质的胶原收缩和重塑的结构转变。在皮肤内，产生若干量的修复活性，以促进胶原持续的产生。在老化过程中，损伤发生的速率可以升高得快于修复活性，或者损伤可以以实质上恒定的速率持续发生，但修复活性减慢。在两种情况下结果都是胶原的减少和作为衰老迹象出现的受损的外观，包括表面缺陷的外观如细纹、皱纹和色素沉着过度的斑点。正常的修复活性循环和随着时间流逝对外观产生的影响显示于图I和3中。在图I中，方框表示导致胶原生产的正常因素。由于许多原因，胶原在皮肤中的增力口，以及其修复和替换的速度有助于皮肤看上去更饱满、更健康、和更有吸引力。持续的增殖和真皮重塑天然地发生，但遗憾的是，这些过程随着我们变老而减慢。当皮肤受到损伤时，例如，在炎症或受到如来自太阳的辐射的损害后，也会产生胶原。图I中的圆圈表示了胶原生成的一些机制以及如何能够追踪其生成。MMP和细胞因子活性仅仅是有助于追踪胶原的修复和补充循环的两个可测量的量。图3是Elure功效20的双重功能生物学模型的示意图。皮肤21被分为了三个层，角质层30、表皮32和真皮34。胶原的重塑和新胶原的生产发生于真皮层中。对皮肤21的正常侵害22持续地发生，包括正常老化、UV侵害、pH变化、化学侵害以及其他。正常侵害22导致受损的胶原24。同样地，正常的低水平炎症26的发生导致细胞因子、HSP和HSF活性。最后，反复的低水平热能导致升高的MMP活性36，结果是胶原片段的生产。热的增加导致引起胶原的形成和修复的细胞活性的上调38。机制36和38均导致健康胶原28的形成和重塑。 尽管胶原经测量具有至高50°C的熔解温度，修复循环可以通过较低水平的热的添加而被改变和增强。分子内氢键交联的热裂解通过裂解事件和松弛事件(氢键的重新形成)之间的平衡产生。这一过程的发生不需要外力。因此，分子内应力通过分子内的氢键的热裂解产生。交联的分子的三级结构的收缩构产生了初始的分子间收缩向量。RF模型加热曲线图示于图8A、8B和9中。真皮结构主要由胶原1，50组成，图2A和图2B。胶原以单链的蛋白质前胶原52的形式由成纤维细胞表达。前胶原52在表达时被截短成胶原150，并且折叠成被称为“原胶原”的三重螺旋构造54。这一过程图示于图2A和2B中。胶原的交联可以是分子内的(共价键或氢键)或分子间的(共价键或离子键)。导致胶原根据年龄变性的原因包括热能侵害、机械侵害、PH对胶原酶和MMP速率的影响、水化状态、以及可以“拉上”或“解开”的胶原微纤维的天然平衡的一般性破坏，所述破坏导致它们容易被MMP消化。尽管这些代表了多种侵害类型，但全部都是速率受温度控制的。此外，正常的胶原更新周期可以在〈37°C -43°C的温度范围内被调控。在较低的温度也会发生胶原的键的裂解，但是是以较低的速率。低水平的热裂解很多情况下与松弛现象相关联，在松弛现象中，键在没有分子长度的净变化的情况下重新形成。真皮重塑是在细胞和分子水平发生的生物物理学现象。胶原的分子收缩或部分变性涉及能量源的作用，其通过裂解三重螺旋的热不稳定的键使得分子的纵向轴线不稳定。因此，产生了打破基质的分子间键的应力。这实质上是细胞外过程，而细胞的收缩需要一段滞后期供成纤维细胞迁移和增殖至受损伤的区域。愈伤应答一般涉及初始的炎性过程，其包括处理细胞碎片的白血球或白细胞的渗透。随后是成纤维细胞在受伤位点的增殖和/或更新的增加，最终是可供沉积的胶原的增加。成纤维细胞分化为可收缩的肌成纤维细胞，后者是细胞软组织收缩的来源。细胞收缩之后，胶原作为静态支持基质沉积在拉紧的软组织结构中。就美观目的而言，这种初期的疤痕基质的沉积和随后的重塑提供了改变软组织的稠度和几何形状的途径。应用热能来引起损伤和修复的级联反应，以最终实现皮肤表面外观的改善，是本领域中已知的，然而目前可用的技术与已知的缺点相关联。例如，激光递送装置使用特定波长的光，所述特定波长的光穿透皮肤、与特定发色团结合、并且通过被称为选择性光热作用的过程从皮肤移除多种颜料和色素。激光器是大型的、昂贵的资本设备，仅仅处理皮肤中的特定问题或颜色、易于发生激光烧伤、留疤、能够导致色素沉着过多和/或过少并且可能导致使用者和患者发生眼外伤。强烈的宽频光照体系发生多重波长的光，并且同样通过选择性光热作用改善皮肤的变色，通过皮肤的加热非特异性地改善皮肤肌理。上述体系同样较大型和昂贵，皮肤肌理和皱纹的改善是很小的，并且同样存在皮肤烧伤、色素沉着过少或过多以及疤痕的问题。一般而言，电磁能量的应用通过表皮实现，渗透程度受限于表面的色素沉着因素和真皮层的组成。射频技术在皮肤处理领域也是已知的。RF技术使用电流来加热真皮，并刺激胶原和使皮肤结实紧致的弹性蛋白纤维的生产。然而，由于不能优化处理参数，该领域当前的发展状况中存在实质上的缺点。RF电流的应用在皮肤中产生与其他的热能递送技术相反的热梯度。RF电流的应用通过置于皮肤上的相距若干距离的电极进行。电流在电极之间传导，通过真皮，使得真皮的温度比皮肤表面的温度更快地升高。由于大多数皮肤参数测量装置被设计针对皮肤表面的测量，真皮的过度加热可能在发生后才被意识到。因此，在本领域中回避了不存在被设计针对控制内部加热的热淬灭、物理降温或其他技术情况下的通过RF电流的处理。然而，利用基因组学和蛋白质组学的生物技术的新进展，本发明人开发了针对评估RF电流在真皮的施用的效应的方法。具体地，本发明人筛选了一组被鉴定为涉及真皮胶 原基质、真皮炎症和重塑、和表皮分化的潜在的基因。通过分析和检验当经受特定的RF电流处理参数、条件和方案时，上述潜在的基因的不同调控，确定了基于所得到的基因表达谱的基因标签和基因芯片组分。递送给皮肤和/或皮肤层的能量可以是RF能量的形式，包括例如射频波和微波。示例性RF能量装置公开于以下美国专利中6，889，090 ;6，702，808 ;6，662，054 ；5，569，242 ;5，755，753 ;6，241，753 ;6，430，446 ;6，350，276 ;5，919，219 ;5，660，836 ；6，413，255 ;6，228，078 ;5，366，443 ;和 6，766，202。本发明的方法包括向哺乳动物皮肤区域涂敷第一个人护理组合物和任选地涂敷第二个人护理组合物的步骤。所述第一和第二个人护理组合物可以为多种形式，包括但不限于洗剂、霜膏、浆液、泡沫、凝胶、喷剂、油膏剂、面膜、棒状物、保湿剂、贴剂、粉末和/或擦拭物。在一个实施方案中，所述第一个人护理组合物在递送能量之前和/或期间涂敷。在一个可供选择的实施方案中，所述第二个人护理组合物在涂敷所述第一组合物和递送能量之后涂敷。任选地，本发明的方法可包括向皮肤涂敷第三个人护理组合物的步骤，其中所述第三组合物包含调理剂。在一个实施方案中，所述第三个人护理组合物在涂敷所述第一个人护理组合物之前涂敷。优选地，所述第三组合物在递送能量至少24小时之前涂敷。在一个可供选择的实施方案中，所述第一个人护理组合物每天涂敷两次，而能量每天递送一次，或者每周一次，或者每月一次。在一个实施方案中，每天两次将所述第一个人护理组合物涂敷到皮肤上，并且每周一次向皮肤递送能量。所述第一、第二和第三个人护理组合物可包含多种成分，其非限制性实例可存在于 The CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary an (!Handbook,第十版(2004 年)。本发明的组合物可包含50%至99. 9%的皮肤病学可接受的载体。本发明的载体为乳液形式。本文中，“乳液”通常包括含水相和油相。油可衍生自动物、植物、或石油，可以是天然或合成的，并且可包括硅氧烷油。乳液载体包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅氧烷包水包油乳液。在一个实施方案中，皮肤病学可接受的载体包括水包油乳液，或者水包硅氧烷。所述乳液还可以包含润湿剂，例如，甘油和非离子的、阳离子的和/或阴离子的乳化剂。合适的乳化剂公开于，例如，授予Dickert等人的美国专利3，755，560,授予Dixon 等人的美国专利 4，421，769 和 McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers,北美版第 317-324 页(1986)中。可在较大的数量变化范围内使用本发明的组合物来改善皮肤状况。涂敷到皮肤上的个人护理组合物的量可根据身体的位置和期望的有益效果而变化。示例性的量包括O.lmg/cm2 至 40mg/cm2。一个可用的施用量为 O. 5mg/cm2 至 10mg/cm2。在皮肤中或者在施用到皮肤表面上的组合物中，可同时产生温度变化。此温度变化是除由递送能量自身产生的任何温度变化之外的变化。例如，可在能量递送之前将皮肤加热，或者在能量递送之前、期间、和/或之后将皮肤冷却。使用处理之后的基因面板和基因标签，以及广泛的消费者调研，建立了方案的区 域，使得开发了最优化的处理区域的大小和最优化的处理时间。发现与本领域的教导相反，在大面积上使用装置并不是最好的处理方法。当过大的区域被处理时，开始的部分能够在消费者再次扫过其上方之前冷却和回复。如果处理的区域太小，消费者会冒过度处理和不必要的损伤的风险。此外，处理本身对消费者而言是高强度的工作，将处理分为小的区块使得消费者更容易完全地遵守方案。同样，如果消费者能够将与装置一起使用的个人护理组合物施用至较小的区域、处理该区域、然后移除任何残余的个人护理组合物，那么所述组合物将对消费者更有吸引力得多。将个人护理组合物施加至整个脸上，或者甚至是半边脸上，能够导致处理经历令人不悦。这继而对于消费者的依从性具有负面影响。现在看下图10，其中用虚线圆环标出了消费者62的鱼尾纹区域60，其发生在眼64的上方和下方并且邻近每一眼的外眼角。众所周知，随着人的变老，鱼尾纹区域60易于形成皱纹和细纹，并且易于遭受环境侵害。图11显示了区域A 70，其中区域A中显示的箭头展示了所述装置(未显示)的示例性处理途径。上文给出了处理时间。图10示出了区域B72，其位于消费者62的同一眼睛的上方，并且与鱼尾纹区域60交叠。显示了示例性的箭头，以展示可能的处理途径。通过以这种方式限定区域A 70和区域B 73，鱼尾纹区域60被处理了区域A和B的非鱼尾纹区域两倍的长度。这是一个重要的发现，因为在消费者需要处理的面部上，大多数的细纹和皱纹位于鱼尾纹区域。图13和14示出了消费者62的另一只眼睛64上的区域C 74和D 76。如同人们会预期的，这些处理区域与区域A和B实质上类似并以相同的方式被处理。一种替代的处理方案显示于图15和16中，其中在消费者62上显示了区域E 80和F 82。这些“C”型处理区域在每一次经过时只处理图10的鱼尾纹区域60—次，但较长的“C”型处理区域允许被处理的皮肤的每一区域在装置返回进行又一次的经过之前冷却少许。如此，消费者的舒适度增加了，但图10的鱼尾纹区域60只在这一个处理周期中被处理。第二个人护理组合物可任选地与上述方法一起使用。所述第二个人护理组合物可在使用所述第一个人护理组合物和热装置的连续处理周期之间使用。所述第二个人护理组合物优选包含至少一种不存在于所述第一个人护理组合物中的护肤活性物质。通过真皮的RF的应用和包括RF电流的应用的处理方案第一次可以被设计针对优化所期望的RF处理的效果。在分析和检验基因表达数据时，出人意料地发现，潜在的基因数据集能够被简化为三个子集，在优化处理方案以在不存在更加成问题的炎性细胞因子损伤应答的情况下，提供真皮胶原的增加和所期望的毒物兴奋的胁迫诱导的真皮重塑中，上述三个子集具有独特的作用。就本发明人所知而言，这代表了基因组学第一次被应用于使用RF电流技术的处理中。上述表达谱显示，受控的和最优化的应用导致积极的毒物兴奋的胁迫，所述积极的毒物兴奋的胁迫引起和维持所期望的真皮重塑，同时避免了与不合乎期望的生物学效应相关联的传统的损伤。本发明提供了新型基因芯片、基因标签、筛选方法和基于这些发现的可优化的方案。作为潜在的基因被研究的基因包括与真皮基质的完整性相关的基因(FBN1、FBLNl、TNXB, FNl、L0XL2、C0L3A1、COLlAl、ELN和LOXLl )、与真皮炎症弓丨起的重塑相关的基因( ΜΡ2、IL1A、HMP1、TNF、MMP1、MMP9、MMP3、S0D2 和 IL1B)和与表皮的屏障功能相关的基因(KRT2、KRT6A、CLDNU LOR, FLG、IVL、DRT10、AQP3 和 KRT14)。来源于对这些基因的表达数据的分析的子集如表I (真皮标记)、表2 (基质重塑标记，即，积极的毒物兴奋的胁迫引发者)和表3 (炎性细胞因子应答的标记，即，修复应答之外的损伤)中所列。基因表达谱提供了关于对一组状况的细胞应答的信息。基因包含针对制造信使RNA (mRNA)的指令。然而，在任何给定的时间点，每个细胞仅从其携带的基因的一部分制造mRNA。如果一个基因被用于产生mRNA，则将其称为是“打开”的，否则就将其称为是“关闭”的。术语“调控”是指引起不同于基因的对照状态的转录状态。例如，“上调”可以包括 仅仅打开，或者可以指提高转录速率至高于来源于对照或参考条件的基线速率。在表达谱分析中，两种或更多种实验条件中表达的mRNA的相对量被测量。改变的mRNA水平暗示对由该mRNA编码的蛋白质的需求的变化。例如，相应于酶的底物在细胞环境中水平的升高，观察到酶催化剂或辅因子的升高的转录。一般来讲，基因表达谱包括在改变的实验条件下展示显著差异的那些基因。这通常是某些数据集(其可以包括整个基因组)的子集。对于一种类型的细胞而言，其组合的表达模式是给定条件的独特特征的一组基因，构成了这种条件的基因标签。基因标签可以被用于，例如，选择可以受益于特定处理的患者，或者设计用以使所期望的特征最大化的处理方案。潜在的基因数据集的基因表达谱可以使用微阵列来测定。示例性的cDNA微阵列可商购获得，并且可以购自诸如 Agilent Technologies, Affymetrix Inc. (Santa Clara,Calif.), Nanogen (San Diego, Calif.)和 Protogene Laboratories (Palo Alto, Calif.)的公司。同样可以被用以产生本发明的方法中所采用的表达谱的特异性杂交技术描述于美国专利公开 5，143，854 ;5，288，644 ;5，324，633 ;5，432，049 ;5，470，710 ;5，492，806 ；5，503，980 ;5，510，270 ;5，525，464 ;5，547，839 ;5，580，732 ;5，661，028 ;5，800，992 中；上述公开以引用方式并入本文；以及 WO 95/21265 ；W096/31622 ；W0 97/10365 ；W0 97/27317 ；EP 373203;和EP 785280中。一般而言，在这些方法中，针对每一种其表达被检测的表型决定性基因包括了一条探针的“探针”核酸的阵列，与如上文所列的靶核酸相接触。接触在杂交条件如严格杂交条件下进行，然后移除未结合的核酸。所得到的杂交的核酸的模式提供了关于被检测的每种基因的表达的信息，其中所述表达信息是关于基因是否被表达以及，通常地，以何种水平表达(当表达数据，即表达谱，可以是既定性又定量的时)方面。作为另外一种选择，所述表达谱可以通过定量PCR或针对检测mRNA的其他定量方法测定。本发明的一个实施方案提供了基因面板，所述基因面板包含响应于在哺乳动物皮肤的组织体积中的射频电流的产生而在所述哺乳动物皮肤中被调控的基因，所述射频电流足够将所述组织体积加热至处理温度。至少一种基因选自表I或表2，并且至少一种基因选自表3。在具体的实施方案中，至少一种基因选自这三个表的每一个。根据本发明的所有的基因面板均预期包括至少一种选自表3的基因，因为这些基因表达没有变化表明没有“坏的”损伤应答。探针可以被设计为针对组成本发明的基因芯片的每种基因，以构建非常特异性的微阵列，针对设计、筛选、适应或监测针对所期望的效应的处理方案，或针对在接受处理的受试者中验证所述处理方案。设想了微阵列，所述微阵列包含一组能够与组成如本发明所述的基因面板的基因杂交并检测所述基因的固定化核酸探针。如本文所用，“探针”是指寡核苷酸、多核苷酸或DNA分子，无论是天然存在的还是合成产生的，其能够特异性地与具有与该探针互补的序列的核酸杂交。本发明的探针具体是指在DNA微阵列基底中与固体支持体相连接的寡核苷酸。探针可以是单链的或双链的。探针通常包含15-25个或更多的核苷酸，尽管它可以包含更少的核苷酸。本文的探针被选择为与特定的靶核酸序列的不同链互补，并因此必须是充分互补的，以便能够在一组预先确定的条件下与它们各自的靶链特异性地杂交。因此，探针序列不必反映出靶标的精确互补的序列。例如，非互补的核苷酸片段可以被连接至探针的5’或3’末端，而所述探针序列的其余部分是与靶链互补的。作为另外一种选择，非互补的碱基或较长的序列能够散布 在探针内，只要所述探针序列与靶核酸的序列之间具有足以据此特异性地退火的互补性即可。本发明的另一个实施方案包括向哺乳动物皮肤提供有益效果的方法。所述有益效果包括在不存在损伤皮肤的炎性细胞因子应答的情况下，在哺乳动物皮肤的真皮层中诱导胶原的形成和/或真皮重塑，并且所述方法包括在处理周期内在所述哺乳动物皮肤的组织体积中产生射频电流，所述射频电流足够将所述组织体积加热至处理温度，同时避免表3中所列基因的表达的上调。在一个处理周期中，RF电流可以产生多次。如本文所用，术语“进行处理”和“处理”等一般是指获得所期望的美容或美观效果，所述效果通过靶向的生物学应答证实。如本文所用，“处理”涵盖了在哺乳动物尤其是人类中的处理，并且包括(a)防止或避免美容上不合乎期望的皮肤状况的发展，例如细纹、皱纹、色素沉着过度的斑点、以及由于老化或环境相关的衰老或对皮肤的影响造成的其他皮肤异常，(b)抑制、减轻或延迟美容上不合乎期望的皮肤状况的出现；(c)逆转美容上不合乎期望的皮肤状况或导致其复原。在一段处理时期中，可以进行一个或多个根据本发明的处理周期。用以实现所期望的应答的处理周期在持续时间方面可以尽可能地短。在具体的实施方案中，处理周期为约一分钟或更少，而在其他具体的实施方案中，处理周期为大于约一分钟。在其他具体的实施方案中，处理周期持续介于约I和约6分钟之间，而在其他实施方案中持续介于约2和约6分钟之间。根据本发明的处理时期包括一个或多个处理周期，并且在具体的实施方案中为至少一周并且包括至少一个处理周期。在其他具体的实施方案中，所述处理时期为一周和12周之间。在更具体的实施方案中，所述处理周期为3周和8周之间。在某些实施方案中，处理时期中的每一周包括一个和六个之间的处理周期，尽管在本领域中应当了解，这可以随着接受处理的个体的特性而变化。一般而言，尽管RF电流的施用在真皮中导致了比在皮肤表面更高的温度，皮肤的温度在表面被最方便地和非侵入性地测量。因此，在某些实施方案中，处理温度(本文中定义为RF电流所流经的组织体积的温度)实现了小于约45°C的在所述组织体积之上的皮肤表面温度。在更具体的实施方案中，所述处理温度实现了约37°C和约43°C之间的在所述组织体积之上的皮肤表面温度。根据本发明的所期望的有益效果可以通过从得自RF电流所流经的组织体积的样品提取mRNA ;和测定由至少一种选自表I和/或表2的基因和至少一种选自表3的基因组成的基因面板的表达谱进行评估。表达谱反映出选自表I和/或2的基因的上调以及选自表3的基因表达实质上没有变化，即表明提供了有益效果。一般而言，根据本发明的基因的调控反映在表达倍数变化数据之中。在本领域中已知存在许多针对分析基于微阵列的实验以鉴定在不同条件之间差异表达基因的方法，并且已知对方法的选择可以影响鉴定的基因的集合。倍数变化似乎提供了最具可重复性的结果。倍数变化可以被定义为对照物平均值和处理组观察值的平均值的比率(或者是对照物平均对数值和处理组数据平均对数值的差值)。因此，倍数变化为I表示相对于对照物观察值没有变化。正的倍数变化表示经过一段时间表达的升高，本文中称为上调，负的倍数变化表示经过一段时间表达的降低，本文中称为下调。倍数变化的显著性可以通过普通的统计学方法确定。根据本发明的某些方面，有益效果可以通过调整处理温度和/或其他处理参数来优化，所述调整响应于在其中选自表I和/或表2的基因的上调最大化，同时选自表3的基因的表达维持实质上不变的表达谱。本发明的处理方案可以包括维护处理，其中有益效果通过一个或多个维护处理被维持超过所述处理时期，每一维护处理包括至少一个维护周期。本发明具有创造性的皮肤处理方案设想通过经由手持式RF电流递送装置电传导的RF电流应用热能。根据本发明的优选的RF递送装置，以在置于皮肤上的相距若干距离的电极之间电传导的电流形式递送RF。实现本发明的有益效果的递送装置通过组织体积传导射频电流，而不存在电磁波谱的可见光或红外频率中的电磁辐射、不存在指向所述组织体积的补充的单色或多色光源、而且不存在物理降温。本发明的某些实施方案提供了评估任何能量递送装置或能量递送技术的组合在提供根据本发明的有益效果中的功效的能力。因此，评估被设计成通过加热皮肤而向所述皮肤提供有益效果的能量递送装置的处理功效的具体方法包括通过应用所述能量递送装置处理所述皮肤；从所述处理后的皮肤的样品中提取mRNA ;以及产生如本发明所述的基因面板的表达谱。如下文的实施例3中所示，存在RF电流递送装置，其包括能够被算入以产生根据本发明的表达谱的参数规格界值。一种适合的装置是由Syneron制造的。并非被设计为实现本发明的基因组学应答目的的装置的实例是由Ultragen Ltd制造的一种手持式个人使用的RF递送装置，其在欧洲以STOP 品牌发布。这种装置也被显示在图3中用于比较，其未能引起表I和2中的基因的上调。这种装置的规格被设计为适合基于应用在较大的皮肤面积上的实质上较少的热能的提供的方案，并且不能达到实现通过根据本发明的装置和方案所实现的积极的毒物兴奋的效应所需的水平。根据本发明的另一个实施方案，提供了筛选面部皮肤处理方案的方法。所述方法在向哺乳动物皮肤提供胶原和/或真皮重塑有益效果而不会刺激损伤皮肤的炎性细胞因子应答方面的功效而筛选。所述方法一般包括根据处理方案处理面部皮肤；从所述处理后的面部皮肤的样品提取mRNA ;针对如本发明所述的基因面板产生基因表达谱；将所述基因表达谱与参考谱进行比较；以及在所述表达谱反映出选自表I和/或表2的基因的上调以及选自表3的基因的调控的实质上缺乏时，确定所述面部处理方案是有效的。在具体的实施方案中，所述面部皮肤处理方案包括在处理周期内使用射频电流产生装置产生通过所述面部皮肤的第一组织体积的脉冲射频电流。所述处理方案可以包括在所述处理周期中，移动所述射频电流产生装置并产生通过所述面部皮肤的第二组织体积的脉冲射频电流。在筛选方法中，针对与靶标处理区域尤其是面部的特性的一致性选择了皮肤的区域。面部皮肤的美容方面脆弱的区域包括眶周和口周的区域。因此，被称为耳周皮肤的耳朵周围的面部皮肤，结构上与处理靶标区域接近，但就可能由微量活组织检查程序导致的损害而言不容易被看见。因此，在本发明需要进行活组织检查的方面，所需要的样品通过对处理后的耳周皮肤的活组织检查获得，而参考通过对处理前的或未处理的耳周皮肤的活组织检查获得。一般而言，所述处理前的或未处理的耳周参考皮肤包括实质上邻近所述处理后的耳周皮肤的皮肤。在非常具体的实施方案中，选自表I和/或表2的基因的表达谱展现出统计学上大于所述参考一倍的倍数变化。要注意的是，尽管由于面部皮肤造成了最大的美容处理挑战(因为它最容易表现出老化和环境相关的衰老和损伤的效应，而且它最初较薄并且比身体其他区域的皮肤的更脆弱)而在例证性的实施例中强调了面部皮肤，但本发明还可以向面部皮肤之外的皮肤提供有益效果。此外，对于美容处理技术的消费者，面部皮肤是具有最主要的美观重要性的区域。在某些实施方案中，通过与脉冲射频电流的产生协同地向面部皮肤应用美容活性物质或组合物，由RF电流的应用提供的有益效果可以被扩大或增强。所述活性物质或组合物可以具有对根据本发明的基因表达谱的强化或协同效应。适合的美容活性物质的非限制性实例包括视黄醇丙酸酯及其衍生物、咖啡因、透明质酸、和一般的植物提取物。就处理周期、处理时期、处理温度和递送装置而言，根据本发明的筛选方法包括与根据本发明的处理方法实质上相同的参数，所述参数就所期望的筛选界值而被调整。根据本发明的另外的实施方案，提供了适用于鉴定美容性皮肤有益效果的差异表达基因的基因标签。所述有益效果包括在不存在损伤皮肤的炎性细胞因子应答的情况下，在哺乳动物皮肤的真皮层中诱导胶原的形成和/或真皮重塑，所述基因标签包括选自表I、表2和表3的每一个中的至少一种基因。一般而言，基因标签是从与特定特性、性状或生物学功能相关的基因的数据集获得的基因的子集。基因标签可以从基因数据集的全部或部分获得，并且根据本发明的标签可以包含来自至少约两种基因、或者至多组成总的数据集的数量的任何数量的基因的信息。当所述数据集的子集被使用时，所述子集可以包括上调的基因、下调的基因、实质上未被调控的基因或它们的组合。下列的实施例被提供用于显示本发明的多种实施方案的某些特征和优点，并且不应被理解为限制了其范围。
实施例实施例I :处理规稈本实施例阐述了对面部皮肤的耳周区域的处理，处理的目的是进行基因组学和组织学的评估。因此，处于控制目的，全部的处理均在临床设置下由技术人员执行。对处理范围内的四个区域进行了处理，处理总计16分钟，每一区域4分钟，每周三次进行了六周。该规程根据的是采用受试者自身对照设计的面部/颈部分区研究，处理仅应用于一侧的耳周区域，而由凝胶加上未通电的设备组成的假性处理被应用于另一侧的对应的耳周区域。用热成像照相机监控处理，以确保靶皮肤表面温度在第一分钟内达到40-43°C，并在每次4分钟的处理中保持但不超过。处理位点位于耳朵下方正中。该位点大约I. 5英寸宽，约4英寸长。如果处理皮肤的区域太干燥或变得过热，可以施用额外的凝胶。受试者的面部和颈部是洁净的，并且没有化妆水、香水等。头发被从处理区域处剪短。装置处理I.挤一下的量(大约I. 4g凝胶)被施用至处理位点，涂布均匀，避免摩擦。如果皮肤变得过热，如受试者所表示的，处理期间必要时可以将附加的一挤的量的凝胶施用至所述处理区域上方的面颊，以使皮肤冷却。 2.打开装置并将计时器设定为4分钟。3.装置的施用头被施用到皮肤上，并采用来回运动和轻微触碰沿处理位点移动。操纵装置的头部横跨处理区域的同时维持连通性。与皮肤的适当接触通过施用装置上的透镜显示，其应当持续闪红光来指示接触。4.热照相机图像在处理期间被监控。在30-60秒内，处理区域内的皮肤达到40-43°C的理想温度。热图像上的色彩模式表示了温度。一般而言，随着装置变热，施用装置被快速地横跨皮肤移动，以避免因升高的温度导致不适。随着处理继续进行，移动被减慢以维持理想的温度。受试者被提醒，装置将令人感觉热，但不会被灼伤。5.如果热图像显示实心的红色区域，则温度超过了 43°C。通过下列方式控制温度提高来回运动的处理速度；略微增加处理区域的大小；交替进行来回运动和8字形运动模式；或者通过使施用头接触沉积在面颊上的针对这一偶发状况的额外的凝胶，而加入更多的凝胶。6.如果处理区域没能达到理想的温度，或者其变凉了，应当使来回运动减慢，直到所述处理区域的大部分处于目标温度。实施例2 :活组织检杳规稈本实施例阐示了针对收集根据本发明的某些方面的评估和监测目的所用样品的相对温和的活组织检查规程，以及本文所公开的支持数据。在30名成年女性受试者中使用RF电流递送装置进行了临床的活组织检查研究。在面部皮肤的耳周(耳朵周围)区域提供了处理。耳周皮肤作为眶周皮肤的适当的替代品在美容领域是已知的。处理在临床上使用Syneron V8装置(参见实施例3)进行，四分钟的加热谱图作为目标谱图。受试者每周接受三次处理，总计进行六周。进行了活组织检查，以检测皮肤的组织学根据处理的变化，和产生基因组谱。活组织检杳流稈=从颈部的左侧和右侧的耳周区域(该区域位于耳朵的正下方)获取了 4_的活组织样品。使用30线规的无菌针头，将含有肾上腺素的包含2%赛罗卡因的麻醉剂注射至待活检的皮肤下。一旦受试者表示该区域已麻木，即采用标准的无菌操作收集适当大小的钻取活组织样品，然后通过缝合封闭。必要时，20%的氯化铝水溶液被用于体内平衡。活组织检查之后，监测缝合处的正常愈合，并在7天后拆除缝合线。活组织检杳后样品处理:活组织检查的组织被分为两个分别的样品，一个针对基因表达检测，而另一个针对组织学评估。样品以平行于从角质层画向真皮的线的线条被分为相等的两份。样品的处理按照行业标准进行。实施例3 mRNA的提取和分析本实施例阐述了支持包括基因芯片、基因标签和指导RF递送方案的设计的生物学模型的发现在内的本发明的某些实施方案的RNA生物标记的鉴定和分析。如上文所述从耳朵正下方的面部/颈部的两侧，根据实施例2获取了 4mm的活组织样品2次，一次在最终的处理之后24小时，一次在处理之后4周。 活组织检查样品被转移至包含I. 5ml组织储存试剂(RNsolution,invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, CA)的 2ml 离心管中。离心管在 2_8°C冷藏过夜。移除储存试剂，并将样品至于-80°C冰箱中直到进行处理。临处理前，从冰箱中移出样品，向每一管加入1.5ml苯酹和异硫氰酸胍(ΤΚΙζοΓ reagent, Invitrogen, LifeTechnologies, Carlsbad, CA)的单相溶液和一个 3mM 碳化鹤小珠(3mM TungstenCarbidebeads, Qiagen,目录号69997)。在混合研磨器(Quiagen Inc.)中立即均质化样品，以30/秒进行四次3分钟的处理，每次之后翻转接头。以12，OOOrpm离心样品10分钟，以除去杂质。然后，将上层清液转移至预先旋转过的Phase Lock gel重管(Phase Lock gel heavytubes, Eppendorf, New York, NY,目录号 0032-005-152)中，加入 300 μ L 氯仿(Sigma),剧烈震荡，避免过度涡旋。以12，OOOrpm离心样品10分钟，之后将上层清液转移至新的2ml离心管中。通过加入800 μ I 70%乙醇调节结合条件，涡旋管子以混匀，然后短暂旋转。830ml样品被转移至真空歧管中的RNeasy微型离心柱中，并应用真空。剩余的样品(大约830mil)被转移至相同的RNeasy柱上并应用真空。通过依次移取700 μ I和500 μ I的缓冲液RWl至RNeasy柱上并在每次清洗后应用真空，除去了污染物。上述RNeasy离心柱被转移至新的2mil收集管中，并以14，OOOrpm离心管子2分钟，将柱子转移至新的I. 5ml收集管中。从每一柱子的内脊抽吸残余的乙醇。三十μ I的经预热的不含RNA酶的水被直接移液至RNeasy膜上，孵育膜5分钟，然后以14，OOOrpm离心2分钟。收集洗脱液，得到溶于水的即用型的RNA。分离之后，使用可购自Agilent Technologies, Inc. of Santa Clara, CA 的 RNA6000Nano LabChip* Kit#5065-4476 测定 RNA 产量。通过一步法 RT-PCR 评估 RNA。就RT-PCR生物标记分析而言，RNA被稀释至5ng/孔的终浓度。使用RT-PCR 试剂盒(QScript 0ne-St印 Fast MGB qRT-PCR 试剂盒，可购自Quanta BioScience, Inc. , Gaithersburg, MD)将纯化的 RNA 转化为 cDNA。然后将五百纳克的RNA与QScript酶/缓冲液预混液混合，并按照试剂盒的说明书在热循环仪上运行。然后将一 μ I的所得到的cDNA与Quanta Perfecta Master Mix混合，均勻分配至包含预先验证的针对下列基因的引物的定制阵列平板(Custom RT Profiler PCR Array,可购自 SABiosciences, Corp.，Federick, MD) :KRT2、KRT6A、CLDNl、LOR、FLG, IVL、KRT10、AQP3、KRT14、FBNl、FBNLl、TNXB, FNl、L0XL2、C0L3A1、COLlAl、ELN、L0XL1、 ΜΡ2、ILIA、TIMPU TNF, MMPl、MMP9、MMP3、S0D2和IL1B。然后密封上述阵列平板，并在热循环仪(StepOnePlus Real-TimePCR System Upgrade,来自 Applied Biosystems, Inc. FosterCity, CA)上运行。数据分析使用由SABiosciences of Frederick, MD提供的数据分析软件进行。上文所列的27个编译基因在24小时和4周的靶点时间的表达倍数变化数据分别如上文的图4A、4B和图6A、6B所示。与真皮基质相关的基因被分组为90和91，与真皮炎症重塑相关的基因被分组为92和93，与表皮分化相关的基因被分组为94和95。示例性基因的倍数变化数据如图5A胶原1A1、5B弹性蛋白、和图7A胶原IAl和7B弹性蛋白所示。请注意许多的胶原IAl基因和弹性蛋白基因之间的共调控。对倍数变化数据进行了检查和分析，对其的分组令人吃惊地发现，当表现出极少的响应于所述处理的调节的基因被分离(ILIA、ILlB和TNF)时，它们包括炎性细胞因子应答基因，而与胶原的合成和更新以及真皮重塑相关的基因在处理条件下被上调。根据倍数 变化数据选择的基因相应地列表于下文的表1、2和3中。此外，还令人吃惊地发现，在24个月时处理方案对基因表达的积极影响，在处理后I个月时维持几乎不减弱。对于维持基因组学效应至超出上述的时间，维护处理可能是需要的。预期基因表达谱反映出在翻译产物中下游的上调。尽管所观察到的倍数变化可能是相对低的，在较长时期中某些蛋白质和酶的合成的持续上调，被认为向皮肤赋予了实质上的持久的美容有益效果。实施例4 :个人护理组合物下列是针对伴随本发明的装置使用的示例性个人护理组合物。


通过将第一个人护理组合物施用至期望调节的皮肤区域的步骤调节哺乳动物皮肤状况的方法。所述第一个人护理组合物包含凝胶组合物。在另一个步骤中，将能量递送至所述真皮以加热所述真皮中的胶原，使得所述真皮中经加热的胶原加热所述表皮和角质层直到所述角质层达到约37℃至约48℃的外部温度。然后控制至真皮的能量递送以将所述角质层的温度维持在约37℃至约48℃的范围内。