专利名称：屈洛昔芬和氯吡格雷的组合的制作方法屈洛昔芬和氯吡格雷的组合本发明涉及包含屈洛昔芬和氯吡格雷的固定剂量组合的药物的组合物和用途。许多中老年流行疾病牵涉在胚胎和出生后发育早期期间形成的健康组织结构的逐渐损失。例如，在冠状动脉疾病中血管壁的同心三层结构被动脉粥样硬化斑块逐渐发展所破坏，该斑块包括胆固醇、平滑肌细胞、钙、细胞外基质和免疫系统的细胞。在自身免疫病症中，抗体针对自抗原的作用介导组织结构的慢性破坏。类似地，神经变性病症比如阿尔茨海默氏病的原因是不溶细胞外基质蛋白质聚集体的沉积和活化免疫细胞的聚焦募集(focal recruitment)。十多年前,我们提出对宽范围成熟组织(adult tissue,成人组织,成年组织)的健康结构的维护是活性过程，并且转化生长因子类型β (TGF-β)超家族中的细胞因子是该活性维护的重要介导物(参见例如Biochem Soc Trans. 1995May; 23 (2) :403-6;BiolRev Camb Philos Soc. 1995Nov; 70 (4) :571-96) 该命题，称为保护性细胞因子假设，最 初是有争议的，但是随后得到各式各样的实验数据的支持(参见，例如，ArteriosclerThromb Vasc Biol. 2004Mar; 24 (3) : 399-404及其参考文献)。例如，在使得小鼠部分缺乏TGF-β (通过tgfbl基因的杂合缺失或者给予中和性抗体或可溶受体)的情况下，它们对动脉粥样硬化的易感性显著增加的(J Cell Sci. 2000Jul; 113(13) :2355-61;Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002Junl;22(6):975-82;Circ Res. 2001Nov 9;89(I0) :930-4; Blood. 2003Decl; 102 (12) :4052-8)。类似地，基因修饰动物中降低的 TGF-β水平也显示会增加患癌(例如，Nat Med. 1998Jul ;4(7) :802-7)和自身免疫性疾病(JAutoimmun. 2000Feb; 14 (I) :23-42)的倾向。如果降低的TGF-β水平使得个体易患与成熟组织结构逐渐损失有关的疾病，比如动脉粥样硬化、自身免疫性疾病和神经变性疾病，那么增加TGF-β水平的试剂应相应地具保护作用(参见例如Nat Med. 1996Apr; 2 (4) : 381-5; Curr AlzheimerRes. 2005Apr;2(2):183-6)。然而，不幸地，过度的TGF-β水平可以与降低的水平一样是损害性的。细胞因子TGF-β家族的成员是已知最有效力的细胞外基质形成诱导剂。作为结果，如果TGF-β水平变得过高，那么组织结构则通过高度增生的基质蛋白比如胶原或纤维连接蛋白产生而被破坏，这最终破坏构成组织的细胞间的有序关系(参见例如Proc Natl Acad SciUSA. 1993Novl5;90(22) :10759-63中过度的TGF-β对血管壁结构的效果)。因而，明显地，预防与成熟组织结构损失有关的疾病的最佳干预将是给予能够将TGF- β水平保持在最佳范围内的一种或多种药剂。直接给药TGF-β蛋白质不太可能实现该标准与大多数蛋白一样，TGF-β显示低劣药代动力学(给药数分钟内就自血液清除(J Clin Invest. 1991 Jan; 87 (I) : 39-44))，因此需要连续给药以防止蛋白质组织浓度出现波峰和波谷而使其水平超出所希望的最佳范围。与之相对，对细胞产生TGF-β的刺激利用天然调节系统，其防止(在普通环境下)这种纤维发生细胞因子的过度活性形成累积。TGF-β作为潜在前体产生，其不具有已知的生物学活性。该前体由TGF-β基因产品的二硫键连接的二聚体组成，其各单体发生在成熟细胞因子与LAP (或潜伏-相关肽)之间的蛋白水解裂解。然而，所述二聚体LAP保持非共价地与成熟细胞因子结合，而该复合物无法结合至常规TGF-β受体。一旦释放进入细胞外环境(可能经由共价或非共价相互作用与一系列不同TGF-β结合蛋白结合)，所述潜在前体则经历活化步骤。宽范围的条件，至少在体外，引起LAP(包括施加热、极限pH、促溶剂、蛋白酶和特定的蛋白质蛋白质相互作用，例如与结合素)中的构象变化，这导致非共价复合物分裂。所述过程说明于图I中。该活化过程是紧密调节的并且发挥许多重要功能(I)其使得TGF-β通过一种细胞类型制得，然后在远处位点的细胞外基质中局域化，其中其随后得以活化从而对附近细胞发挥效果；(2)其使得宽范围的因子可以动态控制TGF-β活性的水平，其范围比如果仅调节基因转录、翻译和分泌可能的范围更宽；(3)其使得反馈控制可以防止危险地高水平TGF-β活性累积。一种所述正反馈回路由蛋白酶抑制剂纤溶酶原活化剂抑制剂-I(PAI-I)介 导。在大多数细胞中，PAI-I的水平在转录水平经由常规TGF-β细胞表面受体受TGF-β 活性显著地调节(J Biol Chem. 1991Janl5; 266 (2) :1092-100)。作为结果，随TGF-β水平升高，PAI-I产生水平也升高。熟知PAI-I充当TGF-β活化抑制剂(J CellB i ο 1. 1990Aug; 111 (2) : 757-6)，但是对介导抑制的精确分子机理仍有争议。可能的是，PAI-I抑制蛋白酶(所述酶牵涉潜在TGF-β前体的初始产生期间于LAP与成熟细胞因子之间的细胞内裂解)，或者抑制裂解LAP以释放活性细胞因子的酶(还是最可能为蛋白酶)(参见Bioessays. 2006Jun; 28 (6) :629-41中对这些问题的讨论)。由于PAI-I产生受TGF- β活性刺激，且其本身抑制TGF- β活化，这形成高效的反馈回路，其防止TGF-β活性水平在具体组织中升至过高。然而，由于TGF-β刺激其它蛋白酶抑制剂(例如，金属蛋白酶的组织-抑制剂；TIMPs)产生，可能的是存在多个平行反馈回路，它们一起提供充足的保护以防止潜在前体的过量产生。不幸地，直接给予活性TGF-β蛋白质(药理学给予或用改变的编码细胞因子的自发活性形式的TGF-β基因进行基因操作)绕过这些调节过程，并允许TGF-β活性的过度水平积累。在所述研究中，通常观察到蔓延的组织纤维化和组织结构的快速破坏。与之相对，给予刺激潜在TGF- β前体产生的试剂能够增加任意组织中的TGF- β活性，所述组织中的水平是亚最佳的，不具过度活性及其导致的纤维发生风险。出于上述原因，我们假设TGF-β产生刺激物是有用的新类型治疗剂，其用于治疗与成熟组织结构损失有关的疾病，包括但不限于，心血管疾病、自身免疫性疾病和神经变性疾病(参见例如2006年8月I日颁布的US专利US7, 084. 171 ；2002年6月25号颁布的US6, 410，587)一种所述类型的TGF-β产生刺激物是三苯基乙烯(TPE)衍生物，比如他莫昔芬(ΤΜΧ)。最初作为雌激素受体调节剂开发的TPEs具有多种药理学活性。除了结合至两种雌激素受体蛋白(ER □和ER □)之外，各种TPEs已报告还充当ATP-结合盒转运蛋白的抑制剂(Biochem Biophys Res Commun. 1997Jun 27; 235 (3) : 669-74),酶固醇□ 7，8 异构酶(J Clin Oncol. 1995Dec; 13(12) :2900-5)和 P-糖蛋白转运蛋白(Biopharm Drug Dispos. 20040ct;25(7):283-9),以及充当抗氧化剂(BiochemSoc Symp. 1995;61:209-19)。然而，此外已报告许多TPEs，最特别是他莫昔芬会刺激TGF-β在各式各样细胞类型中的产生，其在体外(Am J Clin Oncol. 1991;14Suppl2:S15-20;Biochem J. 1993Aug 15; 294 (I) :109-12)和在体内(J Steroid Biochem MolBiol.1993Dec;47 (1-6):137-42;Nat Med. 19950ct;I(10):1067-73)。作为TGF-β产生刺激物的这种活性为我们带来TPEs比如他莫昔芬用于预防与正常成熟组织结构损失有关的疾病的用途，所述疾病包括心血管疾病(比如冠状动脉疾病和再狭窄)，以及自身免疫障碍和神经变性疾病(例如US7，084，171和有关专利中)。过去十年来，已收集各式各样的临床数据，其支持我们已授权的权利要求(例如 US5, 472，985 ；US5, 595，722 ；US5, 599，844 ；US5, 770，609 ；US5, 773，479 ；US5, 847，007 ；US5, 945，456 ；US6, 117，911 ；US6, 166，090 ；US6, 197，789 ；US6, 251，920 ；US6, 262，079 ；US6, 395, 494 ;US6，410，587和US7，084，171，其各自通过援引并入本文):TPEs，尤其是他莫昔芬能够用来预防与正常成熟组织结构损失有关的这些疾病，尤其是预防死于冠状动脉疾病所继发的心肌梗死。例如，Braithwaite和同事发展了对用他莫昔芬治疗以预防乳腺癌的超过27000例女性的心血管结果的统合分析(meta-analysis),并且发现在慢性他莫昔芬使用者死于心肌梗死的0. 67的相对风险(J Gen Intern Med. 2003Nov; 18 (11) : 937-47)。这 意味着33%的风险降低，如果其在较高风险人群比如男性中重复，可以仅在英国每年引起至少减少10000例的由于心肌梗死的死亡，而在美国该数量可番五倍。类似地，Clarke和同事展示他莫昔芬治疗改善内皮功能，其是动脉粥样硬化疾病负担的代替标记物(surrogatemarker) (Circulation. 200IMar 20; 103 (11) : 1497-502)。这些结果已总结在我们最近的综述中(Grainger&Schofield, Circulation(2005) 112:3018-24,通过援引将其并入本文)。不幸地，尽管在至少一种与正常成熟组织结构损失有关的疾病中效力得到上述阳性证明，他莫昔芬并未得到除治疗和预防ER-阳性乳腺癌(该应用主要取决于其作为雌激素受体调节剂的备择药理学功能)之外的广泛使用。明显缺少热情的原因是伴随他莫昔芬使用的繁重副作用。不令人惊讶的是他莫昔芬具有一系列效果(某些有益，其它不那么有益)，原因是对其以及TPE类其它成员所报告的大量药理学和分子相互作用。目前使用的小分子药剂中很少真正对其期望靶标有特异性，其副作用频繁限制应用其他高度有效的药物。在药物设计和开发期间能够采用许多一般途径来限制副作用的影响。一种途径是设计或鉴定全新的组合物，其保留最初试剂的期望的有益效果，但是更具特异性并且具有更专一的分子相互作用和药理学影响。然而，该途径具有几种主要缺点首先，不存在鉴定所述组合物的一般成功方法，并且鉴定有副作用的甚至最初的试剂可以是困难、耗时和昂贵的。其次，副作用中的某些或全部可以是负责靶向有益效果的相同分子相互作用的直接或间接结果。在这些情况下，几乎不可能使有益效果特征独立于副作用。在其它情况下预先成功使用的第二途径是将多于一种活性成分组合为单一组合物，该组合具有单独给予的各组分的优异特性，或者是将相同两种成分给予相同个体但是时间不同。组合途径成功的两个不同概念是在一个方案中，具有相似效果但分子作用机理不同的两种药物得以组合，使得所述两种成分显示对靶标因子的增效影响。通过用增效地起效的两种成分，可能给予实现相同有益效果的明显较低剂量的各个成分。如果副作用不同样显示增效增加(条件是它们取决于不同于靶标效果的分子相互作用，一般并非如此)，则上述组合物可能提供相同有益效果，但副作用负担减少。实际上，即使两种试剂仅显示加合(与增效相反)效果，那么对于相同程序的有益效果组合的组合物仍将显示减少的副作用(尽管将它们作为单一组合物而不是作为两个分开治疗给予的益处可能更不显著)。存在所述组合物的许多实例，其将两种活性成分组合为单一制剂。例如，Plachetka等人(1999年2月16日的US专利5，872，145)发明5-HT受体激动剂与镇痛药特别是NSAID的组合，用于治疗偏头痛。两种活性成分以这样的剂量给予，其低于通常考虑作为各分开试剂最小有效剂量，从而该组合一起实现一般与给予更高剂量单一试剂更相关的效力水平，所述单一试剂各自在最小有效剂量以上的剂量伴随不希望的副作用。在第二方案中，组合物中的第二活性成分期望抵消第一活性成分的副作用，从而该组合是同时有效且安全的。这种组合物较不常见，但是专利实例在某些应用中已很成功。例如，使用仅雌激素的激素替代疗法导致不希望的子宫肥大，但是雌激素与孕激素的组合导致能够在子宫完好的女性中安全使用的组合片剂，尽管无反对的雌激素在用于子宫切除术女性中同样有效(其中副作用无法自行体现)。在该实例中，将两种活性成分组合为单一组合物明显具有显著的临床优势，原因是副作用足够严重，甚至可以(在子宫内膜癌情况下)威胁生命，单一组合的组合物阻止患者服用一种活性成分而不服用另一种的可能性。 TPEs比如他莫昔芬具有作为TGF-β产生刺激物的良好活性，但是已鉴定限制其较广应用的许多副作用。最重要地，他莫昔芬于最一般使用剂量(20mg/天)的慢性使用引起小但显著的血栓栓塞事件增加，其中部分可以致命。在慢性他莫昔芬使用者中的该增加的促凝血倾向还可以导致他莫昔芬使用者中致命性脑血管意外(卒中)的增加(J GenIntern Med. 2003Nov; 18 (11) : 937-47)，其中90%是缺血性的(与出血性起因相反)。这些促凝血副作用在TPEs预想用于预防或治疗冠状动脉疾病的心血管情况下是特别考虑因素，原因是患者在开始治疗之前已经可以显示促凝血倾向。另外，增加冠状动脉疾病风险的患者也可能增加缺血性卒中风险。还可以考虑其它副作用，比如增加的子宫内膜癌风险，特别是在用TPEs治疗女性流行疾病比如自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎)的情况下。还存在更次要的副作用，比如热潮红和TPEs激素活性的其它结果。这些更次要的副作用显著影响患者的生活品质，虽然它们不一定阻止这些试剂用于治疗严重或威胁生命的病症(包括与普通成熟组织结构损失有关的疾病比如心血管疾病、自身免疫障碍和神经变性)，但是所述副作用导致患者顺从问题，这又威胁这类药物的即使是治疗更严重的疾病的有效性。我们已预先描述一系列的组合物用作TGF-β产生刺激物以预防或治疗与正常成熟组织结构损失有关的疾病(包括心血管疾病、自身免疫性疾病和神经变性病症)，其减少或避免会另外限制在这些诸多适应症中应用预先描述的TGF-β产生刺激物的副作用(W02008/099144 ;GB2446641)。这些组合物包含至少两种活性成分(以及任意赋形剂或载体)，其中活性成分中的至少一种是TGF-β产生刺激物，而又一活性成分能够减少与给药第一活性成分有关的副作用。我们最初的公开(W0 2008/099144 ；GB 2446641)描述许多可能组合，其中可以改变所选TGF-β产生刺激物和期望缓和给予所选TGF-β产生刺激物的副作用的第二(和额外)活性成分。提供了许多不同实例以展示要求保护的组合物的益处。然而，说明书和权利要求几乎未提供在公开的许多选择中选择最有用组合的指导。清楚的是列于我们最初公开中的涉及他莫昔芬的TPEs，具有结构(I)或更优选(II)是用于在先发明用途的优选的TGF-β产生刺激物。然而，大量化合物属于甚至较窄的通式(II)下，使得对其全部进行实验以发现具有相对一般类别的优异特性的化合物(如果有)是不实用的。本发明涉及药物的组合物和药物的用途，所述药物包含固定剂量组合的屈洛昔芬和氯吡格雷。