专利名称：水飞蓟宾、茵陈和栀子的药物组合物的制作方法 我国是肝病大国，近年来病毒性肝炎、肝纤维化、脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤及肝癌等肝病已经成为当今威胁人类健康的主要疾病之一。在我国，病毒性肝炎患者和乙肝病毒携带者即分别占全国人口的10％以上，特别是大量肝硬化、脂肪肝患者的出现已经引起广大医药工作者越来越多的重视；肝炎是常见的严重传染病之一，其中以病毒性肝炎为主。据不完全统计，目前我国人群中有8～10％为乙肝病毒携带者，且每年仍有相当数量的新患者增加。病毒性肝炎从类型上可分为急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎和胆性肝炎。 肝脏是人体内最大的消化腺。也是体内新陈代谢的中心站，养肝、护肝是每个人都应该认真对待的。目前虽然治疗肝病的药物有许多种，但由于肝病的发病机制未完全阐明，多为改善肝脏功能，促进肝细胞再生，增强肝脏的解毒能力等功能的药物。目前迫切需要一种标本兼治，攻补兼施的药物。 水飞蓟素为菊科植物水飞蓟Silybum marianum(L)Gaertn的果实经提取精制所得的松散粉末，已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第7册30页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含水飞蓟素以水飞蓟宾计算，不得少于68％，含水飞蓟宾和异水飞蓟宾不得少于30％。水飞蓟宾为菊科植物水飞蓟Silybummarianum(L)Gaertn果实中提取分离加工而得。水飞蓟宾葡甲胺为水飞蓟宾与葡甲胺的加成物，属水飞蓟宾的水溶性衍生物，已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第10册52页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含水飞蓟素葡甲胺不得少于96.0％，含水飞蓟宾葡甲胺(C25H22O10·C7H17NO5)不得少于75.0％。水飞蓟宾葡甲胺具有保护及稳定肝细胞膜的作用，可降酶、退黄及促进肝细胞再生，有很好的保护肝脏的作用，并能促进肝细胞再生，对药物性肝中毒、各种急慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝均有良好的效果。 茵陈为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst.et Kit.或茵陈蒿Artemisia capillaries Thumb.的干燥地上部分，始载于《神农本草经》，性微寒，味苦、辛。有清热利湿，利胆退黄的的功效。主要用于黄疸尿少，湿疮瘙痒，传染性黄疸型肝炎等症，是临床上常用的保肝中药。茵陈可保护肝细胞膜、防止肝细胞坏死，促进肝细胞再生及改善肝脏微循环，主要化学成分为黄酮类、香豆素类、色原酮类、香豆酸及挥发油等。 栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》，性寒味苦，归心、肺、三焦经，具有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效。用于热病心烦，黄疸尿赤，血淋涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡，外治扭挫伤痛。栀子利胆、退黄作用较强，生品治疗黄疸性肝炎效果最好。栀子中主要含有栀子苷、羟异栀子苷、山栀苷、栀子新苷以及栀子苷酸等有效成分。 目前利用水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈或其提取物和栀子或其提取物的相互作用，配伍组方，用于治疗肝脏疾病方面的药物，尚未见报道。
为了满足临床需要，更好的治疗肝脏疾病，提高人民健康水平，本发明提供了一种药物组合物及其制备方法和用途，主要由水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈或其提取物和栀子或其提取物制备而成，在治疗肝炎、防治肝硬化等方面，产生了意想不到的效果。
本发明药物组合物，主要由水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈或其提取物和栀子或其提取物制备而成，其重量份数为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素25～400份、茵陈750～16000份、栀子400～6500份；优选为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素50～200份、茵陈1500～8000份、栀子800～3200份；最优为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素100份、茵陈3000～4000份、栀子1600份。
本发明药物组合物，水飞蓟宾的衍生物包括水飞蓟宾葡甲胺、水飞蓟素葡甲胺、异水飞蓟宾葡甲胺。
上述药物组合物中的茵陈和栀子可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，所得总提取物中所含的主要有效成分为总黄酮和总苷，总提取物的有效成分的总含量不低于25％。
上文所述的茵陈可以用适宜的溶剂经过提取加工得到茵陈提取物，其中的溶剂优选水或乙醇，茵陈的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉制备得到茵陈提取物。
本发明提供了一种茵陈的优选制备工艺，具体如下 取茵陈，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药10g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制得的茵陈提取物得率为2～3％，提取物中总黄酮(以无水芦丁计)含量应不少于20％。
茵陈提取物还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法 工艺一取茵陈，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每ml含生药10g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制得的茵陈提取物得率为5～6％，提取物中总黄酮(以无水芦丁计)含量应不少于10％。
工艺二取茵陈，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达75％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每ml含生药10g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制得的茵陈提取物得率为7～8％，提取物中总黄酮(以无水芦丁计)含量应不少于6％。
上文所述的栀子可以用适宜的溶剂经过提取加工得到栀子提取物，其中的溶剂优选水或乙醇，栀子的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉制备得到栀子提取物。
本发明提供了一种栀子的优选制备工艺，具体如下 取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次各1小时，第三次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制得的栀子提取物得率为2～4％，提取物中总苷的含量(以栀子苷计)不少于50％。
栀子提取物还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法 工艺一取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次各1小时，第二次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达75％，冷藏12小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的栀子提取物得率为3～4％，提取物中总苷的含量(以栀子苷计)不少于40％。
工艺二取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达60％，冷藏12小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达75％，冷藏12小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制得的栀子提取物得率为4～5％，提取物中总苷的含量(以栀子苷计)不少于35％。
上述药物组合物中的茵陈和栀子还可以用适宜的溶剂经过混合提取加工得到茵栀提取物，其中的溶剂优选水或乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉制备得到茵栀提取物。
本发明提供了一种茵陈、栀子混合提取的优选制备工艺，具体如下 取茵陈截成小段，栀子粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药10g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制得的茵栀提取物得率为3～5％，提取物中含总黄酮(以芦丁计)，应不少于10％；含总苷(以栀子苷计)，应不少于20％。
茵栀提取物还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法 工艺一取茵陈截成小段，栀子粉碎成粗粉，加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏12小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，再加乙醇使含醇量达75％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，加水约5倍量，冷臧48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制得的茵栀提取物得率为6～8％，提取物中含总黄酮(以芦丁计)，应不少于6％；含总苷(以栀子苷计)，应不少于10％。
工艺二取茵陈截成小段，栀子粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一次1小时，第二、三次各0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，再加乙醇使含醇量达75％，冷藏12小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，加水约5倍量，冷藏24小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制得的茵栀提取物得率为5～6％，提取物中含总黄酮(以芦丁计)，应不少于8％；含总苷(以栀子苷计)，应不少于15％。
上述药物组合物中的茵陈和栀子还可以分别用茵陈提取物和栀子提取物代替投料制成。按照提取物相对于药材的得率(茵陈提取物的得率为2～3％，栀子提取物的得率为2～4％)计算，本发明组合物重量份数为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素25～400份、茵陈提取物15～480份、栀子提取物8～260份；优选为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素50～200份、茵陈提取物30～240份、栀子提取物16～128份；最优为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素100份、茵陈提取物60～120份、栀子提取物32～64份。茵陈提取物含总黄酮(以无水芦丁计)不低于6％，最好不低于20％；栀于提取物含总苷(以栀子苷计)不低于35％，最好不低于50％。
本发明药物组合物中的水飞蓟宾的衍生物包括水飞蓟宾葡甲胺、水飞蓟素葡甲胺、异水飞蓟宾葡甲胺。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。
本发明经过药效学、药理学动物实验研究结果表明，由水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈或其提取物和栀子或其提取物制成的药物，有抗四氯化碳(CCl4)所致肝纤维化作用，显著降低肝纤维化指标透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)的浓度；对四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝损伤有保护作用，使肝脏的ALT和AST有明显的恢复作用；对四氯化碳(CCl4)中毒所致小鼠的肝脏的ALT、LTG和MDA有明显的恢复作用；对四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指数有很好的降低作用；对鸭感染的DHBV病毒有明显抑制的作用；对异硫氰酸而致小鼠血清高胆红素有明显的降低作用，使血清总胆红素和结合胆红素含量降低。本发明实验研究结果表明，水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈或其提取物和栀子或其提取物合并用药呈协同作用，药效明显增强。
本发明提供了一种用于制备治疗肝脏疾病方面的药物。本发明药物组合物中的水飞蓟宾具有保护及稳定肝细胞膜的作用，可降酶、退黄及促进肝细胞再生，起到很好的保护肝脏的作用，并能促进肝细胞再生，对药物性肝中毒、各种急慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝均有良好的效果；茵陈可保护肝细胞膜、防止肝细胞坏死，促进肝细胞再生及改善肝脏微循环；栀子利胆、退黄作用较强，生品治疗黄疸性肝炎效果最好。三药配伍组方共同发挥利胆退黄，保护肝脏等作用，尤其用于治疗黄疸性肝炎，防治肝硬化方面有意想不到的好效果。
本发明药物组合物可以与一种或多种药学上可接受的载体混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型，优选口服制剂或注射剂，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。
用于口服给药时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂，可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括干混悬剂或浓混悬液。糖浆剂系指含有药物的浓蔗糖水溶液。
用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。
本发明药物组合物制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
制成注射剂时，可选用水性溶剂或非水性溶剂，可根据药物的性质加入适宜的附加剂。最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的附加剂包括渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
本发明组合物具有以下优点 (1)提供了一种有效治疗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，满足了临床急需； (2)首次对本发明组合物的相互作用和配伍组方进行了药效学研究，发现了本发明组合物具有显著抗四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化作用，筛选出具有显著疗效的重量配比范围； (3)本发明通过药理实验研究表明，本发明组合物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤、醋氨酚致小鼠急性肝损伤具有显著保护作用；对异硫氰酸而致小鼠血清高胆红素有明显的降低作用，使血清总胆红素和结合胆红素含量降低；有明显抑制鸭感染DHBV病毒的作用；上述各实验组中，本发明组合物实验组与单用水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈或其提取物、栀子或其提取物相比较，疗效显著增强，表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈或其提取物和栀子或其提取物三药合用肝脏疾病效果显著，其结果是本技术领域的普通技术人员所意想不到的； (4)进行的稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全； (5)水飞蓟宾葡甲胺具有保护及稳定肝细胞膜的作用，可降酶、退黄及促进肝细胞再生，起到很好的保护肝脏的作用，并能促进肝细胞再生，对药物性肝中毒、各种急慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝均有良好的效果；茵陈可保护肝细胞膜、防止肝细胞坏死，促进肝细胞再生及改善肝脏微循环；栀子利胆、退黄作用较强，生品治疗黄疸性肝炎效果最好。三药合并用药疗效确切，且减小了相对用药剂量，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。下列实验例中水飞蓟宾葡甲胺、茵陈或其提取物和栀子或其提取物的组合物以下简称水茵栀组合物。实验例中所用的茵陈提取物取自实施例1，栀子提取物取自实施例2。
实验例1 水茵栀组合物合并用药药效研究-抗大鼠肝纤维化作用 实验动物Wistar大鼠，体重180～230g，雄性。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； 模型组CCl4注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺片剂，潍坊中狮制药有限公司； 茵陈组茵陈提取物片剂，自制； 栀子组栀子提取物片剂，自制； 水茵栀组合物组水茵栀组合物片剂，自制。
实验方法 取Wistar大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作为空白对照组。肝纤维化模型组应用40％四氯化碳(CCl4)花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，诱导肝纤维化模型。
取肝纤维化模型大鼠220只，随机分为22组，分别为模型组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈组、栀子组、水茵栀组合物组(18组，水飞蓟宾葡甲胺+茵陈+栀子，重量配比为25+16000+6500、25+750+1600、25+16000+400、50+1500+800、50+1500+3200、50+8000+1600、50+4000+1600、100+4000+1600、200+4000+1600、50+3000+1600、100+3000+1600、200+3000+1600、200+1500+1600、200+8000+800、200+8000+3200、400+750+400、400+16000+1600、400+750+6500)，每组10只。除对照组外，其余各组继续以40％四氯化碳(CCl4)花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈组、栀子组、水茵栀组合物组同时灌胃给药相应药物，连续给药2周。10周后宰杀大鼠，无菌操作取血2ml，分离血清，-20℃保存，用放射免疫法检测肝纤维化指标透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)。
实验结果与结论实验结果见表1。
(1)与空白对照组比较，模型组大鼠血清HA、LN含量有极显著性差异(p＜0.01)，说明造模成功。
(2)与模型组比较，水茵栀组合物各配比组治疗后肝纤维化大鼠血清HA和LN水平均极显著低于模型组(p＜0.01)，水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈组和栀子组治疗后肝纤维化大鼠血清HA和LN水平均显著低于模型组(p＜0.05)，提示各给药组均可显著改善肝纤维化血清学指标，具有抗肝纤维化的作用。
(3)与单用水飞蓟宾葡甲胺、茵陈或栀子相比较，水茵栀组合物各配比组能显著降低肝纤维化指标透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)的浓度(p＜0.05)，可改善肝纤维化，具有抗肝纤维化的作用。
结论上述结果表明，水飞蓟宾葡甲胺、茵陈和栀子三味药配伍，有协同增效作用，且作用效果与配比有关，在各个重量份数中，当重量配比为水飞蓟宾葡甲胺∶茵陈∶栀子＝(50～200)∶(1500～8000)∶(800～3200)时效果较好，其中重量配比为水飞蓟宾葡甲胺∶茵陈∶栀子＝100∶(3000～4000)∶1600时，效果最佳，提示其为最佳配比。
表1水茵栀组合物片剂对CCl4所致肝纤维化大鼠的血清学指标的影响 (

n＝10) 注与空白对照组相比较，○p＜0.01；与模型组相比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，&p＜0.05；与茵陈组相比较，#p＜0.05；与栀子组比较，△p＜0.05。
实验例2水茵栀组合物对四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用 受试动物Wistar大鼠，体重200～220g，140只，随机分为14组。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； 模型组CCl4注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺注射液，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物注射液，自制； 栀子提取物组栀子提取物注射液，自制； 水茵栀组合物注射液组，自制。
试剂盒谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂盒，市购，卫生部上海生物制品研究所。
实验方法 取Wistar大鼠140只，随机分为14组，分别为空白对照组、模型组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组、栀子提取物组、水茵栀组合物注射液的不同配比组，每组10只。空白对照组腹腔注射0.9％生理盐水10ml/kg，其余各组大鼠连续给药三天(腹腔注射)，禁食5.5h，末次给药2h后分别给予25％CCl4花生油溶液，给药剂量见表2。给予四氯化碳后大鼠进食。于给予四氯化碳24小时后禁食12小时，颈静脉取各大鼠血，3000r/min离心10min分离血清，按ALT，AST测定说明书，进行谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性测定。
表2水茵栀组合物注射液对四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用 (

n＝10) 注与空白对照组相比较，**p＜0.01；与模型组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，&p＜0.05；与茵陈提取物组相比较，★p＜0.05；与栀子提取物组相比较，△p＜0.05。
实验结果实验结果见表2。
(1)模型组与空白对照组相比有极显著差异(p＜0.01)，说明造模成功。
(2)与模型组比较，各给药组都对四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝损伤有显著保护作用，肝脏的ALT和AST有明显的恢复作用，均具有显著的统计学意义(p＜0.05)。水茵栀组合物注射液不同剂量配比组与单用水飞蓟宾葡甲胺或茵陈提取物或栀子提取物相比，差别显著(p＜0.05)，表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈和栀子联合应用呈协同增效作用。
(3)与空白对照组相比，茵栀组合物注射液不同剂量配比组肝脏的ALT和AST没有显著差异，可使肝脏的ALT和AST水平恢复正常，表明恢复肝功的效果显著，其疗效与组合物的剂量配比有关，水茵栀组合物注射液中水飞蓟宾葡甲胺∶茵陈提取物∶栀子提取物＝100∶60∶32g时作用最好。
实验例3水茵栀组合物对四氯化碳(CCl4)中毒小鼠ALT、LTG、MDA的影响 受试动物健康昆明种小鼠，体重18～22g。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； CCl4对照组CCl4注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺胶囊剂，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物胶囊剂，自制； 栀子提取物组栀子提取物胶囊剂，自制； 水茵栀组合物1组水茵栀组合物胶囊剂(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg)，自制； 水茵栀组合物2组水茵栀组合物胶囊剂(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+120mg+64mg)，自制； 水茵栀组合物3组水茵栀组合物胶囊剂(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+240mg+128mg)，自制。
实验方法 取小鼠80只，随机分为8组，分别为空白对照组、CCl4对照组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组、栀子提取物组、水茵栀组合物1组、水茵栀组合物2组、水茵栀组合物3组，每组10只。各给药组均为用生理盐水配置成混悬液后灌胃给药。空白对照组腹腔注射0.9％生理盐水10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射CCl410ml/kg，禁食过夜。给药组灌胃给药，每日1次，连续10d，对照组给相应体积的生理盐水，于最后一次给药后，断头处死动物，取血和肝分别测定血清谷丙转氨酶(ALT)、甘油酸三酯(LTG)、丙二醛(MDA)。
实验结果与结论实验结果见表3。
(1)CCl4对照组与空白对照组相比有极显著性差异(p＜0.01)，说明造模成功。
(2)各给药组都对四氯化碳(CCl4)中毒所致小鼠的肝脏的ALT、LTG和MDA有明显的恢复作用(p＜0.05，p＜0.01)。其中水茵栀组合物组的作用都明显强于单用水飞蓟宾葡甲胺或茵陈提取物或栀子提取物(p＜0.05)。表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈提取物和栀子提取物配伍对四氯化碳中毒所致小鼠的肝脏的ALT、LTG和MDA有明显的恢复作用，使肝脏的ALT、LTG和MDA水平恢复正常，与空白对照组相比没有明显差异。表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈提取物和栀子提取物配伍疗效显著。
表3水茵栀组合物胶囊剂对四氯化碳(CCl4)中毒小鼠ALT、LTG、MDA的影响 (

n＝10) 注与空白对照组相比较，*p＜0.01；与CCl4对照组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，&p＜0.05；与茵陈提取物组相比较，△p＜0.05；与栀子提取物组相比较，○p＜0.05。
实验例4水茵栀组合物对四氯化碳(CCl4)中毒所致急性肝损伤小鼠的肝、脾指数的影响 受试动物健康昆明种小鼠，体重18～22g，80只，随机分为8组。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； CCl4模型组CCl4注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺注射液，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物注射液，自制； 栀子提取物组栀子提取物注射液，自制； 水茵栀组合物注射液组(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg)分为低、中、高三个剂量组，自制。
实验方法 取小鼠80只，随机分为8组，分别为空白对照组、CCl4模型组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组、栀子提取物组、水茵栀组合物注射液低、中、高三个剂量组，每组10只。空白对照组腹腔注射0.9％生理盐水10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射CCl410ml/kg，禁食过夜。给药组腹腔注射给药，每日1次，给药剂量见表4，连续10d，对照组给相应体积的生理盐水，于最后一次给药后，断头处死动物，取肝脏和脾脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重。
实验结果实验结果见表4。
各给药组都能明显的降低四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指数(p＜0.05，p＜0.01)。其中水茵栀组合物注射液组的作用都明显强于单用水飞蓟宾葡甲胺或茵陈提取物或栀子提取物(&p＜0.05、★p＜0.05和△p＜0.05)。表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈和栀子配伍有显著降低四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指数的作用，与空白对照组相比没有显著差异。且与组合物的给药剂量有关，高剂量时作用最好。
表4水茵栀组合物对四氯化碳(CCl4)中毒所致急性肝损伤小鼠的肝、脾指数的影响 (

n＝10) 注与空白对照组相比较，**p＜0.01；与CCl4模型组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，&p＜0.05；与茵陈提取物组相比较，★p＜0.05；与栀子提取物组相比较，△p＜0.05。
实验例5水茵栀组合物对四氯化碳(CCl4)中毒大鼠SDH活性、肝糖原含量及肝脏系数的影响 受试动物Wistar大鼠，体重180～230g，雌雄不拘。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； 模型组CCl4注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺胶囊剂，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物胶囊剂，自制； 栀子提取物组栀子提取物胶囊剂，自制； 水茵栀组合物组水茵栀组合物胶囊剂(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝10mg+120mg+64mg)，分为低、中、高三个剂量组，自制。
实验方法 取Wistar大鼠80只，称重，自大鼠尾静脉采血，及时分离血清，测血清SDH的基础水平。然后随机分为8组，常规饲养，对照组每只大鼠按照2ml/kg灭菌生理盐水皮下注射；模型组和各药物组给每只大鼠按照2ml/kgCCl4皮下注射以复制化学性肝损伤模型。次日取各组大鼠血后，给对照组和模型组灌胃生理盐水4ml/kg，药物给药组灌胃给药相应的药物，连续给药10天。实验结束(第12天)时称重，取血后断颈处死动物，及时分离肝脏，生理盐水冲洗瘀血，滤纸吸干水分后称重，并取肝脏测肝糖原含量。
实验结果和结论实验结果见表5和表6。
表5水茵栀组合物胶囊剂对CCl4大鼠血清SDH活性的影响(

n＝10) 注与实验前相比较，*p＜0.01；与模型组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01。
(1)实验前各组动物的血清SDH活性，组间差异均无显著性，经CCl4处理后，实验各组动物血清SDH活性与对照组比较差异十分显著(p＜0.01)，表明造模成功。
(2)与模型组相比较，水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组和栀子提取物组显著降低血清SDH活性(p＜0.05)；水茵栀组合物各剂量组极显著降低血清SDH活性(p＜0.01)，低、中、高剂量组的血清SDH活性已经接近对照组水平。
表6水茵栀组合物胶囊剂对CCl4大鼠肝糖原含量及肝脏系数的影响(

n＝10) 注与对照组相比较，*p＜0.01；与模型组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01。
(1)模型组与对照组相比较，显示动物经过CCl4处理后，肝糖原含量极显著降低(p＜0.01)，而肝脏系数极显著增加(p＜0.01)，提示造模成功。
(2)与模型组相比较，水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组和栀子提取物组显著增加肝糖原含量(p＜0.05)，显著降低肝脏系数(p＜0.05)；水茵栀组合物各剂量组极显著增加肝糖原含量(p＜0.01)，极显著降低肝脏系数(p＜0.01)。
上述实验结果表明，水茵栀组合物可明显降低肝细胞变性和坏死的程度(SDH活性变化可灵敏反应肝细胞变性、坏死的程度)，降低肝组织病理损伤程度，肝细胞再生明显，提示水茵栀组合物对CCl4致大鼠急性肝损伤有良好的保护作用。
实验例6水茵栀组合物对DHBV-DNA的抑制作用 受试动物市售1日龄北京鸭。
供试品及给药剂量 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； 阳性对照组阿昔洛韦(ACV)注射液(给药剂量50mg/kg)，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺注射液(给药剂量20mg/kg)，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物注射液(给药剂量20mg/kg)，自制； 栀子提取物组栀子提取物注射液(给药剂量20mg/kg)，自制； 水茵栀组合物低剂量组水茵栀组合物注射液(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg，给药剂量10mg/kg)，自制； 水茵栀组合物中剂量组水茵栀组合物注射液(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32m，给药剂量15mg/kg)，自制； 水茵栀组合物高剂量组水茵栀组合物注射液(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg，给药剂量20mg/kg)，自制。
病毒DHBV阳性血清。
实验方法 (1)动物模型北京鸭经足静脉注射0.2ml DHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存检验。
(2)药物治疗筛选出感染成功的阳性鸭48只，随机分为8组，每组6只。分别为空白对照组、阳性对照组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组、栀子提取物组、水茵栀组合物注射液低、中、高三个剂量组，给药剂量见表3。静脉注射给药，给药2周。分别于药前、用药第7天、用药第14天和停药后第3天，自鸭腿静脉抽血，分离血清，-20℃保存待验。
(3)检测方法采用DHBV-DNA Dot Blot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本DHBV-DNA水平值。
(4)统计学处理用药组不同时间DNA含量与用药前比较，采用配对t检验；用药组同一时间DNA含量与病毒对照组比较，采用t检验。
实验结果实验结果见表7。
(1)与空白对照组相比较，各给药组都明显抑制DHBV病毒(p＜0.05，p＜0.01)。
(2)水茵栀组合物注射液组的作用都明显强于单用水飞蓟宾葡甲胺或茵陈提取物或栀子提取物(p＜0.05)，且与同组治疗前相比较，停药后无反跳与给药前比较差异显著(p＜0.01)，而阳性对照组在停药后与给药前比较无显著差异。且与组合物的给药剂量有关，高剂量作用最好。
表7水茵栀组合物注射液对DHBV-DNA的抑制作用(

n＝6) 注与同组治疗前相比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与空白对照组相比较，&p＜0.05，&&p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，#p＜0.05；与茵陈提取物组相比较，★p＜0.05；与栀子提取物组相比较，△p＜0.05。
实验例7水茵栀组合物对异硫氰酸-1-奈脂化小鼠血清胆红素含量的影响 受试动物健康昆明种小鼠，体重24～28g，雌雄兼用，80只，随机分为8组。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； 模型组异硫氰酸-1-奈脂注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺注射液，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物注射液，自制； 栀子提取物组栀子提取物注射液，自制； 水茵栀组合物注射液组(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg)分为低、中、高三个剂量组，自制。
试剂盒胆红素测定药盒，市购，上海荣盛生物技术有限公司。
实验方法 取小鼠80只，随机分为8组，分别为空白对照组、模型组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组、栀子提取物组、水茵栀组合物注射液低、中、高三个剂量组，每组10只。除空白对照组外，其余各组动物均腹腔注射给药，连续给药3天，禁食4h，末次给药1h，腹腔注射给予0.3％异硫氰酸-1-奈脂花生油溶液60mg/kg。给予异硫氰酸-1-奈脂4h后，小鼠再次给食，24h后再次给药，给予异硫氰酸-1-奈脂第三天，禁食5h，给药后3h各鼠摘右眼球取血3000r/min，离心10分钟，分离血清，按试剂盒说明书要求，进行总胆红素和结合胆红素测定，测定波长为600nm。结果由t检验进行组间显著性差异比较。
表8水茵栀组合物注射液对异硫氰酸化小鼠血清总胆红素、结合胆红素含量的影响 (

n＝10) 注与空白对照组相比较，**p＜0.01；与模型组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，&p＜0.05；与茵陈提取物组相比较，★p＜0.05；与栀子提取物组相比较，△p＜0.05。
实验结果实验结果见表8。
(1)模型组与空白对照组相比有极显著差异(p＜0.01)，说明造模成功。
(2)各给药组都对异硫氰酸而致小鼠血清高胆红素有明显的降低作用(p＜0.05，p＜0.01)。其中水茵栀组合物组的作用都明显强于单用水飞蓟宾葡甲胺或茵陈提取物或栀子提取物(p＜0.05)。表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈和栀子配伍对异硫氰酸而致小鼠血清高胆红素有明显的降低作用，使血清总胆红素和结合胆红素含量降低。
上述结果表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈和栀子具有协同增效作用，与空白对照组相比没有明显差异。且与组合物的给药剂量有关，高剂量作用最好。
实验例8水茵栀组合物对醋氨酚(AP)中毒小鼠ALT、AST活性和GSH含量的影响 受试动物健康昆明种小鼠，体重18～22g。
供试品 空白对照组0.9％生理盐水注射液，自制； AP对照组AP注射液，自制； 水飞蓟宾葡甲胺组水飞蓟宾葡甲胺颗粒剂，自制(原料药市购)； 茵陈提取物组茵陈提取物颗粒剂，自制； 栀子提取物组栀子提取物颗粒剂，自制； 水茵栀组合物组水茵栀组合物颗粒剂(水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝10mg+120mg+64mg)，分为低、中、高三个剂量组，自制。
实验方法 取小鼠80只，随机分为8组，分别为空白对照组、AP对照组、水飞蓟宾葡甲胺组、茵陈提取物组、栀子提取物组、水茵栀组合物低颗粒剂低、中、高三个剂量组，每组10只。除空白对照组外，其余各组动物均腹腔注射AP100ml/kg，禁食过夜。给药组灌胃给药，每日1次，连续10d，对照组给相应体积的生理盐水，于最后一次给药后，腹腔注射AP100mg/kg，禁食3h后，断头处死动物，取血和肝分别测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)和还原型谷胱甘肽(GSH)。
表9水茵栀组合物颗粒剂对醋氨酚(AP)中毒小鼠ALT、GST活性和GSH含量的影响 (

n＝10) 注与空白对照组相比较，**p＜0.01；与AP对照组相比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组相比较，&p＜0.05；与茵陈提取物组相比较，△p＜0.05；与栀子提取物组比较，○p＜0.05。
实验结果与结论实验结果见表9。
(1)与空白对照组相比，AP对照组极显著降低GSH含量和极显著提高ALT、GST活性(p＜0.01)，说明造模成功。
(2)与空白对照组相比，各给药组都能提高醋氨酚(AP)中毒所致小鼠的肝脏的GSH含量和降低ALT、GST活性(p＜0.05、p＜0.01)。
(3)其中水茵栀组合物颗粒剂组的作用都明显强于单用水飞蓟宾葡甲胺或茵陈提取物或栀子提取物(p＜0.05)。表明水飞蓟宾葡甲胺、茵陈和栀子配伍对醋氨酚中毒小鼠的肝脏有明显的恢复作用，使肝脏的ALT、GST水平恢复正常，与空白对照组相比没有明显差异。随着剂量的增加，增加GSH含量和降低ALT、GST活性的作用加大，高剂量时作用最好。
实验例9小鼠注射给药急性毒性实验 (1)实验方法 供试品水茵栀组合物注射液(自制，10ml水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg)。
受试动物小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。
给药途径静脉注射、腹腔注射。
观察项目死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死量。
(2)实验结果 按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行一日内最大给药量实验。给药剂量尾静脉注射0.2ml/10g，腹腔注射0.2ml/10g，一日2次。
死亡数未出现死亡。
一般状态未见异常变化。
体重于给药前1天，给药日，给药后1、3、7、14天测量；未见异常变化。
剖检心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。
(3)结论 本实验中未出现死亡，推测水茵栀组合物注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量均为0.4ml/10g，相当于50kg体重人日最大用量20ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
实验例10水茵栀组合物注射液稳定性实验 供试品水茵栀组合物注射液(自制，10ml水飞蓟宾葡甲胺+茵陈提取物+栀子提取物＝100mg+60mg+32mg)。
考察项目性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速实验6个月和长期实验期末增加无菌和热原检查。
1、影响因素实验 强光照射实验取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。
高温实验取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。
低温实验取供试品，在4℃冰箱中放置10天。
上述实验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。
结果光照4500Lx条件下放置10天，除有关物质略有升高外，其它各项指标均无明显变化。高温60℃条件下放置10天，外观变为淡黄色澄明液体，标示含量下降，有关物质略有升高。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。
2、加速实验 方法置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在实验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。
结果温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速实验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。
3、长期实验 方法置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。
结果温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期实验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。
结论由上述考察结果得出结论，各项实验中，水茵栀组合物注射液比较稳定。
考察项目性状、pH值、澄明度。
长期稳定性实验方法及结果将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本品组合物注射液长期放置基本稳定。

，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例4～10中所用的茵陈提取物取自实施例1，栀子提取物取自实施例2，水飞蓟宾葡甲胺，市购，江苏中兴药业有限公司。
实施例1茵陈提取物的制备 茵陈提取物的制备方法 取茵陈，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药10g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。
茵陈提取物鉴别实验 取本品粉末1g，研细，加水40ml，稀盐酸1ml，加热至约80℃，放冷，滤过，滤液移置分液漏斗中，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材3g，加水50ml，煮沸5～10分钟，放冷，滤过，滤液加乙酸乙酯10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-丙酮(5∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％氢氧化钾乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
茵陈提取物含量测定 对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加适量70％乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加70％乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法精密量取本品适量，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12～15mm，湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁计，应不少于20％。
根据上述工艺，制得茵陈提取物三批样品，其含量和得率见表10。
表10茵陈提取物总黄酮含量和得率 实施例2栀子提取物的制备 栀子提取物的制备方法 取栀子，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次各1小时，第三次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药1g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药3g，加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，加水约5倍量，冷臧48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏，真空干燥，即得。
栀子提取物鉴别实验 取本品粉末0.5g，加75％乙醇10ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇(5→10)溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
栀子提取物含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(15∶85)为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末0.1g[同时另取本品粉末测定水分(中国药典2005年版一部附录IXH第一法)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
根据上述工艺，制得栀子提取物三批样品，其含量和得率见表11。
表11栀子提取物总苷含量和得率 实施例3茵陈栀子混提物的制备 茵陈栀子混提物的制备方法 取茵陈截成小段，栀子粉碎成粗粉，按重量比2∶1投料，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2g，加乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药5g，再加乙醇使含醇量达85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至每1ml含生药10g，加水约5倍量，冷藏48小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，真空干燥，即得。
根据上述工艺，制得茵栀提取物三批样品，其含量和得率见表12。
表12茵栀提取物总苷含量、总黄酮含量和得率 实施例4水茵栀组含物粉针剂的制备 处方一 水飞蓟宾葡甲胺100g 茵陈提取物30g(相当于原药材1500g) 栀子提取物16g(相当于原药材800g) 聚山梨酯8015g 甘露醇350g 无菌注射用水 加至3000ml 共制备1000支 处方二 水飞蓟宾葡甲胺100g 茵陈提取物60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯8020g 甘露醇400g 无菌注射用水 加至3000ml 共制备1000支 注总提取物的有效成分的总含量不低于25％ 具体步骤 (1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
(2)按照处方量称取原料和辅料。
(3)将茵陈提取物加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将栀子提取物和水飞蓟宾葡甲胺加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
(6)经0.22μm的微孔滤膜精滤。
(7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
(8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
(9)冻干结束，压塞，轧盖。
(10)成品全检，包装入库。
实施例5水茵栀组合物水针剂的制备 处方一 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯80 50g 注射用水 加至10000ml 共制备 1000支 处方二 水飞蓟宾葡甲胺 50g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯80 40g 注射用水 加至10000ml 共制备 1000支 处方三 水飞蓟宾葡甲胺 200g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯80 60g 注射用水 加至10000ml 共制备 1000支 注总提取物的有效成分的总含量不低于25％ 具体步骤 (1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
(2)将茵陈提取物加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将栀子提取物和水飞蓟宾葡甲胺加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。
(3)并上述溶液，补加注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
(7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
(8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
(9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
(10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
(11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6水茵栀组合物氯化钠输液的制备 处方一 水飞蓟宾葡甲胺 50g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 16g(相当于原药材800g) 聚山梨酯80 15g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 处方二 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 16g(相当于原药材800g) 聚山梨酯80 20g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 处方三 水飞蓟宾葡甲胺 200g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 16g(相当于原药材8000g) 聚山梨酯80 30g 氯化钠 900g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 注总提取物的有效成分的总含量不低于25％ 具体步骤 (1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
(2)将茵陈提取物加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将栀子提取物和水飞蓟宾葡甲胺加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量。
(3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
(4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
(5)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
(6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
(7)灌装于100ml的输液瓶中。
(8)115℃热压灭菌30分钟。
(9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例7水茵栀组合物葡萄糖输液的制备 处方一 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 30g(相当于原药材1500g) 栀子提取物 32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯80 20g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 处方二 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 60g(相当于原药材3000g) 栀子提取物 32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯80 25g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 处方三 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 120g(相当于原药材4000g) 栀子提取物 32g(相当于原药材1600g) 聚山梨酯80 30g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制备 1000瓶 注总提取物的有效成分的总含量不低于25％ 具体步骤 (1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
(2)将茵陈提取物加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将栀子提取物和水飞蓟宾葡甲胺加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加注射用水至全量。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。
(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
(7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
(8)灌装于100ml的输液瓶中。
(9)115℃热压灭菌30分钟。
(10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例8水茵栀组合物片剂的制备 处方 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 120g 栀子提取物 64g 淀粉45.0g 微晶纤维素 45.0g 2％HPMC水溶液 适量 硬脂酸镁8.0g 羧甲淀粉钠 15.0g 共制备 1000片 注总提取物的有效成分的总含量不低25％ 具体步骤 (1)将茵陈提取物、水飞蓟宾葡甲胺和栀子提取物分别粉碎过100目筛备用。
(2)按照处方量称取原料和辅料。
(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
(4)将水飞蓟宾葡甲胺、栀子提取物、茵陈提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
(5)20目筛制颗粒。
(6)颗粒在60℃的条件下烘干。
(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
(8)取样，半成品化验。
(9)按照化验确定的片重压片。
(10)成品全检，包装入库。
实施例9水茵栀组合物胶囊剂的制备 处方一 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 60g 栀子提取物 32g 淀粉 20.0g 微晶纤维素 60.0g 2％HPMC水溶液 适量 硬脂酸镁 5.0g 共制备 1000粒 处方二 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 120g 栀予提取物 64g 淀粉 25.0g 微晶纤维素 70.0g 2％HPMC水溶液 适量 硬脂酸镁 8.0g 共制备 1000粒 处方三 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 240g 栀子提取物 128g 淀粉 35.0g 微晶纤维素 80.0g 2％HPMC水溶液 适量 硬脂酸镁 10.0g 共制备 1000粒 注总提取物的有效成分的总含量不低于25％ 具体步骤 (1)将茵陈提取物、水飞蓟宾葡甲胺和栀子提取物分别粉碎过100目筛备用。
(2)按照处方量称取原料和辅料。
(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
(4)将水飞蓟宾葡甲胺、栀子提取物、茵陈提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
(5)过20目筛制颗粒。
(6)颗粒在60℃的条件下烘干。
(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
(8)取样，半成品化验。
(9)按照化验确定的装量装入胶囊。
(10)成品全检，包装入库。
实施例10水茵栀组合物颗粒剂的制备 处方一 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 60g 栀子提取物 32g 糖粉500.0g 糊精280 2％HPMC50％乙醇溶液 适量 共制备 1000g 处方二 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 120g 栀子提取物 64g 糖粉400.0g 糊精200 2％HPMC50％乙醇溶液 适量 共制备 1000g 处方三 水飞蓟宾葡甲胺 100g 茵陈提取物 240g 栀子提取物 128g 糖粉300.0g 糊精150 2％HPMC50％乙醇溶液 适量 共制备 1000g 注总提取物的有效成分的总含量不低于25％ 具体步骤 (1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将茵陈提取物、水飞蓟宾葡甲胺和栀子提取物分别粉碎过100目筛备用。
(2)按照处方量称取原料和辅料。
(3)将茵陈提取物、水飞蓟宾葡甲胺、栀子提取物与糖粉、糊精以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
(4)20目筛制颗粒。
(5)颗粒在60℃的条件下烘干。
(6)干颗粒过18目筛整粒。
(7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
(8)包装，成品全检，包装入库。

1.一种治疗肝脏疾病的药物组合物，其特征在于，制成它所含药效组分的原料药为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈和栀子，其重量份数为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素25～400份、茵陈750～16000份、栀子400～6500份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，原料药的重量份数为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素50～200份、茵陈1500～8000份、栀子800～3200份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，原料药的重量份数为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素100份、茵陈3000～4000份、栀子1600份。
4.如权利要求1～3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的茵陈、栀子可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再与水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素和药用辅料混合加工制成制剂，所得总提取物中所含的主要有效成分为总黄酮和总苷。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物还可以由水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素、茵陈提取物和栀子提取物制成，其重量份数为水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素25～400份