专利名称：一种复合益生菌活菌制剂及工业化生产方法双歧杆菌是人体肠道内数量最多、功能最重要的生理性益生菌。1899年，法国巴斯德研究院学者Tissier用厌氧培养法从健康母乳喂养的婴儿粪便中发现并分离出来。它是一种专性厌氧菌，归放线菌科双歧杆菌属。革兰氏阳性，菌属呈多形态，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。目前发现共有29个种，其中10个种与人类有关，如青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌等。双歧杆菌对维持人体的健康具有多种重要功能，包括生物学屏障、合成多种维生素、控制内毒素血症、降低血胆固醇、抑制腐败细菌在肠道中腐化、预防和治疗与抗生素有关的腹泻、抗肿瘤、预防癌变、抗感染等。它的应用已从最初的营养、辅助治疗发展到目前的作为基因载体治疗肿瘤等多种方面。嗜酸乳杆菌是一类G+杆菌，杆的末端呈圆形，大小为0. 6-0. 9X1. 5X1. 6um,以单个、成对或短链形式存在，不运动，无鞭毛，无芽孢，过氧化氢酶阴性，不产生细胞色素。嗜酸乳杆菌是微需氧菌，无氧或较低的氧分压环境下在固态基质表面生长，5% -10%的二氧化碳可促进嗜酸乳杆菌的增殖。1922年Cheplin和Rettger报道了嗜酸乳杆菌可以在肠道中存活和定植，是人体肠道重要的益生菌。研究表明嗜酸乳杆菌对食物中滋生的肠道病原菌有拮抗作用，可以稳定正常的肠道微生物区系，具有抗癌作用，能降低血清胆固醇。近年来，嗜酸乳杆菌与其它菌株结合或采用其它生产方式，开发了多种新型的嗜酸性发酵产品。由于青春双歧杆菌是专性厌氧菌，体外培养很难达到较高的活菌数，限制了双歧杆菌制品的开发和应用。另外，目前用于嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌的工艺较复杂，发酵培养液成本较高，也不利于工业化生产的需求。
本发明的目的在于克服现有技术中不足，提供一种有显著改善肠道功能，促进肠道对营养物质的吸收，解决便秘、腹泻等肠道问题，从而起到改善肠道生态环境、促进蛋白质吸收、增强人体免疫力、抗肿瘤等多方面的保健功效的一种复合益生菌活菌制剂及其工业化生产方法。复合益生菌活菌制剂按下列步骤进行制备I.选用菌株选用菌株嗜酸乳杆菌A-I和青春双歧杆菌B-I (由年轻健康的成人粪便中分离出来)，采用了紫外，微波分别进行诱变，同时进行筛选培育得到耐酸、耐胆盐的嗜酸乳杆菌A-IO和青春双歧杆菌B-13。2.菌种发酵培养将嗜酸乳杆菌A-10、青春双歧杆菌B-13菌种分别接入酸化-MRS培养基和PTYG培养基两种液体培养基中进行培养，培养基中接入的菌种重量百分含量为0. 01 % -0. I %，在35°C -40°C的条件下静置培养48-72h。3.发酵将嗜酸乳杆菌A-10、青春双歧杆菌B-13转入相应的高菌浓度培养液继续培养，接种量为1% _2%，35-40°C静置培养10-36h。4.混合菌粉的制备3000-5000r/min的条件下离心20_60min ;将两种菌体离心沉淀物分别加入质量比为I : 1-10保护剂，然后在-20°C _70°C的环境中预冻12-24h，再在无菌条件下真空冷冻干燥；两种菌的冻干粉以1-5 1-5的比例混合，即得复合益生菌活菌制剂；嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌的活菌数均> 1.0X101(lCfu/g。本发明复合益生菌制剂采用二联菌的生态构架选用人体内源性益生菌-嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌，这两种是人体肠道中的优势菌群，能在人体肠道内定植并粘附于肠道粘膜上，抑制有害菌的生长。其中青春双歧杆菌具有肠道生物屏障作用，营养及促进代谢作用，免疫及抗癌作用；嗜酸乳杆菌具有防治肠道感染，抗癌，改善乳糖利用和降低胆固醇的作用。本发明选用的这两种活菌按照合理配比组合后具有相互促进的作用，不仅促进人体肠道内优势菌的生长，而且能更有效地抑制肠道内源性病菌起到改善肠道内环境，调理肠道功能的作用。本发明复合益生菌制剂的工业化方法不仅可以保证复合菌剂中的活菌数量及存活率,而且工艺简单、生产成本低,适合大规模生产的需求。

一种复合益生菌活菌制剂及工业化生产方法。属于生物领域。本发明公开了一种复合益生菌活菌制剂及工业化生产方法。本发明制剂由嗜酸乳杆菌A-10、青春双歧杆菌B-13、辅助保护载体混合而成。其工业化生产方法为选用嗜酸乳杆菌A-1和青春双歧杆菌B-1，分别进行诱变驯化，筛选出嗜酸乳杆菌A-10和青春双歧杆菌B-13，再将其分别进行发酵培养、离心、加入保护剂，真空冷冻干燥后按比率混合制得。嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌的活菌数均≥1.0×1010cfu/g。本发明的优点是菌种优良，两种活菌能够相互促进，具有改善肠道生态环境、促进蛋白质吸收、增强人体免疫力、抗肿瘤等多方面的保健功效。此外，该生产方法具有工艺简单，生产成本低，保证复合菌剂中的活菌数量及存活率的特点。