一种含有鹿茸和橄榄萃取物的组合物的制作方法[0002]中国已进入人口老龄化社会，因人口老龄化所带来的社会、经济、健康等都将成为未来社会的重大政治、经济问题，采用有效的方法延缓老龄人群发生的生理、病理变化，降低由于年龄老化而导致的老龄人口健康风险，提高老年人的生活质量，将极大的减轻我国未来社会政治和经济发展所承受的负担。[0003]人之所以会逐渐衰老，众多学说之一是自由基学说，此学说也是研究人员普遍认可的引起衰老的主要原因之一。衰老自由基学说认为，衰老和相关的许多慢性疾病的发生发展都是体内的氧自由基产生过多或机体抗氧能力下降，二者之间的关系失衡而引起。与机体相关的自由基中，活性氧自由基(ROS)最为重要，是具有高度反应性的O2的代谢产物，主要包括超氧阴离子自由基，羟基自由基和过氧化氢等，正常情况下，人体内自由基总是处于不断产生与不断消除的动态平衡中，如果体内自由基产生过多或由于自由基清除系统功能障碍而失衡，就会造成对机体组织的损害，引起氧化胁迫；自由基氧化应激可损伤生物分子，包括蛋白质、线粒体、DNA和脂质过氧体，机体内一些重要酶的功能也会受到破坏，引起细胞膜多价不饱和脂肪酸过氧化反应，从而引起相应疾病，如老年性痴呆、白内障和其他视觉障碍、帕金森病等神经退行性疾病、以及动脉粥样硬化、脑中风等心血管疾病，免疫功能下降和癌症及糖尿病等。清除过量的活性氧自由基可有效减缓人体因年龄和环境造成的老化。目前市面上有多种抗氧化剂，如S0D、维生素C、E、A，辅酶Q10、花青素、白藜芦醇等。此类抗氧化剂常受到许多因素的影响，如维生C在水中溶液不稳定，见光极易分解，而维生素E不溶于水，易被氧化，而其他一些抗氧化剂半衰期短、分子量大而不易透过细胞膜、某些存在抗原性等。从天然生物中研究寻找抗氧化活性的物质被国外广泛重视，如现常用的花青素、白藜芦醇等与人工合成的抗氧化剂相比较，天然生物抗氧化剂具有多重作用、功效持久稳定、作用温和、适用面广、毒副作用轻、经济易得等优势。因此，开发高效低毒的天然抗氧化物，提高机体的抗氧化作用，保持自由基的产生与消除达到平衡，对延缓衰老和预防疾病等有重大意义。[0004]鹿茸作为中药，常用的有梅花鹿茸和马鹿茸，主要用于治疗头晕、耳聋、目暗、阳痿、滑精、宫冷不孕、羸瘦、神疲、畏寒、腰脊冷痛、筋骨痿软、崩漏带下、阴疽不敛及久病虚损等症。现代研究表明，鹿茸化学成分比较复杂，主要含有三大类活性物质，蛋白多肽类、甾体类和多胺类化合物 。鹿茸及其提取物有一定的抗脂质和抗自由基氧化的作用，但其常规服用量较大，如《中国药典》2010版规定，日服剂量为1000~3000mg，常会导致产生老年人产生眩晕目赤、咽喉疼痛、口腔溃疡、夜寐不安或高血压等难以承受的不适症状，不能长期进行日常服食。鹿茸的食用方法主要有，制备成鹿茸片研磨成粉冲服，制备成鹿茸胶囊，鹿茸酒，泡茶，煮粥，炖鸡等。[0005]橄榄果实或橄榄叶中包含大量的多酚类化合物，如橄榄苦苷、羟基酪醇等。这类多酚类化合物其功能近年来备受人们的关注。研究表明此类多酚类化合物具有抗氧化性和对自由基的清除能力，能够清除内源性和外源性自由基和氧化物，从而具有抑制低密度蛋白(LDL)被氧化的作用。但此类多酚类化合物化学性质极不稳定，在低温或常温状态下较短时间内(〈6个月)就会因氧化而失去相关的生物活性，导致人群服食效果不一，甚至存在安全性问题，难以满足长期服食的需要。[0006]橄榄萃取物是从橄榄树果实或叶子提取的物质，橄榄萃取物目前市场上有售，可以作为医药原料，保健食品，美容化妆品使用，其服用方法为:制备成片剂，胶囊，粉末等服用。
[0007]本发明提供一种具有协同增效作用的抗氧化活性的组合物。[0008]本发明的组合物，其特征在于:由鹿茸和橄榄萃取物作为活性成分制备而成，其中鹿茸和橄榄萃取物两者重量比例为I~50:1~1000。[0009]优选的，其中鹿茸和橄榄萃取物两者重量比例为10~25:250~500。
[0010]特别优选的，其中鹿茸和橄榄萃取物两者重量比例为10~25:250。
[0011]最优选的，鹿茸粉:橄榄萃取物的重量比例=25:250
[0012]本发明的组合物，其中鹿茸为鹿茸粉，可以从市场上购买得到，或根据现有技术方法制备,如鹿茸粉的制备方法可以采用图3的方法，(采用Mastersizer2000马尔文激光粒径分析仪测定鹿茸微粉的粒径，粒径分布宽度〈30 μ m茸粉)。
[0013]本发明的组合物，其中橄榄萃取物中包括橄榄苦苷和其水化的羟基酪醇。可以从市场上购买得到，或根据现有技术方法制备，如橄榄萃取物的制备方法可以采用图4的方法。
[0014]以上对鹿茸采用流化床对撞式气流粉碎技术进行粉碎，可以最大程度保障了鹿茸有效成分的保留，最为有效的是减少了日服用量的摄入，同时保证实现了抗氧化的作用，使老年人可长期服食而少有不良反应反生。
[0015]以上以CO2超临界萃取橄榄叶获得橄榄苦苷和羟基酪醇的橄榄萃取物，能够有效的避免有机溶剂造成的损耗；在随后采用了固体分散技术，确保了其中多酚类化合物理化性质的稳定，能够有效满足组合物在常温下的稳定性，更为重要的是采用固体分散技术制成品在摄食后具有可靠的安全性和有效性。
[0016]本发明的组合物，根据需要还可加入制备食品、保健品及药物产品所需要的载体。为此，本发明还提供本发明组合物的制备方法，所述方法是将鹿茸粉，橄榄萃取物混合，必要时加入载体材料，按照制剂常规技术制备成适合服用的任意制剂形式。
[0017]优选的，本发明是将鹿茸粉，橄榄萃取物制备成一种分散均匀的共混物，再进一步加工成制剂。所述共混物，其制备方法如下:橄榄萃取物加入分散溶液中，搅拌，使橄榄萃取物溶解完全，加入上述比例的鹿微粉搅拌混悬混匀，迅速冷却后，粉碎，即得鹿茸橄榄萃取物的共混物。
[0018]优选的，本发明共混物的制备方法如下:选择鹿茸微粉，橄榄萃取物，两者重量比例=10~25:250 ;使用分散溶液对微粉，橄榄叶萃取物进行分散，制备成上述共混物。其中所述分散溶液选自用PEG6000，聚维酮(PVP)，甘露醇，乙基纤维素作为分散剂制备的液体或半液体物质，用于将鹿茸微粉，橄榄萃取物均匀分散，优选PEG6000。
[0019]共混物中，鹿茸微粉，橄榄萃取物和分散剂三者之间的重量比例为:10~25:250:120~750，优选的，鹿茸微粉，橄榄萃取物和分散剂三者之间的重量比例为:10~25:250:250。
[0020]将上述共混物作为本发明组合物的活性成分组分，根据需要加入载体成分，按照常规技术制备成适合服用的任意形式，如组合物中，共混物的重量比例为0.0P/0-99.99%，载体成分重量比例为0.01%-99.99%ο
[0021]本发明的组合物，还可包括药物或食品或保健品可接受的载体或添加剂，如:维生素(如维生素A，B, C，D，E等)，多种金属离子电解质补充剂(如钾钠钙镁等离子补充剂)，矫味剂(香精，甜味剂等)，填充剂(乳糖，淀粉，糊精，纤维素衍生物等)，润滑剂(硬脂酸镁，滑石粉，微分硅胶等)，粘合剂(淀粉浆，聚维酮，纤维素衍生物)等。
[0022]本发明的组合物，根据制剂技术制备的成品服用的剂型，包括口服片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、颗粒剂、粉剂、干混悬剂、泡腾剂、缓释口服剂。
[0023]本发明的另一目的是提供本发明的组合物在清除活性氧自由基中的应用。
[0024]经试验证实，本发明的组合物用于清除超氧阴离子自由基和羟基自由基具有协同增效的作用。
[0025]本发明组合物协同增效抗氧化活性研究如下:
[0026]1、对超氧阴离子自由基的清除协同增效作用
[0027]模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，取实施例1制备的鹿茸橄榄萃取物共混物制备成不同浓度供试液，另设空白组、鹿茸粉组、橄榄叶萃取物组，同样制备成不同浓度供试液，取上述供试液50 μ 1，按抗超氧阴离子自由基测试盒说明书操作，依次加入反应试剂，37°C恒温水浴反应40min，加入显色剂终止反应，混匀，静置IOmin后在550nm处测定吸光度。计算抑制率。结果显示共混物对超氧阴离子自由基具有较强的抑制作用，与对照组鹿茸组、橄榄萃取组比较，鹿茸对照组抑制率约为30%，而橄榄叶萃取物组约为50%，而共混物抑制率约92%，明显强于对照组，具有协同增效的效果，实验结果见附图1。
[0028]2、对羟基自由基的清除作用
[0029]根据Fenton反应原理，取实施例1制备的鹿茸橄榄萃取物的共混物制备成不同浓度的供试液，另设空白组、鹿茸粉组、橄榄叶萃取物组，同样制备成不同浓度供试液，取上述供试液0.2ml按羟基自由基测定试剂盒说明书操作，依次加入反应试刘，37°C恒温水浴反应lmin，立即加入显色剂终上反应，混匀，室温放置20min，在550nm处测定吸光度，并计算抑制率。实验结果见附图，显示共混物对羟基自由基具有很强的抑制作用，鹿茸对照组抑制率约为40%，而橄榄叶萃取物组约为55%，而共混物抑制率约95%，明显强于对照组，具有协同增效的效果，实验结果见附图2。



[0030]图1共混物对超氧阴离子自由基的清除协同作用
[0031]图2共混物对羟基自由基的清除协同作用
[0032]图3鹿茸微粉制备流程图[0033]图4橄榄萃取物制备流程图
[0034]以下通过具体实施例，进一步说明本发明，下述实施例仅用于说明本发明，而对本发明没有限制。
[0035]实施例1
[0036]鹿茸微粉的制备:鹿茸经刮毛一分段一切片一粉碎一过80目筛一冷冻一采用流化床对撞式气流粉碎机进行粉碎Ih —鹿茸微粉(采用MastersizerfOOO马尔文激光粒径分析仪测定鹿茸微粉的粒径，粒径分布宽度〈30 μ m茸粉)。
[0037]橄榄萃取物的制备:橄榄叶洗净一烘干一粉碎一过80目筛一装入反应爸一CO2超临界萃取(-20°C保持20h)—分离一橄榄萃取物。
[0038]鹿茸微粉:橄榄萃取物的重量比例=25:250[0039]共混物的制备:
[0040]操作:取140g重量的PEG6000，加热至70°C，搅拌溶解完全，加入250g重量的橄榄萃取物搅拌15分钟，溶解完全，再加入25g重量的鹿茸微粉搅拌，分散均匀，并迅速放入冰水浴中冷却，固化后，粉碎，即得固体共混物。
[0041]经体外溶出试验结果表明，所得的共混物以羟基酪醇为检测指标，10分钟即达到溶解完全，而鹿茸微粉，橄榄萃取物及PEG6000共混物，其羟基酪醇的溶解完全需要55分钟。
[0042]实施例2
[0043]抗氧化胶囊的制备
[0044]鹿茸微粉:橄榄萃取物=25:250
[0045]操作:共混物的制备如同实施例1，取粉碎后的共混物，加入微粉硅胶，混匀，填充
胶囊即得。
[0046]经体外溶出试验表明:经体外溶出试验表明:经固体分散技术制成的胶囊45分钟羟基酪醇溶出度高出简单物理混合所制成的胶囊的溶出度一倍。
[0047]实施例3
[0048]抗氧化胶囊的制备
[0049]鹿茸微粉:橄榄萃取物=25:250
[0050]操作:取250g重量的PEG6000，共混物的制备如同实施例1，取粉碎后的共混物，加入微粉硅胶，混匀，填充胶囊即得。
[0051]经体外溶出试验表明:经体外溶出试验表明:经固体分散技术制成的胶囊45分钟羟基酪醇溶出度高出简单物理混合所制成的胶囊的溶出度一倍。
[0052]实施例4
[0053]抗氧化颗粒的制备:
[0054]鹿茸微粉:橄榄萃取物=15:250
[0055]操作:取250g重量的PEG6000，加热至70°C，搅拌溶解完全，加入250g重量的橄榄萃取物搅拌15分钟，溶解完全，再加入15g重量的鹿茸微粉搅拌，分散均匀，并迅速放入冰水浴中冷却，固化后，粉碎，即得固体共混物。[0056]经体外溶出试验结果表明，所得的共混物以羟基酪醇为检测指标，15分钟即达到溶解完全，而鹿茸微粉，橄榄萃取物及PVPk30共混物，其羟基酪醇的溶解完全需要50分钟。
[0057]所得的共混物加入乳糖、粘合剂制粒，烘干分装即得颗粒剂。
[0058]抗氧化缓释胶囊的制备:
[0059]实施例5
[0060]鹿茸微粉:橄榄叶萃取物=50:1000
[0061]操作:取50g重量的乙基纤维素，加入乙醇搅拌溶解完全，加入100g重量的橄榄萃取物研磨30分钟，挥散乙醇，烘干，粉碎，即得固体共混物。
[0062]所得的共混物加入淀粉，乳糖、硬脂酸镁混匀，充填胶囊，该胶囊可持续释放12小时。
[0063]实施例6
[0064]抗氧化干混悬剂的制备:
[0065]鹿茸微粉:橄榄叶萃取物=25:250
[0066]操作:取500g重量的PEG6000，加热至70°C，搅拌溶解完全，加入250g重量的橄榄萃取物搅拌15分钟，溶解完全，再加入25g重量的鹿茸微粉搅拌，分散均匀，并迅速放入冰水浴中冷却，固化后，粉碎，即得固体共混物。
[0067]所得的共混物加入乳糖、羧甲基纤维素钠、甜味剂、香精等混匀分装即得干混悬剂。
[0068]实施例7
[0069]抗氧化片剂的制备:
[0070]鹿茸微粉:橄榄叶萃取物=10: 250
[0071]操作:取750g重量的PEG6000，加热至70°C，搅拌溶解完全，加入250g重量的橄榄萃取物搅拌15分钟，溶解完全，再加入IOg重量的鹿茸微粉搅拌，分散均匀，并迅速放入冰水浴中冷却，固化后，粉碎，即得固体共混物。
[0072]所得的共混物加入直压乳糖，羧甲基淀粉纳、硬脂酸镁，二氧化硅混合均匀，压片即得片剂。经体外溶出试验结果表明，所得的片剂以羟基酪醇为检测指标，20分钟即达到溶出完全。
[0073]实施例8
[0074]抗氧化片剂的制备:
[0075]鹿茸微粉:橄榄叶萃取物=10: 250
[0076]操作:取250g重量的甘露醇，适量水，研磨，加入250g重量的橄榄萃取物研磨30分钟，再加入IOg重量的鹿茸微粉研磨，分散均匀，烘干后，粉碎，即得固体共混物。
[0077]所得的共混物加入直压乳糖，羧甲基淀粉纳、硬脂酸镁，二氧化硅混合均匀，压片即得片剂。经体外溶出试验结果表明，所得的片剂以羟基酪醇为检测指标，20分钟即达到溶出完全。
[0078]实施例9 [0079]抗氧化片剂的制备:
[0080]鹿茸微粉:橄榄叶萃取物=10: 250
[0081]操作:取500g重量的聚维酮，加适量乙醇，搅拌溶解完全，加入250g重量的橄榄萃取物搅拌30分钟，溶解完全，再加入1Og重量的鹿茸微粉搅拌，分散均匀，并迅速放入冰水浴中冷却，烘干固化后，粉碎，即得固体共混物。
[0082]所得的共混物加入直压乳糖，羧甲基淀粉纳、硬脂酸镁，二氧化硅混合均匀，压片即得片剂。经体外溶出试验 结果表明，所得的片剂以羟基酪醇为检测指标，15分钟即达到溶出完全。