专利名称：一种治疗病毒性肝炎药物组合物的检测方法病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的常见传染病，具有传染性强、传播途径复杂、 流行面广泛，发病率较高等特点。临床上主要表现为乏力、食欲减退、恶心、呕吐、肝肿大及 肝功能损害，部分病人可有黄疸和发热。有些患者出现荨麻疹、关节痛或上呼吸道症状，严 重者甚至会发展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康。目前临床上所用治疗病毒性肝炎 的药物虽然具有一定的疗效，但不同程度地存在易使机体产生抗药性及成瘾性、副作用明 显等缺陷。
本发明目的在于提供一种药物组合物；本发明另一目的在于提供一种治疗病毒性 肝炎的药物组合物；本发明的第三个目的在于提供该药物组合物的制备方法；本发明的第 四个目的在于提供该药物组合物的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案1、2实现技术方案1 本发明药物组合物的原料药组成为茯苓500-1500重量份、茵陈500-1500重量份、白术500-1500重量份、郁金 150-450重量份、当归250-750重量份、琥珀50-150重量份、白芍(炒)500-1500重量份、半 枝莲500-1500重量份、砂仁100-300重量份、虎杖250-750重量份、丹参500-1500重量份、 泽兰250-750重量份、柴胡150-450重量份、广藿香150-450重量份、佩兰250-750重量份、 红花150-450重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茯苓960重量份、茵陈960重量份、白术960重量份、郁金320重量份、当归480重 量份、琥珀96重量份、白芍(炒)960重量份、半枝莲960重量份、砂仁192重量份、虎杖480 重量份、丹参960重量份、泽兰480重量份、柴胡320重量份、广藿香320重量份、佩兰480 重量份、红花320重量份。技术方案2:本发明药物组合物的原料药组成为茯等500-1500重量份、茵陈500-1500重量份、郁金150-450重量份、当归250-750 重量份、琥珀50-150重量份、白芍(炒)500-1500重量份、半枝莲500-1500重量份、砂仁100-300重量份、虎杖250-750重量份、丹参500-1500重量份、泽兰250-750重量份、柴胡 150-450重量份、广藿香150-450重量份、佩兰250-750重量份、红花150-450重量份、板蓝 根500-1500重量份、绵马贯众250-750重量份、白花蛇舌草500-1500重量份、重楼250-750重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茯苓960重量份、茵陈960重量份、郁金320重量份、当归480重量份、琥珀96重量 份、白芍(炒)960重量份、半枝莲960重量份、砂仁192重量份、虎杖480重量份、丹参960 重量份、泽兰480重量份、柴胡320重量份、广藿香320重量份、佩兰480重量份、红花320重 量份、板蓝根960重量份、绵马贯众480重量份、白花蛇舌草960重量份、重楼480重量份。取本发明技术方案1、2的药物组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成 临床接受的剂型，包括但不限于合剂、浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、 缓释剂、口服液体制剂。本发明药物组合物技术方案1制备合剂方法为当归、郁金、广藿香、佩兰、砂仁、 泽兰提取挥发油6-10小时，蒸馏后的水溶液另器收集；挥发油用3-5倍重量份的β -环 糊精饱和水溶液法包结，干燥，得挥发油环糊精包结物，备用；丹参用4-8倍重量份 的85%乙醇回流提取1-3次，每次0. 5-1. 5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇 味，得丹参提取液，备用；药渣与其余药味加水煎煮1-3次，每次加6-10倍重量份的水煎煮 1-2小时，合并煎液，滤过；滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60 65°C相对密度为 1.02 1.04的稠膏I，加乙醇使含醇量达60-80%，静置12-36小时，滤过，滤液回收乙醇 至适量，与上述丹参提取液合并，并浓缩至60 65°C相对密度为1. 10-1. 15的稠膏II，加入 80%的单糖浆900-1200体积份，挥发油β-环糊精包结物粉碎成细粉，加入浸膏内；再加入 苯甲酸钠9-10g，搅勻，加水至3000-4500体积份，滤过，灌装，灭菌，即得。本发明药物组合物技术方案2制备方法为以上十九味，当归、郁金、广藿香、佩 兰、砂仁、泽兰提取挥发油6-10小时，蒸馏后的水溶液另器收集；挥发油用3-5倍重量份的 β-环糊精饱和水溶液法包结，干燥，得挥发油β-环糊精包结物，备用；丹参用4-8倍重量 份的85%乙醇回流提取1-3次，每次0. 5-1. 5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇 味，得丹参提取液，备用；药渣与其余茵陈等十二味加水煎煮1-3次，每次加6-10倍重量份 的水煎煮1-2小时，合并煎液，滤过；滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60 65°C相 对密度为1. 02 1. 04的稠膏I，加乙醇使含醇量达60-80%，静置12-36小时，滤过，滤液 回收乙醇至适量，与上述丹参提取液合并，浓缩至相对密度为1. 10-1. 15的稠膏II，加入挥 发油β -环糊精包结物粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型， 包括但不限于合剂、浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体 制剂或冻干粉针剂。本发明药物组合物技术方案2制备合剂方法优选为以上十九味，当归、郁金、广 藿香、佩兰、砂仁、泽兰提取挥发油8小时，蒸馏后的水溶液另器收集；挥发油用4倍重量份 的β-环糊精饱和水溶液法40°C包结，40°C干燥，得挥发油β-环糊精包结物，备用；丹参 用6倍重量份的85%乙醇回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至 无醇味，得丹参提取液，备用；药渣与其余茵陈等十二味加水煎煮2次，每次加8倍量水煎煮 1. 5小时，合并煎液，滤过；滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60 65°C相对密度为1. 02 1. 04的稠膏I，加乙醇使含醇量达70%，静置M小时，滤过，滤液回收乙醇至适量， 与上述丹参提取液合并，并浓缩至60 65°C相对密度为1. 10-1. 15的稠膏II，加入80% 的单糖浆960体积份，挥发油β-环糊精包结物粉碎成细粉，加入浸膏内；再加入苯甲酸钠 9. 6g，加水至3200体积份，滤过，灌装，灭菌，即得。本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或 几种鉴别A、取本药物组合物制剂1/100-3/100日用剂量，加水10_30ml使溶解，用乙 酸乙酯萃取1-3次，第一次20-40ml，第二次10_30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙 酸乙酯0. 5-1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈蒿对照药材0. 5-1. 5g，加水40_60ml， 煎煮0. 5-1. 5小时，取上清液，浓缩至10-30ml，用乙酸乙酯萃取1_3次，第一次20_40ml， 第二次10-30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯0. 5-1. 5ml使溶解，作为对照 药材溶液；吸取供试品溶液0. 5-1. 5 μ 1，对照药材溶液4-6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以0.5-2 0.5-2比例的60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置 365nm紫外光灯下观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧 光斑点；B、取本药物组合物制剂4/1000-8/1000日用剂量研细，加40-60 %乙醇5_25ml，超 声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含 0. 5-1. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-15 μ 1，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以30-50 1-10 5-15 0. 1-0. 3比例的三氯甲烷-乙酸 乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10%香草醛硫酸溶液，100-110°C加热 至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C、取本药物组合物制剂1/100-5/100日用剂量，研细，加乙醚20_40ml，回流提取 20-40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0. 4-0. 6ml使溶解，作为供试品溶液；另取当 归对照药材lg，加乙醚5-15ml，超声处理5-15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯Iml 使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-6 μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以5-15 0. 1-1. 0比例的60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开， 取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的荧光斑点；D、取丹参酮II A对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Umg的溶液，作为对照品溶 液；取本药物组合物制剂1/100-5/100日用剂量，研细，加乙醚20-40ml，回流提取20-40分 钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0. 4-0. 6ml使溶解，作为供试品溶液，吸取供试品溶液 5-15 μ 1，对照品溶液4-6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-8 1比例的环己烷-乙 酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 的暗红色斑点；Ε、取本药物组合物制剂1/100-3/100日用剂量，研细，加甲醇10_30ml，超声处理 10-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1. 5-3. 5mol/L硫酸溶液5_15ml使溶解，置水浴中加 热20-40分钟，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取两次，每次5-15ml，合并三氯甲烷液，蒸干， 残渣加甲醇0. 5-1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每Iml含 0. 5-1. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8 μ 1，分7别点于同一硅胶G薄层板上，以5-25 4-6 0. 5-1. 5比例的30 60°C石油醚-甲酸乙 酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，日光下检视；供试品色谱 中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；5-25 70-95比例的乙腈-水为流动相，检测波长为230nm，理论板数 按芍药苷峰计算应不低于2600 ；对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品4_6mg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解 并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml中含芍药苷40-60 μ g的对照品溶液；供试品溶液制备取装量差异项下的本药物组合物制剂，研细，取6/10000-1/1000 日用剂量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50-70 %甲醇15-35ml，密塞，称定重量，功率 250W，频率40KHZ超声处理20-40分钟，取出，放冷，再称定重量，用50-70%甲醇补足减少重 量，摇勻，取上清液，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5_15μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得；本药物组合物制剂每日用剂量含白芍以芍药苷C23H28O11计，应不得少于50_70mg。本发明所述重量份与体积份的关系为克/毫升。本发明药物组合物不同制剂的日用剂量(每日服用剂量或每日使用剂量)因制剂 不同而不同，但不同制剂的日用剂量中含相当生药量相同。本发明质量检测方法以日用剂 量为计量单位。按照原药材的量换算，成人每日用剂量相当原药材的量为280-360g。本发明药物组合物经实验研究证实有显著恢复ALT、AST、GGT、BiL等肝功能主要 指标的作用具备见效快，无毒副作用，使用安全，获效后不易复发等优势。本发明组合物相比现有制剂具备很好的药效，本发明药物组合物的辅料工艺经过 筛选，发现挥发油与β-环糊精在一定的条件及配比下包合，可以达到较好的疗效；本发明 所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法 中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、 结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的 筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法 测定的产品相比其他方法测定的产品在药效上表现的更为稳定。说明书附图是挥发油β -环糊精包结实验流程图。

1.对急性肝损伤的保护作用取昆明小鼠84只，体重18_20g，雌雄各半，随机分为7组。第一组正常对照组， 每日灌服等量饮用水；第二组模型组，每日灌服等量饮用水；第三组药物组I，灌服药 物组I药液30ml (相当于生药9. 32g)/kg体重·日；第四组药物组II，灌服药物组II药 液30ml (相当于生药9. 32g)/kg体重·日；第五组对照组，灌服0. 4g/ml清热疏肝合剂 0.;3ml/10g(相当于含生药134g/kg)体重 日。第二 五组，在连续给药14天后，用D-半 乳糖胺0. 8g/kg体重小鼠腹腔注射进行造模。在造模24小时末次给药半小时后，从小鼠眼 眶取血，测SGPT、SG0T含量，结果见表1。表1本发明药物组对D-半乳糖胺所致小鼠急性肝损伤的保护作用(X士SD)


本发明公开了一种治疗病毒性肝炎的药物组合物检测方法，该药物组合物的原料药组成为茵陈、板蓝根、绵马贯众、茯苓、郁金、半枝莲、广藿香等。本发明所提供的中药组合物的检测方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品相比其他方法测定的产品在药效上表现的更为稳定。