专利名称：一种高纯度银杏叶组合物，含其制剂及其制备方法银杏，为银杏科银杏属多年生落叶乔木银杏，在地球上存在约2亿多年，素有“天然活化石”之称。银杏又名公孙树、白果树等，其种子白果仁作为止咳平喘、缩小便、止带浊的中药在我国已有很久历史。其叶子银杏叶又称白果叶，味苦、甘涩、性平、小毒。银杏叶的化学成分很复杂，迄今已发现170多种化合物，主要为黄酮类、萜类、醇类、生物碱类、聚异戊二烯类、多糖等具有药理作用的活性成分，有毒成分为银杏酸。银杏叶药用最早载于《神农本草经》，早在宋朝我国民间就使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎。我国药典中记载银杏叶有润肺、平喘、止痛之功效，用于肺虚咳嗽、冠心病心绞痛寸。现代研究证实，银杏叶提取物具有以下方面的应用1、治疗冠心病心绞痛60年代我国利用银杏叶提取物“6911”治疗冠心病，银杏叶提取物对治疗冠心病心绞痛有明显的作用，可改善冠脉血流量、减少冠脉阻力、减少心肌耗氧量，可明显改善冠心病患者的临床症状，如对头晕、胸闷、心悸、气短、乏力等均有较好的改善作用；2、治疗高脂血症，银杏叶提取物对高脂血症有治疗作用，可明显降低血脂水平，降低中老年人冠心病的发病率；3、治疗脑血管疾病通过对银杏叶提取物制剂的临床研究，发现他能够改善细胞血液循环、活化细胞代谢，因此对老年痴呆症、脑损伤后遗症、脑血栓等疾病的疗效显著；4、抗癌作用银杏叶提取物还能抑制亚硝胺等物质的致癌作用。目前国内报道的银杏叶提取方法的文献有很多，如中国专利申请97116798. 2公开了一种超临界二氧化碳从银杏叶中萃取分离黄酮和萜内酯的方法，将银杏叶装入萃取釜内，升温到50-60°C，开动二氧化碳泵，升压到25-35兆帕，开动改性剂泵送出改性剂，使二氧化碳和改性剂在预热器内预热并送入萃取釜，动态萃取3-5小时，停泵、降压，从萃取泵放出含有银杏黄酮类萃取物，和从分离器内放出银杏萜内酯类萃取物。但超临界萃取法存在设备复杂，产品稳定性差的缺点，不利于大规模生产。中国专利申请00120352. 5公开了一种微波提取银杏黄酮和银杏内酯类物质的方法，采用频率为M50MHz或915MHz、功率为500-15000瓦的微波对银杏叶在选自水、(；-(；的醇、乙醚、丙酮或其混合物的溶剂中进行处理，从银杏叶提取银杏黄酮和萜内酯类物质的方法。但目前微波萃取基本上还停留在实验室小样品的提取及分析，使用设备简陋，有的还使用家用微波炉。工业化微波提取器尚未见报道。中国专利申请200810162070. 1公开了一种银杏叶提取物的制备方法及其应用， 包括如下步骤a)将银杏叶洗净、烘干；b)粉碎、过筛；c)乙醇浸泡(所用酒精浓度为70-80% ) ；d)超声波细胞粉碎机振荡；e)提取、过滤；f)真空浓缩、干燥。其采用超声波辅助提取的方法，加速药物有效成分进入溶剂，同时免去高温对提出成分的影响，提取物的得率有较大的提高。提取物中黄酮类物质含量高达36%，银杏萜内酯类含量也高达8%以上， 而有害物酚酸少于3ppm。但受超声波衰减因素的制约，超声有效作用区域为一环形，导致提取罐不能太大，否则中央就会形成超声空白区，影响提取效果。而且，功率也难以和罐容积相匹配，超声设备制造难度大，成本高，不适宜大生产。目前大生产常规用法还是化学溶剂浸提法，并结合萃取法、树脂吸附法分离、精制银杏叶提取物。如中国专利申请20061007M35. 2公开了一种银杏叶提取物及该提取物高纯度有效成分的分离生产工艺，公开了一种提取并分离高纯度银杏内酯和银杏黄酮的方法。采用大孔吸附树脂色谱分离技术，将银杏药材用水提取，水提液直接上大孔吸附树脂柱，再依次用蒸馏水，5-25%乙醇，0. 01-10%碱水，蒸馏水和30-95%乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，分别收集碱水洗脱液和30-95%乙醇洗脱液，再分别浓缩、纯化可得到高纯度的银杏内酯或银杏黄酮。但该方法采用多步进行洗脱，有效成分损失较大。为了除去银杏叶中的毒性成分银杏酸，也有报道在提取过程中增加萃取步骤进行脱除。如中国专利申请03131915. 7公开了一种萃取法从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法，一种通过有机溶剂萃取从银杏叶提取物中脱除银杏酸的方法。其主要含精制、萃取、干燥几道工序，其中精制工序是将粉碎后的银杏叶提取物加入甲醇或乙醇搅拌溶解放置、过滤、减压浓缩干燥；萃取工序是取精制后的银杏叶提取物用乙醇或丙酮搅拌溶解后加入到萃取器中，加入烷烃类物质，混和均勻后静置分层，去除上层，下层重复操作数次，将下层物质放置在干燥设备中进行干燥。能够获得银杏酸小于5ppm的银杏叶提取物。中国专利申请02129905. 6公开了银杏叶提取物中由银杏叶总黄酮苷提取物A和银杏叶总内酯提取物B混合而成，提取物A中含总黄酮苷的量为65%以上，提取物B含总内酯75%以上，提取物A和提取物B的混合比例为4.20-5.0 1. 05-1. 80 (折算后总黄酮苷与总内酯的比为2. 73-3. 25 0. 79-1. 35)，混合后提取物含总黄酮苷和总内酯65%以上， 银杏酸含量小于5ppm。其中上述提取物A的制备方法为取含银杏叶黄酮苷大于对％和银杏内酯大于6%的银杏叶初提取物，加水超声提取，取上清液，上聚酰胺柱，其中初提取物与聚酰胺的比例为1 8-15，用水清洗，弃去保留体积的水，收集所有内酯馏分，供提取银杏叶总内酯用，继用60%乙醇洗脱，初提取物与洗脱剂60%乙醇的比例为1 80-120，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得黄棕色粉末，该粉末加丙酮超声提取2次，提取液过滤、减压浓缩至干，干固物加醋酸乙酯搅拌处理、过滤、滤渣真空干燥、研细得淡黄色粉末即为提取物A ；提取物B的制备取总黄酮苷提取物制备过程中的聚酰胺用水洗脱的内酯馏分，减压浓缩，醋酸乙酯提取，醋酸乙酯提取液真空浓缩、干燥、研细得提取物B;或聚酰胺用水洗脱的内酯馏分经浓缩、冷却、结晶、过滤，得白色内酯结晶物，内酯结晶物经真空干燥，研细备用，母液在用醋酸乙酯提取，取醋酸乙酯提取液，浓缩、真空干燥、研细得浅黄白色的粉末，加入上述内酯结晶物，混合均勻即为提取物B。上述方法中在制备银杏叶总黄酮苷提取物A时使用了传统的聚酰胺树脂，该树脂带有酰胺基，对醇羟基具有良好的吸附效果，而对内酯则基本没有吸附能力，但是其除杂效果并不理想；第二，在聚酰胺树脂洗脱时，先用水洗脱，再用60%乙醇洗脱，先用水洗脱不能很好的去除杂质，需要增加后续步骤除杂，而用60%乙醇洗脱，对总黄酮的洗脱能力较差，获得的总黄酮含量较低；第三，因为上述步骤导致最后得到的总黄酮纯度不高，因此增加了用丙酮、乙酸乙酯处理的步骤，增加了带入新杂质的风险。为了克服现有技术中杂质含量高，总黄酮、内酯含量少的缺点，发明人经过大量的实验研究证实，最后提出了本发明。
本发明的目的是提供一种银杏叶组合物及其制备方法。本发明提供的一种银杏叶组合物，由重量比为3-9 1银杏总内酯精制物和银杏总黄酮精制物组成，且该组合物中总银杏酸含量不超过百万分之三。优选地，本发明提供的银杏叶组合物，由重量比为4-8 1银杏总内酯精制物和银杏总黄酮精制物组成，且该组合物中总银杏酸含量不超过百万分之二。优选地，本发明提供的银杏叶组合物，由重量比为5-7 1银杏总内酯精制物和银杏总黄酮精制物组成，且该组合物中总银杏酸含量不超过百万分之一。上述所述银杏总内酯精制物中含有75%以上的银杏内酯A、B和C的混合物；所述银杏总黄酮精制物中含有72%以上的银杏总黄酮醇苷。说明银杏总黄酮精制物和银杏总内酯精制物是个混合物，其控制指标是总黄酮醇苷和银杏内酯A、B、C，表明其纯度。本发明还提供了一种制备银杏叶组合物的方法，包括以下步骤1)银杏叶粗粉用85-95%乙醇提取3次，每次1_3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味并浓缩至每Iml药液中的生药量不少于lg，加水稀释，冷藏静置6- 小时，过滤，滑石粉助滤，过ADS-17树脂柱，先用水冲洗，后用70%乙醇洗脱，待有效成分流出时开始收集洗脱液，浓缩，得银杏粗提物；将银杏粗提物用乙醇溶解，冷藏，过滤，上ADS-F8树脂柱，分别用10%和70%乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液，得到银杏总黄酮和银杏总内酯；2)将银杏总黄酮经冷热处理后，干燥，得银杏总黄酮精制物；3)将银杏总内酯经乙酸乙酯萃取，得银杏总内酯精制物；4)将银杏总黄酮精制物和银杏总内酯精制物混合，即得。本发明还提供了一种含银杏叶组合物的制剂，该制剂由上述银杏叶组合物和药学上可接受的载体或稀释剂组成。所述制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液、悬浮液或注射剂，所述注射剂为注射液、注射用无菌粉末、注射用冻干粉和注射用浓溶液。优选地，所述制剂为注射液，其中活性成分的含量为总黄酮醇苷的含量不少于 0. 70mg/ml，银杏内酯A的含量不少于0. 07mg/ml，银杏内酯B的含量不少于0. 03mg/ml，银杏内酯C的含量不少于0. 04mg/mL·所述药学上可接受的载体或稀释剂选自填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、增溶剂、 抗氧剂、PH调节剂、等渗调节剂、络合剂、非水溶剂、乳化剂中的一种或几种。所述填充剂选自淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖或微晶纤维素；所述崩解剂选自交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或羧甲基淀粉钠；所述粘合剂选自淀粉、交联聚维酮或糊精；所述润滑剂选自硬脂酸镁、硬脂酸、二氧化硅或滑石粉。所述增溶剂选自泊洛沙姆124、188、237、338、407或吐温-80。所述抗氧剂选自没食子酸丙酯或谷胱甘肽。所述pH调节剂选自氢氧化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠或盐酸。所述等渗调节剂选自氯化钠或葡萄糖。 所述络合剂选自依地酸钙钠。所述非水溶剂选自乙醇、丙二醇或植物油。所述乳化剂选自卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、甘油单油酸脂或泊洛沙姆68。上述制剂可采用本领域常规的工艺制备。本发明还提供了银杏叶组合物及其制剂在制备防治冠心病、心绞痛；脑梗塞、痴呆；视网膜静脉阻塞；消化性溃疡、酒精肝、脂肪肝；肾小球肾炎、肾病综合症、肾功能衰竭； 肺心病；精神分裂症、抑郁症；突发性耳聋、噪声性耳聋的药物中的应用。本发明提供的银杏叶提取物的关键点是1、采用高浓度乙醇进行热回流提取目前采用化学溶剂提取银杏叶的报道中，所用溶剂有水、乙醇和丙酮，其中银杏叶中有效成分更易溶于乙醇，水提取不但有效成分的提取率低，而且一并提出的杂质较多，不利于后续的处理步骤；丙酮对人体的危害较大，一般不宜使用。而采用稀乙醇提取是目前的主流工艺，主要采用浓度为50-60%的稀乙醇，但稀乙醇提取也存在一定问题，在提取的过程中提出较多水溶性杂质，加重了后续处理的难度，一旦处理不到位，将导致产品颜色深， 质量稳定性差等问题。本发明采用高浓度乙醇进行热回流提取，避免了稀乙醇提取带来的不良影响，最大限度的降低了水溶性杂质的带入，缓解了后续处理的难度，而且，提出的不同类别的有效成分含量均很高。2、低温水沉常规方法为在常温情况下水沉静置，通常去除杂质的效果不显著，往往导致上树脂吸附前的药液不澄清，不但污染树脂，而且增加后续处理步骤的难度。本发明采用低温冷沉，除杂效果显著，药液澄明，对树脂污染小。3、采用针对性强的树脂进行分离现有银杏黄酮和银杏内酯的树脂分离方法效果差，本发明通过选择高选择性树脂分离有效成分，避免了常规选择D101、HPD450等树脂进行分离提取，选择性差，有效成分含量低，内酯、黄酮比例不协调等缺点。本发明提供的银杏叶组合物的优点1、与现有技术相比，尤其是中国专利申请02129905. 6 (简称02年专利)相比，本发明的区别在于1) 02年专利在制备银杏叶总黄酮苷提取物A时采用了传统的聚酰胺树脂，该树脂带有酰胺基，对醇羟基具有良好的吸附效果，而对内酯则基本没有吸附能力，因此可以将内酯、黄酮分开，同时去除鞣质，但现在普遍的观点是聚酰胺树脂除杂效果并不理想。本发明使用的ADS-F8是酰胺型树脂，是一种极性凝胶型氢键选择吸附性树脂，对黄酮类化合物具有极高的选择性，兼顾了聚酰胺树脂对鞣质的吸附和凝胶树脂的除杂效果，与聚酰胺树脂比较来说，对色素的去除效果更好。2)洗脱液及浓度不同02年专利先用水洗脱，再用60%乙醇洗脱，而本发明是先用10%乙醇洗脱，再用70%乙醇洗脱10%乙醇较水而言，能更好的去除杂质，避免后续为除杂而增加处理步骤，进而更大的损失有效成分；70%乙醇较60%乙醇而言，对总黄酮的洗脱能力更佳，获得的总黄酮含量高。3)总黄酮部分的纯化不同由于前面的步骤不同，导致02年专利为了得到纯度高的总黄酮，不得不用丙酮、乙酸乙酯进行处理，增加了带入新杂质的风险。而本发明前面的处理较好，后续不需再特意除杂，仅进行冷热处理即可，简单、方便，不会带入新杂质。2、本发明提供的组合物中银杏总黄酮和银杏总内酯的纯度高，采用冷藏、专用树脂分离等步骤对药液进行处理，有效去除杂质，最终产品中杂质少，由其制备的注射剂颜色浅，有效成分比例适宜，质量稳定，安全有效。3、本发明提供的组合物可以治疗急性脑梗死、心绞痛、痴呆，效果优于上市剂型及 02129905. 6专利产品。0.5倍和0. 35倍，合并3次萃取的乙酸乙酯溶液，依次加入0. 4倍量3%的乙酸钠溶液和
1.5倍量纯化水进行洗涤，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯至近干，减压干燥，得银杏总内酯精制物(收率0.52% )；4)将银杏总黄酮精制物和银杏总内酯精制物按9 1比例混合，即得。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例1，本实施例中，总黄酮精制物中总黄酮的纯度为72%，总内酯精制物中总内酯的纯度为98%，未检出总银杏酸。实施例4 银杏叶组合物1、提取方法1)银杏叶粗粉用乙醇提取3次，第一次加5倍量88%乙醇浸泡0. 5小时后再回流提取3小时，第二次加4倍量88%乙醇提取2小时，第三次加3倍量85%乙醇提取2小时， 滤过，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至含生药2g/ml，加8倍量水稀释，冷却至10°C以下静置6小时，过滤，滑石粉助滤，以1. 5BV/h的流速过ADS-17树脂柱，先用树脂2倍量纯化水以1. 5BV/h的流速冲洗，后用树脂2倍量70%乙醇以1. 5BV/h的流速洗脱，待有效成分流出时开始收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，得银杏粗提物。将银杏粗提物用20倍量60%乙醇溶解10°C以下静置16小时，过滤至澄清，加乙醇并使含醇量达到10%，以0. 7BV/h的流速过ADS-F8树脂柱，先用2. 5BV的10%乙醇以0. 7BV/h的流速冲洗，收集流出液和冲洗液，回收乙醇至无醇味，得到银杏总内酯；然后用树脂2. 5倍量70%乙醇以0. 7BV/h的流速洗脱， 收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，得到银杏总黄酮；2)将银杏总黄酮用乙醇溶解至含生药0. 7g/ml，煮沸15分钟，5°C以下放置35小时，过滤至澄清，浓缩，干燥，粉碎得银杏总黄酮精制物(收率0.70%)；3)将银杏总内酯用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯的用量均为总内酯的0. 5倍，合并3次萃取的乙酸乙酯溶液，依次加入0. 5倍量3%的乙酸钠溶液和1倍量纯化水进行洗涤，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯至近干，减压干燥，得银杏总内酯精制物(收率 0. 57% )；4)将银杏总黄酮精制物和银杏总内酯精制物按8 1比例混合，即得。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例1，本实施例中，总黄酮精制物中总黄酮的纯度为75%，总内酯精制物中总内酯的纯度为96%，未检出总银杏酸。实施例5 银杏叶组合物1、提取方法1)银杏叶粗粉用乙醇提取3次，第一次加5倍量92%乙醇浸泡0. 5小时后再回流提取2. 5小时，第二次加4倍量87%乙醇提取2小时，第三次加3倍量85%乙醇提取1. 5小时，滤过，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至含生药1. 5g/ml，加6倍量水稀释，冷却至10°C 以下静置16小时，过滤，滑石粉助滤，以1. 2BV/h的流速过ADS-17树脂柱，先用树脂3倍量纯化水以1.2BV/h的流速冲洗，后用树脂2倍量70%乙醇以1.2BV/h的流速洗脱，待有效成分流出时开始收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，得银杏粗提物。将银杏粗提物用19倍量 60%乙醇溶解，10°C以下静置18小时，过滤至澄清，加乙醇并使含醇量达到10%，以0. 5BV/ h的流速过ADS-F8树脂柱，先用IBV的10%乙醇以0. 5BV/h的流速冲洗，收集流出液和冲洗液，回收乙醇至无醇味，得到银杏总内酯；然后用树脂2倍量70%乙醇以0. 5BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，得到银杏总黄酮；2)将银杏总黄酮用乙醇溶解至含生药0.8g/ml，煮沸15分钟，5°C以下放置40小时，过滤至澄清，浓缩，干燥，粉碎得银杏总黄酮精制物(收率0.78%)；
3)将银杏总内酯用乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯的用量分别为总内酯的0. 65倍、 0. 5倍、0. 5倍和0. 35倍，合并4次萃取的乙酸乙酯溶液，依次加入0. 4倍量3%的乙酸钠溶液和2倍量纯化水进行洗涤，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯至近干，减压干燥，得银杏总内酯精制物(收率0.70% )；4)将银杏总黄酮精制物和银杏总内酯精制物按4 1比例混合，即得。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例1，本实施例中，总黄酮精制物中总黄酮的纯度为85%，总内酯精制物中总内酯的纯度为84%，未检出总银杏酸。实施例6 银杏叶组合物注射液1、制备方法1)取实施例1的银杏叶组合物，用注射用水溶解，200目绢布、0. 22 μ m滤膜过滤， 再经过超滤器超滤，使含总黄酮醇苷1. Omg/ml，搅拌10分钟；2)用浓度为10%的NaOH调pH值至5. 1，加热至80°C，加入配制总量0.3%的活性炭脱色，搅拌均勻，煮沸15分钟，冷却至60°C以下调pH值至5. 0，定容，过滤，药液降温至 300C以下经0. 22 μ m滤器精滤，灌装，115°C 30分钟灭菌，包装，即得。2、含量检测方法及结果1)总黄酮醇苷照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0. 4% 磷酸溶液(50 50)为流动相；检测波长为368nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于 2500 ；分离度按山奈素与异鼠李素峰计算，应大于1. 5 ；对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的槲皮素对照品、山奈素对照品、 异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml各含30μ g、30y g、20y g的混合溶液， 作为对照品溶液；供试品溶液的制备精密量取本品(实施例6制备的注射液)10ml，加甲醇16ml， 18%盐酸溶液6ml，置水浴中加热回流1. 5小时，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素与异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量总黄酮醇苷含量=(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)Χ2.51。2)银杏内酯照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-水OO 10 75)为流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论板数按银杏内酯A峰计算应不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品和银杏内酯C 对照品适量，加丙酮制成每Iml各含1. 5mg、0. 25mg、0. 5mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备精密量取本品(实施例6制备的注射液)15ml，加稀盐酸2滴， 调节PH值至2，用乙酸乙酯提取4次(20ml、IOml、IOml、10ml)，合并乙酸乙酯液，用5%醋酸钠溶液20ml洗涤，分取乙酸乙酯液，醋酸钠溶液再以乙酸乙酯IOml洗涤，合并乙酸乙酯液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加丙酮适量使溶解，并转移至2ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液3μ 1与10μ 1，供试品溶液5μ 1-10μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯Α、银杏内酯B、银杏内酯C的含
量，即得。3)总银杏酸照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 1% 磷酸溶液(85 10)为流动相；检测波长为300nm。理论板数按白果新酸峰计算应不低于 4000 ；对照品溶液的制备取白果新酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含 0. 8 μ g的溶液，作为对照品溶液。另取总银杏酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含60 μ g的溶液，作为定位用对照溶液。供试品溶液的制备精密量取本品(实施例6制备的注射液)50ml，加氯化钠使饱和，用石油醚(60-90°C )振摇提取4次，每次30ml，合并石油醚液，通过铺有少量无水硫酸钠的漏斗，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及定位用对照溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，计算供试品溶液中与总银杏酸对照品相应色谱峰的总峰面积，以白果新酸为对照品，外标法计算总银杏酸含量，即得。本实施例中，总黄酮醇苷的含量为0.92mg/ml，银杏内酯A的含量为0. 10mg/ml，银杏内酯B的含量为0. (Mmg/ml，银杏内酯C的含量为0. 06mg/ml，未检出总银杏酸。实施例7 银杏叶组合物注射液1、制备方法取实施例2的银杏叶组合物，按实施例6的制备方法制成注射液。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例6，本实施例中，该组合物中总黄酮醇苷的含量为0. 8%ig/ml，银杏内酯A的含量为0. 09mg/ml，银杏内酯B的含量为0. 05mg/ml, 银杏内酯C的含量为0. 07mg/ml，未检出总银杏酸。实施例8 银杏叶组合物注射液1、制备方法取实施例3的银杏叶组合物，按实施例6的制备方法制成注射液。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例6，本实施例中，该组合物中总黄酮醇苷的含量为0. 92mg/ml，银杏内酯A的含量为0. 07mg/ml，银杏内酯B的含量为0. 03mg/ml, 银杏内酯C的含量为0. (Mmg/ml，未检出总银杏酸。实施例9 银杏叶组合物注射液1、制备方法取实施例4的银杏叶组合物，按实施例6的制备方法制成注射液。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例6，本实施例中，该组合物中总黄酮醇苷的含量为0. 89mg/ml，银杏内酯A的含量为0. 07mg/ml，银杏内酯B的含量为0. 03mg/ml, 银杏内酯C的含量为0. (Mmg/ml，未检出总银杏酸。实施例10 银杏叶组合物注射液
1、制备方法取实施例5的银杏叶组合物，按实施例6的制备方法制成注射液。2、含量检测方法及结果检测方法同实施例6，本实施例中，该组合物中总黄酮醇苷的含量为0. 90mg/ml，银杏内酯A的含量为0. llmg/ml，银杏内酯B的含量为0. 05mg/ml, 银杏内酯C的含量为0. 06mg/ml，未检出总银杏酸。对比例1 采用02129905. 6的方法1、提取物A的制备取含银杏叶黄酮苷大于和银杏内酯大于6%的银杏叶初提取物，加水超声提取，取上清液，上聚酰胺柱，弃去保留体积的水，收集所有内酯馏分，供提取银杏叶总内酯用，再用60 %乙醇洗脱，初提取物与洗脱剂60 %乙醇的比例为 1 80-120，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得黄棕色粉末，该粉末加丙酮超声提取2次，提取液过滤、减压浓缩至干，干固物加醋酸乙酯搅拌处理、过滤、滤渣真空干燥、研细得淡黄色粉末即为提取物A(收率0.47% )；2、提取物B的制备取聚酰胺用水洗脱的内酯馏分经浓缩、冷却、结晶、过滤，得白色内酯结晶物，内酯结晶物经真空干燥，研细备用，母液再用醋酸乙酯提取，取醋酸乙酯提取液，浓缩、真空干燥、研细得浅黄白色的粉末，加入上述内酯结晶物，混合均勻即为提取物 B(收率 0.38% )；3、将提取物A和提取物B按照(4. 20-5. 0) (1. 05-1. 80)混合均勻，得到高活性的银杏叶提取物。4、含量按实施例1中方法检测，提取物A中总黄酮醇苷的含量为70. 6%，提取物 B中总内酯含量为77. 2%，总银杏酸含量为4ppm。5、按实施例6的制备方法制成注射液。6、含量检测按实施例6的检测方法检验，该注射液总黄酮醇苷的含量为0. 82mg/ ml，银杏内酯的含量为0. 21mg/ml。对比例2:上市注射液1、提取物制备方法取银杏叶粉碎，加入稀乙醇回流提取两次，第一次池，第二次1.证。合并乙醇提取液，40°C以下时用NaOH测调pH值7. 5，静置12小时；上清液过滤，滤液负压回收乙醇至无醇味，加纯化水适量，通过大孔吸附树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇冲洗树脂柱。再用70% 乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，并浓缩成稠膏，干燥，粉碎，得提取物。2、注射液制备方法按实施例6制备方法制成注射液。3、含量检测按实施例6检测方法检测，该注射液总黄酮醇苷的含量为0. SOmg/ ml，银杏内酯的含量为0. 21mg/ml。实验例1 组合物、注射液含量及杂质的检测1、组合物含量检测对实施例1-5和对比例1组合物、对比例2制备的提取物含量进行检测，含量检测方法为实施例1中的检测方法，得到结果见表1 表1:组合物含量测定


本发明涉及一种高纯度银杏叶组合物，含其制剂及其制备方法，该组合物中由重量比为3-9∶1银杏总黄酮精制物和银杏总内酯精制物组成，且该组合物中总银杏酸含量不超过百万分之三。总黄酮和内酯的纯度高，杂质少，由其制备的注射剂颜色浅，有效成分比例适宜，质量稳定，安全有效。