专利名称：一种氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法氰烯菌酯属于氰基丙烯酸酯类，化学名称为2-氰基-3-氨基丙烯酸乙酯，实验式 C12H12N2O2，是一种结构新颖，作用方式独特的新型杀菌剂。氰烯菌酯作为一种新型农药，可以被广泛用于多种田间病害，对于已经产生抗性水平的病菌有良好抑菌效果。氰烯菌酯对镰刀属病菌引起的病害防效突出，在赤霉病、枯萎病和恶苗病的防治上效果非常好，目前无任何抗性产生，对被病菌侵染的作物具有保护和治疗的功效，且使用后不影响作物的正常生长，高效、微毒、低残留，可大幅改善农产品品质，因此具有极高的推广价值和市场前景。
发明目的本发明的目的是提供一种氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法和应用， 用于实现对氰烯菌酯或含有氰烯菌酯的农药进行更安全、快速、准确、稳定的定量分析。技术方案为实现上述目的，本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法，包括如下步骤(1)将氰烯菌酯用有机溶剂溶解并定容；(2)以步骤(1)的有机溶剂和水作为流动相，流速为lml/min，色谱柱为Cw柱，柱箱温度25°C，检测波长为280 300nm，进样体积10 μ 1，采用紫外线检测器进行定量分析。本发明经过实际测试，用反相高效液相色谱法对氰烯菌酯的含量进行分析，通过对氰烯菌酯进行紫外扫描，得到紫外吸收曲线，在检测波长为^Onm附近有较好的吸收，杂质影响最小，流动相无吸收。所述步骤(1)中的氰烯菌酯包括氰烯菌酯标准样品以及需要进行监测分析的含有氰烯菌酯的农药，经过溶解、定容后，分别得到氰烯菌酯的标样溶液和试样溶液。氰烯菌酯原药为白色固体粉末，所述步骤(1)中的有机溶剂包括甲醇或乙腈或二者的组合。本发明利用上述有机溶剂和水作为高效液相色谱的流动相。所述步骤( 中有机溶剂和水的体积比为2 3 4 1。作为本发明的优化方案，所述步骤( 中有机溶剂和水的体积比为3 2。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1.5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，用外标法计算含量，以质量百分比计算氰烯菌酯的含量。计算公式如下X1 = ^2Xm1 X P)/^1Xm2) ；(1)rr标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。本发明采用高效液相色谱法对氰烯菌酯农药进行定量分析，对氰烯菌酯农药的剂型并无严格要求。所述的氰烯菌酯农药可以是水分散粒剂、可湿性粉剂、水乳剂、悬浮剂、乳油、种子处理剂的任意一种。有益效果本发明的一种氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法对氰烯菌酯农药的液相色谱检测方法进行了探索和归纳，得到了以290nm为检测波长的最优方案，该方法对氰烯菌酯类农药的检测非常方便、精确，对该类农药产品的生产和质量检测具有重要意义。图1是氰烯菌酯的紫外吸收曲线；图2是98%氰烯菌酯标样的液相色谱图；图3是氰烯菌酯悬浮剂的液相色谱图；图4是氰烯菌酯进样量和峰面积的线性关系。
量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的C18不锈钢柱(150mmX4. 6mm)。流动相为甲醇+水=60+40ml (V/V)， 流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10μ 1。通过对氰烯菌酯进行紫外扫描，得到氰烯菌酯的紫外吸收曲线(如图1所示)，在280 300nm波长附近的吸收较好，杂质响应小， 流动相无吸收，其中以290nm为最优，因此检测波长为^Onm。当高效液相色谱仪运行稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，得到标样、试样的液相色谱图如图2、图3所示，可见保留时间在3. OlOmin的色谱峰，即为氰烯菌酯色谱峰。根据公式(r2XHi1XP)/^ Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。实施例2本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法的分析步骤如下
称取0. 12g(精确至0.0002g)98%的氰烯菌酯标准样品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；称取含有0. 12g(精确至0. 0002g)氰烯菌酯的可湿性粉剂作为试样，于 IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的C18不锈钢柱(150mmX4. 6mm)。流动相为甲醇+水=40+60ml (V/V)， 流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10 μ 1，检测波长为290nm。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，根据公式(r2XHi1XP)/^Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。实施例3本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法的分析步骤如下称取0. 12g(精确至0.0002g)98%的氰烯菌酯标准样品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；称取含有0. 12g (精确至0. 0002g)氰烯菌酯的水乳剂作为试样，于IOOmL容
量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的C18不锈钢柱(150mmX4. 6mm)。流动相为甲醇+水=80+20ml (V/V)， 流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10 μ 1，检测波长为290nm。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，根据公式(r2XHi1XP)/^Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；
Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。实施例4本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法的分析步骤如下称取0. 12g(精确至0.0002g)98%的氰烯菌酯标准样品，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容；称取含有0. 12g(精确至0. 0002g)氰烯菌酯的水分散粒剂作为试样，于 IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的C18不锈钢柱(150mmX4. 6mm)。流动相为乙腈+水=60+40ml (V/V)， 流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10 μ 1，检测波长为290nm。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，根据公式(r2XHi1XP)/^Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。实施例5本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法的分析步骤如下称取0. 12g(精确至0.0002g)98%的氰烯菌酯标准样品，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容；称取含有0. 12g (精确至0. 0002g)氰烯菌酯的乳油作为试样，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的C18不锈钢柱(150mmX4. 6mm)。流动相为乙腈+水=40+60ml (V/V)， 流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10 μ 1，检测波长为290nm。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，根据公式(r2XHi1XP)/^Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。实施例6本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法的分析步骤如下称取0. 12g(精确至0.0002g)98%的氰烯菌酯标准样品，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容；称取含有0. 12g (精确至0. 0002g)氰烯菌酯的浸种剂作为试样，于IOOmL容
量瓶中，用乙腈溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的C18不锈钢柱(150mmX4. 6mm)。流动相为乙腈+水=80+20ml (V/V)， 流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10 μ 1，检测波长为290nm。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，根据公式(r2XHi1XP)/^Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。
实施例7本发明的氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法的分析步骤如下称取0. 12g(精确至0.0002g)98%的氰烯菌酯标准样品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；称取含有0. 12g(精确至0. 0002g)氰烯菌酯的种衣剂作为试样，于IOOmL容
量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色谱仪为Agilent 1200系列，具有可变波长的紫外线检测器，色谱柱选用安捷伦公司生产的Cw不锈钢柱(150mmX4.6mm)。流动相为甲醇+乙腈+水= 40ml+20ml+40ml，流量为lml/min ；柱温为25°C，进样体积为10 μ 1，检测波长为290nm。当高效液相色谱仪运行至稳定后，先注入数针标准溶液，当相邻两针的有效成分峰面积的相对偏差< 1. 5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样分析，根据公式(r2XHi1XP)/^Xm2)计算氰烯菌酯试样中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_标准溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；r2-试样溶液中氰烯菌酯峰面积的平均值；Hi1-标样的质量，g;m2-试样的质量，g。P-标样中氰烯菌酯的质量百分含量，％。实施例8称取氰烯菌酯标样0. 3g(精确至0. 0002g)置于IOOml容量瓶中，用甲醇溶解，定容。用移液管依次准确移取5ml、10ml、15ml、20ml、25ml于100ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻。按实施例1中的色谱条件进行测定。以氰烯菌酯进样量为横坐标，相应的峰面积为纵坐标作图，得到氰烯菌酯线性方程为Y = 2042. 3X+6，相关系数R为0. 9997，如图4 所示。在实施例1中的色谱操作条件下，对实施例1中的待测样品进行6次重复测定，结果为25. 4，25. 7，25. 4，25. 6,25. 3, 25. 8，平均含量为25. 53，标准偏差为0. 019，变异系数为 0. 077%，可见该方法测定的精密度很高。再称取一定量的样品准确加入不同量的氰烯菌酯标样测定其含量，计算平均回收率(回收率=实测值/配置值χ 100% )为100.4%，说明该方法的准确度良好。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。


本发明公开了一种氰烯菌酯的高效液相色谱分析方法，属于农药分析领域。该方法将氰烯菌酯用有机溶剂溶解并定容，以有机溶剂和水作为流动相，流速为1ml/min，色谱柱为C18柱，柱温为25℃，检测波长为280~300nm，进样体积10μl，采用可变波长紫外检测器进行定量分析。本发明对氰烯菌酯农药的液相色谱检测方法进行了探索和归纳，得到了以290nm为检测波长的最优方案，该方法对氰烯菌酯类农药的检测非常方便、精确，对该类农药产品的生产和质量检测具有重要意义。