专利名称：一种人类同种肌腱制备方法肌腱是一种排列规则的致密结缔组织，由胶原、腱细胞和腱基质组成。胶原是肌腱的主要组成部分，占肌腱干重的70 90%，在维持肌腱强度上发挥主导作用。腱细胞是一种形态特殊的成纤维细胞，数量较少，是同种肌腱移植时抗原的主要载体。腱基质为胶原组织提供结构载体，而且其弹性还有助于减少作用于肌腱的摩擦力和剪切力。肌腱连接骨骼肌和肌组织，使肌组织附着于骨或筋膜，将力量传递至骨骼系统，产生关节运动。肌腱/韧带缺损是运动系统常见损伤，由于韧带在组成上与肌腱相似，传统方法多用自体肌腱移植修复受损的肌腱/韧带，但由于自体肌腱移植存在供腱体积不足、数量有限，以及对供区造成新的损伤等问题，近年来，国内外学者较多使用同种肌腱移植来代替自体肌腱用于肌腱/韧带缺损的治疗。例如在前交叉韧带翻修手术中，较之自体肌腱移植，学者们更倾向于将同种肌腱作为首选，目前前交叉韧带翻修手术中同种肌腱使用率达 90% ；再如手部肌腱缺损，尤其是多条肌腱缺损时，自体肌腱来源受限，同种肌腱是目前较为理想的自体肌腱替代物。但是同种肌腱中如果存在活性腱细胞，移植后会导致较为明显的免疫排斥反应，且存在潜在的细菌、病毒感染。公开号CN101496912A公开了一种生物衍生肌腱修复材料及其制备方法，是对合法供体来源的经血清学检测为合格的肌腱，或经检疫后证实健康的动物肌腱进行物理加工和化学处理，除掉软组织、消毒、通过去除脂肪、脱细胞处理，经超步骤( 预冻和冷冻干燥后，对组织进行去纤膜分丝，重新编织处理，最终得到保留肌腱基本结构的一类新型肌腱缺损修复材料。除异种肌腱外，该方法虽然采用了同种肌腱做原料，但操作步骤繁杂，采用诸多化学试剂对肌腱进行消毒、脱脂、脱蛋白，难以完全避免药物残留；经过冷冻干燥、将肌腱解聚、分丝重组等过程，会导致同种肌腱原有结构的改变；采用25kGy较大剂量辐照，易引起肌腱强度变化，影响肌腱性能。
本发明的目的是针对目前同种肌腱移植存在免疫排斥反应和细菌、病毒感染，且操作步骤繁杂、药物残留多、肌腱原有结构和强度改变大的技术问题，提供一种无免疫排斥反应和细菌、病毒感染，且操作简单、无药物残留、肌腱原有结构和强度无改变的人类同种肌腱制备方法。本发明为实现上述技术问题而采取的技术方案为—种人类同种肌腱制备方法，包括以下步骤1)提取人类供体肌腱材料并用生理盐水将肌腱表面的血迹清洗干净；2)将清洗干净的肌腱材料置于-60 _80°C冷冻保存30 90天；3)取步骤( 冷冻后的肌腱材料，室温下复温后，剪去肌腱周围的疏松结缔组织；4)将修剪好的肌腱材料浸入重量比为0.05 2 10 30 70 90的过氧乙酸、乙醇和水的混合溶液中，静置20 50分钟进行病毒灭活；5)用水清洗灭活肌腱至末次清洗液中过氧乙酸含量为0. 1 5ppm ；6)再次修剪步骤( 清洗干净的肌腱，并将肌腱表面的水浙干，在无菌条件下真空包装修剪肌腱后，再次普通包装两次；7)采用钴-60辐照包装好的肌腱再次灭菌后制成。所述的钴-60辐照采用的剂量为10 20kGy。本发明同种肌腱取自供体年龄为15 50岁，无感染病史或体检无感染症状，无恶性肿瘤病史，无病毒性肝炎、梅毒、艾滋病、结核或麻风病史，无自身免疫性疾病，无严重营养不良，接受类固醇治疗不超过3个月，大剂量应用不超过1周，无药物或其它毒物中毒史， 并且在获取供体肌腱前进行如下方面的检测血清学检验HIV I/II抗体、HIV抗原、HIV聚合酶链反应、HBV表面抗原、HBV表面抗体、HBV核心抗体、HCV抗体、人T淋巴细胞病毒抗体 (HTLV I/II抗体)、梅毒的快速血浆反应素试验，在上述检测均为阴性时在1万级洁净间， 严格无菌操作，获取供体。本发明对本发明中的病菌灭活工艺进行了检测，检测结果如下1) PRV的检查结果见表1和表2 表1同种肌腱修复材料过氧乙酸-乙醇灭活PRV的结果本发明涉及一种人类同种肌腱制备方法，属于医用生物材料技术领域。本发明主要解决目前同种肌腱移植存在免疫排斥反应和细菌、病毒感染，且操作步骤繁杂等技术问题。本发明一种人类同种肌腱制备方法，包括以下步骤1)清洗；2)冷冻保存30～90天；3)修剪肌腱周围的疏松结缔组织；4)将修剪好的肌腱材料浸入过氧乙酸、乙醇和水的混合溶液中，静置进行病毒灭活；5)用水清洗灭活肌腱至末次清洗液中的过氧乙酸；6)再次修剪并将肌腱表面的水沥干，在无菌条件下真空包装修剪肌腱后，再次普通包装两次；7)采用钴-60辐照包装好的肌腱再次灭菌后制成。本发明具有无免疫排斥反应和细菌、病毒感染，且操作简单、无药物残留等优点。