假单胞霉素抗真菌组合物和它们的使用方法

文卡特拉加范·瓦苏德范, 托马斯·沃伦·琼斯, 迈克尔·约翰·罗德里古兹, 斯蒂芬尼·安·斯威坦娜

2002年7月24日

2000年4月14日

1999年4月15日

伊莱利利公司, 文卡特拉加范·瓦苏德范, 托马斯·沃伦·琼斯, 迈克尔·约翰·罗德里古兹, 斯蒂芬尼·安·斯威坦那

A61K47/40GK1360505SQ00806261

假单 胞霉素 抗真菌 组合 它们

1.一种在患者需要时，减轻真菌感染症状的方法，包含给予患者有效量的组合物，该组合物包含假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯，和羟烷基-β-环糊精或磺烷基醚-β-环糊精2.根据权利要求1的方法，其中减轻症状包含减少真菌感染的负担3.根据权利要求1的方法，其中减轻症状包含杀死真菌4.根据权利要求1的方法，其中真菌感染包含由于近平滑念珠菌，白色念珠菌，glabrata念珠菌，热带念珠菌，krusei念珠菌，新型隐球菌，烟曲霉和荚膜组织胞浆菌的感染5.根据权利要求1的方法，其中组合物包含羟丙基-β-环糊精6.根据权利要求1的方法，其中组合物包含磺丁基醚-β-环糊精7.根据权利要求1的方法，其中患者没有遭受不可接受的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯注射的副作用8.根据权利要求1的方法，其中给予毒理学相关剂量的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯9.根据权利要求1的方法，其中组合物包含与所给予的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂相比，至少约为1摩尔比例的环糊精10.根据权利要求的方法，进一步包含确定给予假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂的需要；并监测患者假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂外渗的病征11.根据权利要求1的方法，其中的给药包含大约0.1-5mg/kg的每天大约1-3次的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂的非肠道给药12.根据权利要求1的方法，其中减轻真菌感染的症状包含减轻发热，并增加患者的整体健康本质13.根据权利要求1的方法，其中假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂的有效量是有效的抗真菌量14.根据权利要求1的方法，其中假单胞霉素包含假单胞霉素A，假单胞霉素A’，假单胞霉素B，假单胞霉素B’，假单胞霉素C，假单胞霉素C’，其组合，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯15.根据权利要求14的方法，其中假单胞霉素包含假单胞霉素B或或其药学上可接受的盐，水合物，或酯16.根据权利要求1的方法，其中脂缩酚十肽抗真菌剂包含25-B1十肽抗真菌剂A，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯17.一种抗真菌组合物，包含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精和有效抗真菌量的假单胞霉素，脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯；羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精的摩尔数超过假单胞霉素，脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯18.根据权利要求17的抗真菌组合物，包含羟丙基-β-环糊精19.根据权利要求17的抗真菌组合物，包含磺丁基醚-β-环糊精20.根据权利要求17的抗真菌组合物，其中组合物包含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精，与假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂相比，其摩尔比至少约为2∶121.根据权利要求17的抗真菌组合物，进一步包含葡萄糖和醋酸盐缓冲液22.根据权利要求17的抗真菌组合物，其中假单胞霉素包含假单胞霉素A，假单胞霉素A’，假单胞霉素B，假单胞霉素B’，假单胞霉素C，假单胞霉素C’，其组合，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯23.根据权利要求23的抗真菌组合物，其中假单胞霉素包含假单胞霉素B或其药学上可接受的盐，水合物，或酯24.根据权利要求17的抗真菌组合物，其中脂缩酚十肽抗真菌剂包含25-B1十肽抗真菌剂A，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯25.假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯，其与羟烷基-β-环糊精或磺烷基醚-β-环糊精相组合，在制造治疗真菌感染的药物中的用途26.根据权利要求25的用途，其中假单胞霉素包含假单胞霉素A，假单胞霉素A’，假单胞霉素B，假单胞霉素B’，假单胞霉素C，假单胞霉素C’，其组合，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯27.根据权利要求25的用途，其中脂缩酚十肽抗真菌剂包含25-B1十肽抗真菌剂A，或其药学上可接受的盐，水合物，或酯28.根据权利要求25的用途，其中羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精存在于药物中，与假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂相比，其摩尔比至少约为2∶1

本发明涉及治疗真菌感染的组合物和方法，包括假单胞霉素(pseudomycin)或脂缩酚十肽(lipodepsidecapeptide)和环糊精，特别是，羟丙基-β-环糊精或磺基丁基醚-β-环糊精背景真菌感染是人类，特别是免疫损害患者之中，疾病，生活质量下降，和死亡的重要原因人类真菌感染的发病率在过去20年中大大地上升这部分是由于具有变弱或损害的免疫系统的人数增加所致，其中免疫系统是由于器官移植，癌症化疗，AIDS，老化，和其它类似的病症或情况而变弱和损害的这种患者倾向于由于真菌病原体而发病，该病原体是通过群体流行的，但是可以通过运行免疫系统而控制这些病原体是难以控制的，因为某些现有的抗真菌剂或者是高毒性的，或者仅仅抑制真菌的活性例如，多烯是杀真菌的但是有毒；而，吡咯毒性低，但仅仅是制真菌的更重要的是，近来已经有了念珠菌属的吡咯和多烯抗性品系的报道，相对于这种菌株，其严重地抑制了治疗的选择一类新的抗真菌剂，假单胞霉素，对于治疗各种患者的真菌感染显示了较大的希望假单胞霉素是来源于丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)分离菌的天然产品丁香假单胞杆菌是一大族植物细菌，其是若干生物活性物质，如杆菌肽和丁香霉素的来源天然菌株和丁香假单胞杆菌突变株产生的转位子产生具有抗真菌活性的化合物丁香假单胞杆菌174的野生型菌株的调节突变株产生的转位子，称为MSU 16H(ATCC 67028)，产生各种假单胞霉素例如，已经分离和纯化了各假单胞霉素A，B，C和C′，且它们的结构已经通过包括氨基酸序列，NMR，质谱的方法鉴定了，且已经显示出具有广谱的抗真菌活性，包括对人和植物中的重要真菌病原体的活性见，例如，Ballio et al.，“来源于丁香假单胞杆菌的新的生物活性的lipodepsipeptides，”FEBS Lett.355.96-100(1994)和美国专利第5,576,298假单胞霉素，丁香霉素，丁香假单胞菌毒素和syringostatins代表抗真菌化合物的结构上独特的一族至今，对于抗真菌治疗有效的，来源于丁香假单胞杆菌的假单胞霉素和相关的抗真菌剂还没有研制代表性地，假单胞霉素的注射伴随有不可接受的副作用，如注射部位的刺激性因而需要一种假单胞霉素或相关抗真菌剂的组合物，其可用于治疗真菌感染，且在一定的假单胞霉素制剂中没有观察到副作用发明概述本发明涉及一种有效的组合物和方法，在需要时，将假单胞霉素或相关的抗真菌剂给予患者该方法包括通过给予有效量的组合物来治疗真菌感染，其中该组合物包含假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关的抗真菌剂和羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精该方法对于减少真菌感染的症状且，优选地，杀死引起感染的真菌是有效的该方法对于真菌，包括念珠菌，新型隐球菌，烟曲霉，和荚膜组织胞浆菌的感染是有效的在第二个实施方案中，该方法减少注射假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂的副作用，其中是在含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精的组合物中给予假单胞霉素或相关抗真菌剂的在另一个实施方案中，该方法包括给予毒理学相应剂量的假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关的抗真菌剂，其是在含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精和假单胞霉素的组合物中的该方法中的组合物包括假单胞霉素或相关的抗真菌剂，如假单胞霉素B，或相关的抗真菌剂和羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精这种组合物对于真菌感染症状的减轻或治疗，对于减少注射假单胞霉素，如假单胞霉素β，或相关抗真菌剂的副作用，对于给予毒理学相关剂量的假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关的抗真菌剂是有效的该组合物包括摩尔量超出假单胞霉素或相关的抗真菌剂的环糊精，优选至少过量大约两-倍的摩尔数，且适于非肠道给药该组合物可以包括赋形剂如氯化钠，甘露醇，或葡萄糖，其调节组合物的毒性该组合物可用于治疗真菌感染的药物的生产，该组合物包括假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂，或其药学上可接受的盐，水合物或酯，和羟烷基-β-环糊精或磺烷基醚-β-环糊精的组合定义此处使用的，术语“假单胞霉素”指的是具有化学式I的化合物 其中R是亲脂性部分该亲脂性部分包括C9-C15烷基，C9-C15羟烷基，C9-C15二羟烷基，C9-C15链烯基，C9-C15羟链烯基，或C9-C15二羟链烯基假单胞霉素化合物A，A′，B，B′，C，C′是通过上面的化学式I代表的，其中R定义如下假单胞霉素A R＝3，4-二羟基十四烷酰假单胞霉素A′ R＝3，4-二羟基十五酸盐假单胞霉素B R＝3-羟基十四烷酰假单胞霉素B′ R＝3-羟基癸酸盐假单胞霉素C R＝3，4-二羟基十六烷酰假单胞霉素C′ R＝3-羟基十六烷酰此处使用的，术语“脂缩酚十肽”指的是具有化学式II的化合物 其中，R是亲脂性部分该亲脂性部分包括C9-C15烷基，C9-C15羟烷基，C9-C15二羟烷基，C9-C15链烯基，C9-C15羟链烯基，或C9-C15二羟链烯基优选地，该亲脂性部分是C11烷基烷基，羟烷基，二羟烷基，链烯基，羟链烯基或二羟链烯基可以是支链的或无支链的优选地，depsidecapeptide环的氨基酸序列是苏氨酸-丙氨酸-苏氨酸-谷氨酸-高丝氨酸-脱氢氨基丁酸-丙氨酸-脱氢丙氨酸-苏氨酸-精氨酸，此处称作“25-B1十肽”或“Thr-Ala-Thr-Gln-Xaa-Xaa-Ala-Xaa-Thr-Arg(SEQ ID NO1)”此处使用的，术语“25-B1十肽抗真菌剂A”指的是具有优选氨基酸序列SEQ ID NO1且R是无支链的C11烷基(即，R＝-(CH2)10CH3)的特殊depsidecapeptide上述假单胞霉素和相关的假单胞霉素(例如，脂缩酚十肽s)的任一类似物或衍生物也认为包括在本发明的精神之内虽然上面描述了特殊的构象，其它的立体异构体和非对映的立体异构体也包括在本发明的精神之内详细的描述假单胞霉素和相关的抗真菌剂此处使用的，假单胞霉素(PS)指的是抗真菌剂一族中的一种或多种组成部分，其已经从丁香假单胞杆菌中分离出来了假单胞霉素是一种lipodepsipeptide，一种环化肽，其包括一种或多种稀有氨基酸且具有一个或多个附加的疏水的或脂肪酸侧链特别地，假单胞霉素是lipodepsi nanopeptide，具有通过内酯键闭合的环化肽部分，并包括稀有氨基酸4-氯苏氨酸(ClThr)，3-羟基天门冬氨酸(HOAsp)，2，3-脱氢-2-氨基丁酸(Dhb)，和2，4-二氨基丁酸(Dab)相信这些稀有氨基酸包含在假单胞霉素的生物特性之内，如在血清中的稳定性和它们的杀伤作用假单胞霉素包括假单胞霉素A，假单胞霉素A′，假单胞霉素B(PSB)，假单胞霉素B′，假单胞霉素C，和假单胞霉素C′这些假单胞霉素中的每一种均具有相同的环化肽核，但是他们附着在此核上的疏水侧链不同假单胞霉素A，A′，B，B′，C和C′中的每种均已经被分离和纯化了，且它们的结构已经通过包括排序，NMR，和质谱的方法鉴定了见，例如，美国专利第5,576,298，1996年11月19日出版，Strobelet al.，Hartison et al.；“假单胞霉素，具有广谱抗真菌活性的来源于丁香假单胞杆菌的一族新的肽”J.Gen.Microbiology137，2857-2865(1991)；Ballio et al.，“来源于丁香假单胞杆菌的新的生物活性的lipodepsipeptidesthe假单胞霉素”FEBSLett.355，96-100(1994)；和Coiro，V.M.，et al.，“使用距离集合和分子动力学通过计算机模拟自NMR数据确定的丁香假单胞杆菌MSU 16H植物毒性的lipodepsipeptide假单胞霉素A的溶液构成”Eur.J.Biochem.257(2)，449-456(1998)归因于假单胞霉素的抗真菌活性要追溯到具有已知的Tn 903转位子的丁香假单胞杆菌上，其编码卡那霉素的抗性转位子Tn 903的序列和操纵方法是已知的Oka et al J.Mol.Biol.147，217-226(1981)；“卡那霉素抗性转位子Tn 903的核苷酸序列”各种丁香假单胞杆菌菌株的培养方法和它们在抗真菌剂，如假单胞霉素生产中的用途由Matthew D.Hilton在美国专利申请系列第PCT/US00/08728中公开，名称为“自丁香假单胞杆菌的假单胞霉素的生产”，其是在同此相同的日期递交的，且下面描述了来源于保藏的生物材料的假单胞霉素和脂缩酚十肽s的生产(见实施例)假单胞霉素A′和B′由PalaniappanKulanthaivel在美国专利申请系列第PCT/US00/08727中描述，名称为“假单胞霉素天然产物”，其是在同此相同的日期递交的，且可以使用下述一般的过程来生产此段引证的各参考文献是特别引入此处作为参考的假单胞霉素的结构和特性发生变化假单胞霉素显示了对广谱多种真菌的活性，而且还抑制通常可接受的毒性与其它的假单胞霉素相比，假单胞霉素B对于某些真菌具有更大的潜能和更低的毒性水平因此，对于本发明的制剂和方法来说，假单胞霉素B是优选的假单胞霉素的结构是通过上面的化学式I代表的，其中R＝3-羟基十四烷酰假单胞霉素B具有环状的九肽环，该九肽环具有序列Ser-Dab-Asp-Lys-Dab-Thr-Dhb-HOAsp-ClThr，更特别的是，用ClThr的羧基和丝氨酸的羟基闭合的，具有内酯键的环L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)丝氨酸的胺基用3-单羟基十四烷酰基部分的羧基形成酰胺键丝氨酸的羧基用环中的Dab形成酰胺键此处使用的，与假单胞霉素相关的抗真菌剂包括用丁香假单胞杆菌生产的脂缩酚十肽抗真菌剂这类化合物的代表，25-B1十肽抗真菌剂A，已经被纯化了，并确定了它的结构脂缩酚十肽抗真菌剂，如25-B1十肽抗真菌剂A，已经由Palaniappan Kulanthaivel在美国专利申请系列第PCT/US00/08724中描述了，名称为“从丁香假单胞杆菌分离的抗真菌剂”，其是在同一日期递交的，且可以使用下述的一般过程来生产此专利申请是特别引入此处作为参考的假单胞霉素的生产方法为了自丁香假单胞杆菌的突变菌株或野生型菌株生产一种或多种假单胞霉素，在含水的营养培养基中搅拌培养生物体，该营养培养基包括有效量的三种或更少的氨基酸这三种或更少的氨基酸是优选的谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，或其组合在一个优选的实施方案中，氨基酸包括甘氨酸和，任选地，一种或多种马铃薯产品和脂类培养是在对丁香假单胞杆菌的生长和所期望的假单胞霉素或假单胞霉素的生产有效的条件下进行的有效的条件包括大约22℃-27℃的温度，大约36小时-大约96小时的持续时间当在培养基，如此处描述的那些中培养时，丁香假单胞杆菌可以在直到大约10-15g/L干重的细胞密度中生长，并生产总量至少大约10μg/mL，优选至少大约40μg/mL，更优选大约500μg/mL或更多的假单胞霉素调节丁香假单胞杆菌培养过程中培养基中的氧浓度对于假单胞霉素的生产是有利的优选地，氧的水平保持在大约5％-大约50％饱和度，更优选大约30％的饱和度用空气，用纯氧，或用含氧的气体混合物喷射，可以调节培养基中氧的浓度此外，搅拌速率的调节可用于调节氧的传递速率调节丁香假单胞杆菌培养过程中的培养基的PH对于假单胞霉素的生产是有利的假单胞霉素在碱性PH时不稳定，且如果培养基的PH大于6超过大约12小时，则可能发生严重的降解优选地，培养基的PH保持在小于6，更优选小于5.5，最优选大约4.0PH优选保持在大约5-5.4，更优选大约5.0-5.2虽然没有限制于本发明，相信在碱性PH下的假单胞霉素降解归因于内酯环的开环和Cl-的脱去当在分批培养中生长时，丁香假单胞杆菌可以生产一种或多种假单胞霉素然而，可调节PH的葡萄糖和，任选地，酸或碱，如氢氧化铵的半-持续给料或分批给料，能提高假单胞霉素的产量自丁香假单胞杆菌的假单胞霉素的生产可以通过使用连续进料的方法得到进一步的提高，其中调节PH的葡萄糖和，任选地，酸或碱，如氢氧化铵是自动进料的使用丁香假单胞杆菌，可以生产一种或多种基本量的假单胞霉素即，一种或多种假单胞霉素的总量为至少大约200μg/mL-900μg/mL，优选大约600μg/mL-900μg/mL，更优选大约800μg/mL-900μg/mL优选地，对于假单胞霉素A的生产，所生产的假单胞霉素A的总量为至少大约10μg/mL-400μg/mL，更优选大约300μg/mL-400μg/mL，最优选大约350μg/mL-大约400μg/mL优选地，对于假单胞霉素B的生产，所生产的假单胞霉素B的总量为至少大约10μg/mL-300μg/mL，更优选大约200μg/mL-300μg/mL，最优选大约250μg/mL-300μg/mL优选地，对于假单胞霉素C的生产，所生产的假单胞霉素C的总量为至少大约5μg/mL-100μg/mL，更优选大约5μg/mL-50μg/mL，最优选大约10μg/mL-50μg/mL优选地，对于假单胞霉素C’的生产，所生产的假单胞霉素C’的总量为至少大约1μg/mL-50μg/mL，更优选大约10μg/mL-50μg/mL，最优选大约30μg/mL-50μg/mL用于假单胞霉素A’和/或B’生产的有效条件包括大约22℃-27℃的温度和大约36小时-96小时的持续时间当在培养基，如此处描述的那些中培养时，丁香假单胞杆菌可以在直到10-15g/L干燥重量的细胞密度中生长，并产生总量至少约10μg/mL的假单胞霉素丁香假单胞杆菌菌株的选择可以影响假单胞霉素或假单胞霉素的分布和量，其是通过在此处描述的条件下培养所产生的例如，菌株MSU 16H和67H1，和相似的菌株，每种均主要生产假单胞霉素A，但是也生产假单胞霉素B和C，大概的比例为4∶2∶1菌株67 H1和相似菌株，然而，代表性地，生产的假单胞霉素的水平，比用菌株MSU 16H生产的大3-5倍与菌株MSU 16H和67H1相比，菌株25-B1和相似菌株生产更多的假单胞霉素B和更少的假单胞霉素C菌株7H9-1和相似菌株是独特地，主要生产假单胞霉素B，其可以比其它菌株生产出更大量的假单胞霉素B例如，此菌株可以生产超过假单胞霉素A或C至少10倍的假单胞霉素B假单胞霉素A’和/或B’可以自丁香假单胞杆菌的突变株生产突变株是通过用对产生突变株有效的诱变剂量处理细菌而生产的，其过量生产假单胞霉素A’和/或B’，生产超过其它假单胞霉素的假单胞霉素A’或B’，或在有利的生长条件下生产假单胞霉素A’或B’然而所使用的诱变剂的量和类型可以变化，优选的方法是连续稀释NTG至1-100μg/ml的水平突变株过量产生假单胞霉素A’和/或B’，优选地到至少大约10μg/mL可以通过那些本领域技术人员已知的各种方法中的任一种来检测，确定，分离和/或纯化每种假单胞霉素或假单胞霉素的混合物例如，在液体培养基中或在分离或纯化的组合物中的假单胞霉素活性的水平可以用对真菌，如念珠菌属的抗真菌作用来确定假单胞霉素分析和制备的许多方法均是已知的例如，可以通过层析，如HPLC来分离和纯化一种或多种假单胞霉素丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽的生产方法为了自丁香假单胞杆菌的突变菌株或野生型菌株生产一种或多种丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽s，如25-B1十肽抗真菌剂A，在含水的营养培养基中搅拌培养生物体，其中的营养培养基包含有效量的三种或更少的氨基酸这三种或更少的氨基酸是优选的谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，或其组合在一个优选的实施方案中，氨基酸包括甘氨酸和，任选地，一种或多种马铃薯产品和脂类培养是在对丁香假单胞杆菌的生长和所期望的丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A的生产有效的条件下进行的有效的条件包括大约22℃-大约27℃的温度，和大约36小时-大约96小时的持续时间当在培养基，如此处描述的那些中培养时，丁香假单胞杆菌可以在直到大约10-15g/L干燥重量的细胞密度中生长，并产生总量至少为大约10μg/mL，优选至少大约50μg/mL的丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A调节丁香假单胞杆菌培养过程中的培养基中氧的浓度对于丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A的生产是有利的优选地，氧的水平保持在大约5％-50％饱和度，更优选大约30％饱和度用空气，用纯氧，或用含氧的气体混合物喷射，可以调节培养基中氧的浓度此外，搅拌速率的调节可用于调节氧的传递速率调节丁香假单胞杆菌培养过程中的培养基PH对于丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A的生产是有利的培养基的PH可保持在大约小于6且大于4当在分批培养中生长时，丁香假单胞杆菌可以生产丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A然而，可调节PH的葡萄糖和，任选地，酸或碱，如氢氧化铵的半-持续给料或分批给料，能提高丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-Bl十肽抗真菌剂A的生产自丁香假单胞杆菌的syringas假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A的生产可以通过使用持续培养的方法得到进一步的提高，其中调节PH的葡萄糖和，任选地，酸或碱，如氢氧化铵是自动供给的PH优选保持在大约5-5.4，更优选大约5.0-5.2丁香假单胞杆菌菌株的选择可以影响通过在此处描述的条件下培养而产生的丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽，如25-B1十肽抗真菌剂A的分布和量例如，菌株25 B1可主要生产25-B1十肽抗真菌剂A丁香假单胞菌脂缩酚十肽的环十肽环可以通过从亲脂部分切除来制备例如通过脱酰基切除和脱酰基的方法是本领域技术人员已知的环糊精此处使用的，“环糊精”指的是包括环状α(1→4)连接的D-吡喃型葡萄糖单元的化合物代表性地，环糊精是通过淀粉酶对淀粉的作用形成的α-环糊精指的是具有6个环状的，连接的D-吡喃型葡萄糖单元的环糊精，β-环糊精指的7个环状的，连接的D-吡喃型葡萄糖单元的环糊精，γ-环糊精指的8个环状的，连接的D-吡喃型葡萄糖单元的环糊精这些环状的，连接的D-吡喃型葡萄糖单元围成疏水腔，且已知环糊精在固体状态或含水溶液中形成与其它有机分子，与盐，和与卤素的包合物最天然的，未取代的环糊精显示药物组合物中不可接受的毒性，且不能很容易地在患者的血流中一次除去制备环糊精的方法对于本领域的那些技术人员来说是已知的环糊精包括取代的环糊精此处使用的，“取代的环糊精”指的是通过在环糊精的一个或多个位置上添加侧链所形成的环糊精衍生物该侧链可以是有机部分或杂有机部分取代的环糊精包括已经烷化的，羟基烷化的或反应形成磺烷基醚的环糊精取代的环糊精包括羟丙基环糊精，羟乙基环糊精，葡糖基环糊精，麦芽糖基环糊精，和磺丁基醚环糊精制备环糊精衍生物的方法在本领域中是已知的，且一些方法在美国专利第4,727,064(Pitha，1988年2月23日授予)和5,134,127(Stella，1992年7月28日授予)，欧洲专利申请公开号0 499 322A1，和Pitha et al.，Int.J.Pharm.，29，73-82(1986)中描述此段中引证的每篇文献的内容在此引入作为参考环糊精的结构和性能发生改变例如，在取代的和未取代的α-，β-，和γ-环糊精之间，疏水腔的功能性(例如，疏水性，电荷，反应性和氢结合能力)和大小(例如，直径，和深度)变化代表性地，制剂中所选择的环糊精具有与制剂中其它组分相迎合的功能性和大小对于本发明的制剂和方法，相信取代的环糊精，像羟烷基环糊精和磺烷基醚环糊精具有与制剂中其它组分，如假单胞霉素或相关的抗真菌剂，如假单胞霉素B相迎合的功能性和大小优选的环糊精包括羟丙基-β-环糊精(HP-CD)，和磺丁基醚-β-环糊精(SBE-CD)磺丁基醚环糊精是商购的，且可以通过本领域已知的方法来合成此处使用的，磺丁基醚环糊精或SBE-CD指的是β-环糊精的磺丁基醚衍生物，代表性地在β-环糊精环的2，3，和6位上包括平均大约1-8，优选大约6-7个磺丁基醚基团羟丙基环糊精是商购的，且可以通过本领域已知的方法来合成此处使用的，羟丙基环糊精或HP-CD指的是β-环糊精的2-羟丙基衍生物，代表性地在β-环糊精环的2，3，和6位上包括平均大约8个2-羟丙基基团假单胞霉素和相关抗真菌剂的生物活性假单胞霉素具有包括杀死各种真菌，如植物和动物的真菌病原体在内的多种生物活性特别是，假单胞霉素或相关抗真菌剂相对于真菌是活性的抗真菌剂，其中该真菌在免疫损害个体中引起条件性病原微生物感染这些真菌包括新型隐球菌，烟曲霉，荚膜组织胞浆菌，和包括近平滑念珠菌，白色念珠菌，glabrata念珠菌，热带念珠菌，和krusei念珠菌在内的各种念珠菌抑制，甚至杀死真菌，特别是真菌病原体的生长是所期望的和优选的假单胞霉素的生物活性已经显示出假单胞霉素对于宽范围的植物-病原性真菌是有毒的，该真菌包括Rynchosporium secalis，Ceratocystisulmi，Rizoctonia solani，sclerotiorum核盘菌，albo-atrum轮枝孢菌，dahliae轮枝孢菌，Thielaviopis basicola，oxysporum尖镰孢和culmorum尖镰孢(见Harrison et al.，“假单胞霉素，来源于具有广谱抗真菌活性的丁香假单胞杆菌的一族新的肽”，J of GeneralMicrobiology，7，2857-2865(1991))此外，已经显示丁香假单胞杆菌MSU 16H较之野生型菌株给予Ceratocystic ulmi感染的榆树更大的保护，榆树枯萎病的病因剂(见，例如，Lam etal，Proc.Natl. Sci.USA，84，6447-6451(1987))假单胞霉素或相关的抗真菌剂具有一些相反的生物活性，或副作用此处使用的，假单胞霉素或相关抗真菌剂的副作用指的是在假单胞霉素或相关抗真菌剂的注射部位或附近出现的副作用特别重要的是假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂的副作用例如，醋酸盐缓冲液制剂中的假单胞霉素，如假单胞霉素B的静脉内注射导致损伤其中注射进假单胞霉素的血管在血管(即外渗)外，假单胞霉素损伤注射部位附近的组织假单胞霉素，如假单胞霉素B对血管和周围组织的副作用包括血管内皮的损伤，组织损伤，发炎，和对受体组织的局部毒性虽然不限制本发明，相信假单胞霉素的静脉内注射导致血管内皮的损伤和假单胞霉素的外渗，又，导致对血管周围组织的副作用假单胞霉素或相关抗真菌剂的抗真菌作用和配制副作用起因于假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂的许多不同制剂的注射，其中的许多不同制剂包括醋酸盐缓冲液制剂，含盐的制剂，微乳制剂，乳状液制剂，Povidone K12复合制剂，和胶束制剂用这些赋形剂观察的副作用阻止假单胞霉素有效抗真菌量的给予在仅仅一次或几次注射之后，获得充足的抗真菌效果之前，该副作用代表性地要求停止用假单胞霉素或相关抗真菌剂给药甚至是在他们较缓和的形式中，这种注射部位的副作用也可能阻止患者顺应有效给药状况因此，运用假单胞霉素或相关抗真菌剂的有效抗真菌方法需要一种制剂，其允许重复剂量的给药这种制剂允许至少大约0.01mg/kg，优选多于大约0.1mg/kg，优选大约0.1-5mg/kg，更优选大约0.1-0.5mg/kg的假单胞霉素或相关抗真菌剂重复剂量的给药，在注射部位没有不可接受的副作用所观察到的副作用还阻止接近最大耐受剂量的假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂剂量的给药，其中的最大耐受剂量是引起受者靶器官毒性或严重全身毒性的最低剂量这种高剂量的假单胞霉素代表性地是大约0.5mg/kg，优选大约5mg/kg或更多，优选大约5至25-50mg/kg甚至在赋形剂，如醋酸盐缓冲液中的假单胞霉素的单独给药也可能引起副作用，该副作用阻止假单胞霉素或相关抗真菌剂的进一步给药这种副作用可以阻止假单胞霉素或相关抗真菌剂的毒理学相应剂量的给药，其阻止确定抗真菌剂的相应毒理学参数这种高剂量对于菌株或生物体的真菌感染治疗也是必需的，其中该菌株或生物体对假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂是抗性或耐受的配制假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和环糊精，如HP-CD，SBE-CD，或相似的环糊精，允许该制剂有效抗真菌的或毒理学的给药这种制剂减轻或阻止假单胞霉素或相关抗真菌剂注射的副作用假单胞霉素B可溶于含水培养基中至15mg/mL，所以代表性地不需要环糊精增加这种抗真菌剂的溶解性假单胞霉素B和HP-CD或SBE-CD可以毫不困难地溶解在适当浓度的含水赋形剂，如注射用盐水，或已知的甘露糖醇或葡萄糖赋形剂中如果需要，该制剂的毒性可以用，例如，NaCl来调节，以使其在一适宜的生理学范围之内优选地，假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和HP-CD，SBE-CD，或相似环糊精的制剂包括大约0.05mg/mL-大约20mg/mL，优选大约1-15mg/mL的假单胞霉素该制剂包括HP-CD，SBE-CD，或相似的环糊精，其量能够有效减轻假单胞霉素或相关抗真菌剂注射的副作用，并允许这种抗真菌剂的毒理学或抗真菌给药代表性地，HP-CD，SBE-CD，或相似的环糊精以大约0.5重量％(溶液的重量/体积)大约-6重量％，优选大约1重量％-大约5重量％，优选大约2重量％存在于制剂中有利地，HP-CD，SBE-CD，或相似的环糊精以超过假单胞霉素，如pesudomycin B，或相关抗真菌剂的摩尔数存在优选地，至少大约2-倍-大约4-倍摩尔数过量这种有效的毒理学或抗真菌剂制剂的给药每天可以至少发生大约1-5次，优选2-3次注射，大约1-7天，注射部位没有不可接受的副作用虽然没有限制本发明，相信假单胞霉素或相关抗真菌剂在注射上的副作用部分是由于制剂可溶性聚集物的作用例如，假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关的抗真菌剂包括肽环和长脂肪链，且长脂肪链可以诱导含水溶液或血中胶束的形成根据此模型，期望减小假单胞霉素或相关抗真菌剂的可溶性聚集物的大小这可以通过操纵赋形剂的组成，降低聚集假单胞霉素或相关抗真菌剂的推动力来实现两者择一地，赋形剂可以包括一种试剂，其复合假单胞霉素或相关的抗真菌剂，并阻止在损伤血管和周围组织的聚集例如，根据此模型，假单胞霉素或相关抗真菌剂的脂肪链与环糊精或取代环糊精的复合物，可以，提供在注射部位不引起副作用的，假单胞霉素或相关抗真菌剂的形式当以有效的抗真菌量给予假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂与环糊精，如HP-CD或SBE-CD的组合物时，可以减轻真菌感染的负担，减轻与真菌感染有关的症状，并可以引起真菌感染的消除真菌感染可以被消除，因为假单胞霉素可以杀死，而不仅仅降低真菌的生长需要用假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和HP-CD，SBE-CD，或相似环糊精的制剂抗真菌治疗的典型患者具有严重的感染症状，如高烧，且可能是需重症的或危急监护的各种真菌均可以引起这种严重的感染念珠菌，例如，引起粘膜的和严重的全身感染，且存在于对吡咯和多烯抗真菌剂有抗性的菌株中曲霉引起威胁生命的全身性感染隐球菌则对脑膜炎负责这种严重的真菌感染可能出现在免疫损害的患者中，如那些接受器官和骨髓移植的，遭受癌症化疗的，从严重的外科手术恢复的，或遭受HIV感染的抗真菌治疗包括假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和HP-CD，SBE-CD，或相似环糊精的制剂的给药，代表性地非肠道给药，静脉内给药多天，以终止感染对于大多数真菌感染来说，感染症状的减轻包括退烧，恢复意识，和患者本质健康(例如，患者的行动和感觉更好)的增加优选地，症状是通过杀死真菌而除去感染，或使感染至患者可忍受的水平，或可由患者免疫系统控制的水平包含假单胞霉素或相关抗真菌剂和环糊精的制剂的药物组合物一种药物组合物，包括假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和环糊精，如SBE-CD或HP-CD的制剂，还可以包括载体，赋形剂，媒介物和其它的添加剂该制剂可以包括添加剂，如各种油，包括那些石油，动物油，植物油或合成来源的，例如，花生油，大豆油，矿物油，和芝麻油适宜的药物赋形剂包括淀粉，纤维素，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明胶，麦芽，硬脂酸镁，硬脂酸钠，甘油单硬脂酸酯，氯化钠，干燥的脱脂乳，甘油，丙二醇，水和乙醇该组合物可以经受常规的药学方法，如杀菌，且可以包含常规的药物添加剂，如防腐剂，稳定剂，湿润剂或乳化剂，调节渗透压的盐，和缓冲液适当的药物载体和它们的制剂在Martin，“Remington’sPharmaceutical Science，”15th Ed；Mack PublishingCo.，Easton(1975)；见，例如，pp.1405-1412和pp.1461-1487中描述这种组合物，通常，包含有效量的活性化合物和适当量的载体，以便制备适当的给药形式以适当的给予受体代表性地，应当在需要的时候，给予患者(人或其它的动物，包括哺乳动物如，但不限制于，猫，马和牛和鸟类)有效量的该组合物，以抑制真菌复制对于全身给药来说，成人治疗所用的每日剂量为50mg-5000mg，优选50mg-2000mg的活性成分，其可以给予1-5的每日剂量，例如，取决于患者的条件和给药途径当组合物包括剂量单位时，每个单位优选包含2mg-2000mg，例如50mg-500mg的活性成分对于严重的感染，可以通过静脉内输注，例如，0.01-10mg/hr的活性成分给予该化合物假单胞霉素-环糊精制剂的用途本发明还包含含本药物组合物的试剂盒，且其与本发明的方法一起使用该试剂盒可以包含一个管瓶，该管瓶包含本发明的制剂和适当的载体，干燥或液体的形式该试剂盒进一步包括管瓶上标签形式的说明书和/或包括在盒子中的插入物形式的说明书，其中的管瓶是封装的，用于化合物的给药和使用该说明书包括的信息有足够的剂量和给药的信息，以便让本领域的工作人员给药预期本领域的工作人员包括任一医生，护士，或可以给药的技术人员本发明还涉及一种药物组合物，包括假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和环糊精的制剂，其是适于注射给药的根据本发明，假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和环糊精的制剂可用于制造假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和环糊精的组合物，其是适于注射给药的形式例如，可以使用常规技术，以各种方式制造液体或固体的制剂液体制剂可以通过在适当的溶剂，如水，适宜的PH，包括缓冲液或其它赋形剂中溶解假单胞霉素，如假单胞霉素B，或相关抗真菌剂和环糊精来制造包括假单胞霉素或相关抗真菌剂和环糊精的制剂的农业组合物包含假单胞霉素，脂缩酚十肽，或其组合(包括其水合物，溶剂化物和酯)和环糊精(例如，SBE-CD或HP-CD)的组合物可用于植物中真菌的治疗(特别是，albo-atrum轮枝孢菌，Rizoctonia solani和oxysporum尖镰孢)，作为直接的治疗或预防性治疗通常，受感染的植物是通过注射或喷射丁香假单胞杆菌的含水混悬液至植物中或植物上而治疗的注射工具(例如，圆凿枪)对于本领域的那些技术人员来说是已知的可以使用任一喷射混悬液的工具，以分布有效量的活性材料在植物表面上该混悬液还可以包括本领域的那些技术人员通常使用的添加剂，如增溶剂，稳定剂，湿润剂，和其组合参考下列实施例可以更好地理解本发明这些实施例是本发明特殊实施方案的代表，且不限制本发明的范围实施例保藏的生物材料丁香假单胞杆菌MSU 16H可以从美国典型培养物保藏中心，Parklawn Drive，Rockville，MD，USA公开地得到，保藏登记号为第ATCC 67028丁香假单胞杆菌菌株25-Bl，7H9-1和67H1是于2000年3月23日在美国典型培养物保藏中心保藏的，并指定为下列保藏登记号第25-B1 保藏登记号第PTA-16227H9-1 保藏登记号第PTA-162367H1保藏登记号第PTA-1621实施例1—没有环糊精的注射用盐水中的假单胞霉素B制剂静脉内注射的副作用在注射用盐水中配制的假单胞霉素B，没有环糊精，在对静脉内注射副作用的1-周试验性研究中评估材料和方法将CD-1小鼠(雄性)分为四组，给予0，1，5，10，25或50mg/kg/day的PSB-TFA，静脉内注射(缓慢的灌注)进外侧尾部的血管中用于此研究的赋形剂是注射用盐水调节假单胞霉素B(PSB-TFA)三氟醋酸盐的潜能使之以三氟醋酸盐形式存在所采集的数据包存活阶段(即，临床观察，体重，和死亡率)，临床化学，有限的器官重量，和有限的组织病理学(肾，肝，心，和注射部位)结果所有的动物存活至预定终点第7天然而，每只小鼠均在注射部位显示了严重的副作用这作为标记的肿胀和尾部的变黑而开始，代表性地发生在注射之后大约6-8小时之内接受≥10mg/kg剂量的所有动物中的组织反应的严重性导致第2-5剂量之后给药的终止没有观察到重要的临床化学，严重的病理学，或组织病理学结果来指示除了注射部位严重副作用的迹象之外的靶器官的作用实施例2—假单胞霉素B和相关化合物对动物细胞的副作用的评估试验假单胞霉素B和相关化合物对哺乳动物细胞的体外毒性，以评估是否毒性与化合物的结构相关材料和方法在0.5mg/mL的浓度下，试验假单胞霉素B(PSB)和相关化合物假单胞霉素A(PSA)对L6骨骼肌细胞的作用已经证实这种体外肌肉模型与体内非肠道抗菌静脉刺激性相关见Rosalki S.B.，用于血清肌酸磷酸激酶测定的改进过程J.Lab.Clin.Chem.69696-705(1967)；D.M.Hoover et al.，Fundamental and AppliedToxic.14589-597(1990)；Mosmann T.，Rapid Colorimetric Assayfor Cellulsr Growth and Survival，J.Immunol.Method 6555-63(1983)毒性是用标准方通过在细胞中监测肌酸磷酸激酶(CPK)和MTT还原酶的活性水平而确定的结果数据在表1中概括，其鉴定所测试的化合物，并记录肌酸磷酸激酶的残留量(对照的百分数)，和MTT还原酶的活性(对照的百分数)毒性越大，所测量的CPK残留水平和MTT还原酶的活性越低表1-假单胞霉素B和相关化合物的体外毒性 结论此假单胞霉素A和B的体外细胞毒性，暗示这些化合物的制剂对于降低静脉内注射的副作用是必需的实施例3—静脉内假单胞霉素B的各种制剂的静脉内注射的改进和副作用的评估这三种研究检查了各种假单胞霉素B制剂的对在注射部位观察到的副作用的效果，和静脉内注射副作用的改进研究1此研究评估含假单胞霉素B的制剂，该制剂是在醋酸盐缓冲液中，微乳中，和具有SBE-CD材料和方法动物是上述实施例1中的动物所选择的剂量是基于