专利名称：一种用于脏器机能保护液的添加组合物的制作方法众所周知，从人体上摘除下来的脏器在辗转运输、器官移植手术等过程中需要合理的保护，否则，离开了活体，离体脏器的血液循环停止，导致凝血，凝血后，极易坏死或引起功能障碍，尤其是离体心脏，对其保护的效果要求更高。目前，对于离体脏器的保护，临床上广泛使用的是脏器机能保护液(University of Wiscon-sin，俗称UW液，以下均简称为保护液)。该保护液对离体心脏的保护效果不太令人满意，经常因离体心脏内的血液凝固而很快引起心脏机能障碍，造成心脏功能不全、心肌坏死或心肌水肿等。现在，随着器官移植手术量的增多，对脏器保护和机能维持的研究日益引起人们的重视。
本发明所要解决的技术问题是提供一种用于脏器机能保护液的添加组合物，本组合物可显著提高保护液对离体脏器的保护效果。为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于脏器机能保护液的添加组合物，它包括50重量份的抗凝血药和有机酸，抗凝血药和有机酸的重量比为(15—35) :(35—15)。为简洁而清楚地说明问题起见，以下对本发明所述一种用于脏器机能保护液的添加组合物均简称为本组合物。将本组合物先加入到保护液中，再用该保护液对离体脏器进行保护时，能够发挥抗凝血作用，有效阻止离体脏器内的血液凝固，保护离体脏器的各项机能，因而，本组合物可显著提高保护液对离体脏器的保护效果。作为本发明的优化，所述抗凝血药为天然水蛭素或重组水蛭素，所述有机酸为柠檬酸。水蛭素(hirudin)因最早从水蛭中分离得到而得名。天然水蛭素是65或66个氨基酸残基组成的单链多肽，分子量约7000道尔顿。能在极端的pH和热条件下稳定存在。水蛭素的形状类似蝌蚪。蝌蚪头部是多肽的N端且富含半胱氨酸(cys)，半胱氨酸间相互作用形成3个二硫键，使N末端结构紧密；蝌蚪尾部是含有多个酸性氨基酸和一个被磺酸化的酪氨酸(Tyr63 )的多肽C末端。水蛭素能同凝血酶的催化中心及纤维蛋白原结合中心发生不可逆的结合，使凝血酶失活，因此，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，可阻止凝血酶催化的凝血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象出现。此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞的增殖及凝血酶对内皮细胞的刺激。它用量少，不会引起出血，也不依赖于内源性辅助因子。鉴于天然水蛭素来源有限，现大多采用基因工程技术生产的重组水蛭素。重组水蛭素用于抗血栓治疗，出血副作用较小，且无过敏反应和抗原性，几乎无毒。柠檬酸是一种重要的有机酸，又名枸橼酸，为无色晶体，常溶于水。在凝血酶原激活物的形成及以后的凝血过程中，必须有钙离于参加。枸橼酸根离子与钙离子能形成一种难于解离的可溶性络合物，因而降低了血液中的钙离子浓度，使血液凝固受阻。使用时，将本组合物用蒸馏水溶解后，加入到保护液中，获得添加有本组合物的保护液，得混合保护液。混合保护液中天然水蛭素或重组水蛭素的重量百分比浓度维持在 0. 5-35% 即可。图1 :25°C时现有保护液所保存的猪心肌组织中的ATP下降百分率与时间相对应的示意图2 :25°C时混合保护液所保存的猪心肌组织中的ATP下降百分率与时间相对应的示意图。
将重组水蛭素35mg和柠檬酸15mg经冷冻、减压干燥、混合后，封装在透明的玻璃瓶中， 制得本组合物，按照注射剂药品保存。冷冻条件-60 _651;减压干燥条件5.5 6. 7mbar。使用时，将50mg本组合物加2ml注射用蒸馏水溶解后，加入到现配的2000ml的保
护液中，得混合保护液。下面通过两种分析检测方法，来说明本组合物的有益效果。1、用高效液相色谱对所保存的猪心肌组织中的三磷酸腺苷(ATP)含量进行检测。分别取保护液所保存的猪心肌组织和混合保护液所保存的猪心肌组织各150毫克，于1.5毫升Perchloric酸W°C，0.6当量浓度]中勻浆。勻浆液于4°C静置1小时，然后用1. 0毫升、1摩尔浓度(mol/Ι)的K2HPO4溶液中和，得反应液。反应液离心15分钟，离心速度10000转/分钟，将上清液经过0. 2毫米的滤膜过滤，取50微升滤过液用HPLC测定。 HPLC的测定条件为检测波长2M纳米，分析柱18碳(C-18)反相，流动相为160毫摩尔的 K2HPO4与100毫摩尔的KCl组成的缓冲液(pH6. 5)。检测结果分别见图1和图2。从图1可知，25°C温度下，现有保护液所保存的猪心肌组织中的ATP随时间延长下降的百分率急剧减少，保存3. 5小时(210分钟)时，ATP的下降百分率仅约为正常组织的 50%。从图2可知，25°C温度下，混合保护液所保存的猪心肌组织中的ATP随时间延长下降的百分率逐渐趋缓，说明混合保护液对心肌组织无不良影响，能减缓ATP随时间延长所下降的百分率。2、猪心肌组织干、湿重量对比性实验
取正常猪心肌组织、经保护液和混合保护液所分别保存的猪心肌组织各5X 10mm，用电子天平分别进行称重，计算其干(正常猪心肌组织经低温减压干燥后)、湿(经两种保护液所分别保存的猪心肌组织)重量，做对比性实验。比较结果见表1。
表

本发明涉及一种用于脏器机能保护液的添加组合物。它包括50重量份的抗凝血药和有机酸，抗凝血药和有机酸的重量比为(15—35)∶(35—15)。作为本发明的优化，所述抗凝血药为天然水蛭素或重组水蛭素，所述有机酸为柠檬酸。将本组合物先加入到保护液中，再用该保护液对离体脏器进行保护时，能够发挥抗凝血作用，有效阻止离体脏器内的血液凝固，保护离体脏器的各项机能，因而，本组合物可显著提高保护液对离体脏器的保护效果。