专利名称：一种高纯度em原种的制备方法EM是英文(Effective Microorganisms)的缩写语，中文译为:“有效微生物群”。它是光合细菌、乳酸菌群、酵母菌群、放线菌群、丝状菌群等5科10属80余种微生物组成的，是由世界著名应用微生物学家日本琉球大学比嘉照夫教授等研究成功的。EM技术是目前世界上应用范围最大的一项生物工程技术，和一般生物制剂相比，它具有结构复杂、性能稳定、功能齐全的优势，表现出前所未有的高科技水平。据有关资料报道，EM适用于种植业、养殖业、环保、人体保健等多种领域。由于EM功能广泛，在种植、养殖、环境净化等方面都有着显著的作用。它在市场上也就有很强的优势，现在市场上各种EM的技术产品也应运而生；这些EM产品中，生产技术工艺呈多样化，有些生产工艺过于简单、粗放，容易污染杂菌，继而影响产品的质量及使用效果。申请号为201010618454.7的“EM菌简易培养方法”，该发明包括如下步骤A、配制培养液、装入配透气盖的塑料方桶中；B、接种芽孢杆菌；C、密闭培养24小时；D、接种复合乳酸菌、酵母菌、光合菌；E、密闭培养。申请号为2002.11.05的“一种适用于EM活菌生产的培养液的制备方法”,该发明以马铃薯为主要原料，制成马铃薯蔗糖、或葡萄糖培养液，在此培养液中按一定比例加入蜂蜜、食用小苏打(NaHC02)混合搅匀，之后按1:1的体积比加入EM活菌混合搅匀置于密封容器中在室温、大于或小于室温下发酵。申请号为200610019753.2的“一种微生物组合物EM活菌剂的生产方法”，该发明是用洗米水经调节PH值和中性蛋白酶处理后，按比例加入适量废糖蜜或赤沙糖或淀粉糖化浆液、磷酸盐、食盐、硫酸盐、酵母膏，混合搅匀，加热100°C、5分钟，冷却后，按10 20%的比例接种活菌液,发酵培养而得。以上3项发明专利所述的生产工艺中，培养基都没有经过系统的消毒，接种也都是开放式的，杂菌感染的几率很大，培养出来的EM菌种纯度不高、质量不稳定，不宜多代繁殖。申请号为200910115498.5的“EM原露及其生产方法”，该发明是通过优化培养基，将好氧菌和兼性厌氧菌分别接入培养基进行好氧发酵和兼性厌氧发酵后，再混合均匀后接入培养基进行厌氧发酵，使EM菌种均衡生产繁殖。根据该发明所述的生产工艺，培养出来的菌种质量好、纯度高。但该发明在实施的过程中需要特定的发酵罐，应用的原料种类繁多；培养过程亦分多级，使工艺步骤多且繁杂。
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供全新的一种高纯度EM原种的制备方法，具体包括:液体培养基的优化制备、选择应用培养容器、液体培养基高温高压灭菌、菌种的选择、无菌环境下接种、EM原种的培养方法及过程、EM原种的贮存办法。本发明的特点是液体培养基是经过优化制备，液体培养基及EM原种的贮存瓶都是经过高温高压消毒，选择高纯度、活力强的EM原种做种源；接种时及原种分装过程都是在无菌环境下进行，有效的避免了杂菌感染；从而保证培育出优质、高纯度的EM原种。有了优质、高纯度的EM原种，在繁殖扩大生产时即可生产出质量稳定、活力强的生产用EM菌种，同时也保障生产用EM菌种的使用效果。本发明是通过以下技术方案来实现的:1、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中包括:液体培养基的优化制备、选择应用培养容器、液体培养基高温高压灭菌、菌种的选择、无菌环境下接种、EM原种的培养方法及过程、EM原种的贮存办法。2、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中液体培养基的各种原料配比如下:⑴红砂糖:200克。(2)糯米粉:100 克。(3)酵母浸膏:50克。(4)蛋白胨:20 克。(5)磷酸二氢钾:15克。 (6)硫酸镁:7克。 (7)微生素C (D-异抗坏血酸):5克。(8)水:5 公斤。3、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中液体培养基的配制方法如下:(I)稀释糯米粉:用0.5公斤冷水将糯米粉进行稀释。(2)稀释酵母粉:用0.25公斤50 60°C热水将酵母粉进行稀释。(3)稀释蛋白胨:用0.25公斤50 60°C的热水将蛋白胨进行稀释。(4)组料:把余下的4公斤水加热至水温达到50 60°C后依次加入红砂糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉稀释液、蛋白胨稀释液；再将溶液加热至沸腾后加入糯米粉稀释液，接着继续将溶液加热至沸腾并持续2 3分钟即得液体培养基。(5)装瓶:将液体培养基装入培养容器，并封好口。4、一种高纯度原种的制备方法，技术方案中培养容器选用耐高温高压的白色塑料桶、玻璃瓶等非金属容器。5、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中液体培养基的消毒方法及过程如下:(I)消毒方法:采用高温高压消毒。(2)消毒过程:把装有液体培养基的培养容器放到高压锅里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121°C的条件下进行灭菌30分钟。6、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中菌种的选择及用量如下:(I)菌种选择:选择有效活菌数为彡5 X 100/ml的高纯度EM原种。(2)菌种用量:500ml。7、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中接种的方法及过程如下:(I)接种环境消毒:把经过高温高压消毒的液体培养基及500ml EM原种移至接种室(箱)内，并对接种室(箱)进行消毒。(2)接种:在无菌环境下的接种室(箱)内将500ml EM原种接入液体培养基里。8、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中EM原种培养的方法及过程如下:(I)培养方法:进行厌氧发酵培养。(2)培养温度:培育环境的温度要控制在20°C以上、38°C以下，温度低于20°C会延长培育时间，温度高于38°C会加速微生物的老化甚至死亡。(3)培养光照:培养容器放置在光照强度较强的环境，光照强度一天有8个小时以上的2000 3000勒克斯(LX)，却又不可完全暴露在太阳光下培育。(4)培养时间:在25 30°C的温度环境下培养3 4天，即繁殖成成品。9、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中EM原种的贮存办法如下:(I)瓶子处理:用于装EM原种的贮存瓶要在高压锅里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121°C的条件下进行灭菌10分钟的消毒处理。(2)装瓶贮存:在无菌环境下将培养好的菌种按量分装到已经消过毒的贮存瓶，并放置于阴凉处贮存。与现有的技术相比，本发明既有如下优点:1、本发明所提出 的制备工艺简单、易实施。2、本发明中所述的液体培养基是经过优化制备的，液体培养基营养配比合理。3、本发明在实施过程中液体培养基及EM原种的贮存瓶都是经过高温高压消毒，接种时及原种分装过程都是在无菌环境下进行，有效的避免了杂菌感染；从而保证培育出优质、高纯度的EM原种。 4、经过本发明培育出来的原种都保持优质、高纯度，这样的EM原种在以后的繁殖扩大生产时即可生产出质量稳定、活力强的生产用EM菌种，同时也保障生产用EM菌种的使用效果。5、通过本发明生产出来的EM原种可广泛应用于种植业、养殖业、食品加工、环保等领域。
(6)硫酸镁:7克。(7)微生素C (D-异抗坏血酸):5克。(8)水:5 公斤。3、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中液体培养基的配制方法如下:(I)稀释糯米粉:用0.5公斤冷水将糯米粉进行稀释。(2)稀释酵母粉:用0.25公斤50 60°C热水将酵母粉进行稀释。(3)稀释蛋白胨:用0.25公斤50 60°C的热水将蛋白胨进行稀释。(4)组料:把余下的4公斤水加热至水温达到50 60°C后依次加入红砂糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉稀释液、蛋白胨稀释液；再将溶液加热至沸腾后加入糯米粉稀释液，接着继续将溶液加热至沸腾并持续2 3分钟即得液体培养基。(5)装瓶:将液体培养基装入培养容器，并封好口。4、一种高纯度原种的制备方法，技术方案中培养容器选用耐高温高压的白色塑料桶、玻璃瓶等非 金属容器。5、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中液体培养基的消毒方法及过程如下:(I)消毒方法:采用高温高压消毒。(2)消毒过程:把装有液体培养基的培养容器放到高压锅里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121°C的条件下进行灭菌30分钟。6、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中菌种的选择及用量如下:(I)菌种选择:选择有效活菌数为彡5 X 100/ml的高纯度EM原种。(2)菌种用量:500ml。7、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中接种的方法及过程如下:(I)接种环境消毒:把经过高温高压消毒的液体培养基及500ml EM原种移至接种室(箱)内，并对接种室(箱)进行消毒。(2)接种:在无菌环境下的接种室(箱)内将500ml EM原种接入液体培养基里。8、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中EM原种培养的方法及过程如下:(I)培养方法:进行厌氧发酵培养。(2)培养温度:培育环境的温度要控制在20°C以上、38°C以下，温度低于20°C会延长培育时间，温度高于38°C会加速微生物的老化甚至死亡。(3)培养光照:培养容器放置在光照强度较强的环境，光照强度一天有8个小时以上的2000 3000勒克斯(LX)，却又不可完全暴露在太阳光下培育。(4)培养时间:在25 30°C的温度环境下培养3 4天，即繁殖成成品。9、一种高纯度EM原种的制备方法，技术方案中EM原种的贮存办法如下:(I)瓶子处理:用于装EM原种的贮存瓶要在高压锅里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121°C的条件下进行灭菌10分钟的消毒处理。(2)装瓶贮存:在无菌环境下将培养好的菌种按量分装到已经消过毒的贮存瓶，并放置于阴凉处贮存。


本发明涉及一种微生物制剂领域，具体涉及到一种高纯度EM原种的制备方法。具体包括液体培养基的优化制备、选择应用培养容器、液体培养基高温高压灭菌、菌种的选择、无菌环境下接种、EM原种的培养方法及过程、EM原种的贮存办法。本发明的特点是液体培养基是经过优化制备，液体培养基及EM原种的贮存瓶都是经过高温高压消毒，选择高纯度、活力强的EM原种做种源；接种时及原种分装过程都是在无菌环境下进行，有效的避免了杂菌感染；从而保证培育出优质、高纯度的EM原种。有了优质、高纯度的EM原种，在繁殖扩大生产时即可生产出质量稳定、活力强的生产用EM菌种，同时也保障生产用EM菌种的使用效果。