一种药物组合物用于制备降脂保肝药物的新用途[0002]闻脂血症是指血脂水平过闻，是心脑血管疾病的基本原因，也是闻血压、诞心病、动脉粥样硬化等疾病的诱因之一，严重威胁人类健康。研究表明，高脂血症主要与胆固醇、动物脂肪摄入过多和脂代谢紊乱有关。目前，临床上高脂血症的治疗药物主要包括他汀类、贝特类、烟酸类和胆酸螯合剂。特别是他汀类和贝特类药物，目前分别是降低血清总胆固醇和血清甘油三酯的首选药物。但长期或大剂量服用此类药物往往产生明显的毒副作用，而且价格昂贵，对于长期服用的患者而言是一种沉重的经济负担。[0003]目前，肝病在人类疾病谱中的重要性日益凸显，脂肪性肝病(简称脂肪肝)已成为临床常见的慢性病之一。研究表明，脂肪肝可以导致胰岛素抵抗，并进一步发展为肝纤维化、肝硬化、甚至肝功能衰竭，严重威胁着人类的健康，已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。目前，脂肪肝的治疗药物有多烯磷脂先酰胆碱、熊去氧胆酸、肌苷、还原型谷光甘肽、水飞素等，但大多数的化学合成药短期治疗效果不理想，长期服用又存在潜在的肝毒性的问题，所以对脂肪肝缺乏理想的治疗药物。 [0004]高脂血症和脂肪肝通常互为因果，伴随发病。近年来，我国脂肪肝和高脂血症的发病率有逐年上升的趋势，而且发病年龄有下降的趋势。因此，研究新型的降脂保肝的药物具有非常重要的意义。
[0005]本发明的目的是提供一种现有治疗糖尿病肾病的药物组合物用于制备降脂保肝药物的新用途，所述药物组合物的原料药组成为:黄芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黄20-100重量份，卫矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳壳30-180重量份。[0006]优选地，本发明所述药物组合物的原料药组成为:黄芪250-350重量份，生地80-160重量份，三七10-50重量份，制大黄30-90重量份，卫矛100-200重量份，山萸肉60-120重量份，枳壳50-150重量份。[0007]更优选地，本发明所述药物组合物的原料药组成为:黄芪300重量份，生地120重量份，三七30重量份,制大黄60重量份,卫矛150重量份，山萸肉90重量份,积壳100重量份；或者[0008]黄芪260重量份，生地150重量份，三七20重量份，制大黄80重量份，卫矛120重量份，山萸肉110重量份,积壳60重量份；或者
[0009]黄苗340重量份，生地90重量份,三七50重量份,制大黄40重量份,卫矛180重量份，山萸肉70重量份，积壳140重量份。
[0010]本发明所述药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。
[0011]本发明所述药物组合物由以下方法制成:按照选定的重量份数取黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉和枳壳加水煎煮或者加乙醇提取，合并提取液，减压浓缩得稠膏；并按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂；或者
[0012]按照选定的重量份数取黄芪、生地、制大黄、卫矛、山萸肉和枳壳加水煎煮或者加乙醇提取，合并提取液，减压浓缩得稠膏；并取选定重量份数的三七，打粉后与稠膏混匀，并按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。
[0013]本发明所述药物组合物由以下方法制成:按照选定的重量份数取黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉和枳壳七味中药，加水煎煮1-4次，每次加8-12重量倍量，煎煮
0.5-2.0小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏；按照常规工艺，加入常规辅料制成临床可接受的剂型；或者
[0014]按照选定的重量份数取黄芪、生地、制大黄、卫矛、山萸肉和枳壳，加水煎煮1-4次，每次加8-12重量倍量，煎煮0.5-2.0小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏；并取选定重量份数的三七，打粉后与稠膏混匀，按照常规工艺，加入常规辅料制成临床可接受的剂型。
[0015]本发明所述药物组合物由以下方法制成:按照选定的重量份数取黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉和枳壳，加水提取1-4次，每次加水8-30重量倍，提取0.5-3小时；所述水提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用4-6倍量水或20%以下浓度的乙醇洗脱，洗脱液弃取，再用10-90%乙醇1-10倍洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液；按照常规工艺，加入常规辅料制成临床可接受的剂型。
[0016]本发明所述药物组合物由以下方法制成:按照选定的重量份数取黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉和枳壳，加5-100%的乙醇提取1-4次，每次加4-15重量倍，提取
0.5-2小时；所述醇提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用4-6倍量水或20%以下浓度的乙醇洗脱，洗脱液弃取，再用10-90%乙醇1-10倍洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液；按照常规工艺，加入常规辅料制成临床可接受的剂型。
[0017]本发明所述降脂保肝是指由糖尿病引起的脂代谢紊乱及肝功能异常症状。
[0018]本发明所述糖尿病为I型或II型糖尿病。
[0019]所述药学上可接受的辅料为:填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括:糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括:甜味剂及各种香精；防腐剂包括:尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括:PEG6000、PEG4000、虫蜡等。
[0020]本发明所述药物组合物具有较好的降脂保肝的功效，可有效治疗血脂异常和肝损伤引起的疾病，尤其对糖尿病引起的血脂紊乱和肝损伤有较好的疗效。
[0021 ] 下述实验例和实施例用于进一步说明本发明但不限于本发明。
[0022]实验例1:本发明药物组合物治疗2型糖尿病血脂异常和肝损伤的疗效研究
[0023]一、材料及方法
[0024]1.实验材料
[0025]1.1 动物
[0026]自发性2型糖尿病模型db/db小鼠,雄性，10周龄,体35g±5g,同周龄和性别的不发病db/m小鼠，体重20g±2g，动物许可证号:SCXK (京)2012-0001，饲养于中日友好医院SPF级实验动物室，许可证号:SYXK(京)2010-0011。实验期间，小鼠给予普通饲料(中国医学科学院实验动物研究所提供)，自由饮水、进食。
[0027]1.2药物与试剂
[0028]供试品药物组合物按照以下方法制备本发明药物组合物提取物，即为:黄芪300g，生地120g,三七30g,制大黄60g,卫矛150g,山萸肉90g,枳壳10g加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮I小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏。干燥，粉碎，得干粉；以蒸馏水按
1.60g/kg的给药剂量配制成溶液，4°C保存，有效期3天，灌胃给药前取出放置至室温。 [0029]1.3主要试剂
[0030]血糖试纸:强生公司
[0031]水合氯醛:北京化学试剂公司
[0032]甲醛溶液:国药集团化学试剂有限公司，分析纯
[0033]2.实验方法
[0034]2.1分组与给药
[0035]实验动物购入顺应性喂养3天，进行体重、空腹血糖的基础状态测定，db/db小鼠随机分为5组，db/m作为正常对照组，实验具体分组及给药方案如表1所示，所有动物从分组后第I天开始灌胃给药，每日I次，连续给药12周。实验期间大鼠自由饮食饮水。
[0036]表1实验例I的动物分组及给药情况
[0037]
_m\_只数(η)干预措施_刑量
正常对照组(db/m)9蒸饱水20ml/kg/day
模型组(db/db)9蒸馏水20ml/kg/day
本发明药物组合物组 9 本发明药物组 2.4g,/kg/day(db/db+本发明药物组合物) 合物 (相当于生药12.75_g/kg/day)_
[0038]2.标本采集与指标检测
[0039]2.1标本采集[0040]各实验组小鼠在实验第0，4，8，12周时，禁食12小时，尾尖采血测空腹血糖。实验取材前动物禁食12h，眼内眦静脉丛取血，3000转/分离心分离血清。将肝脏称重记录重量，部分固定于10%中性甲醛溶液中进行组织病理学检查，其余部分置液氮中保存。
[0041]2.2体重及一般状态
[0042]实验期间动物每周称重I次，密切观察动物精神状态、活动、毛发变化及饮食饮水情况。
[0043]2.3血生化指标
[0044]用血糖仪(强生倍易型，美国)测定各时间点小鼠空腹血糖值。取实验结束时分离的血清样本，用全自动血生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。
[0045]2.4肝功能
[0046]2.5肝组织病理改变:
[0047]肾组织固定于10%中性甲醛溶液24h以上，脱水，包埋，切片，进行PAS染色，光镜下观察肝组织病理改变。肝细胞脂肪变程度判断标准参照1999年Brunt等提出的分级方法，根据肝细胞脂肪含量将 脂肪变性评分为0-3分(无，O分；〈33%，I分；33% — 66%，2分；>66%, 3 分)。
[0048]3.统计学处理
[0049]所有计量资料以均数土标准差(X士S)表示，应用统计软件SPSS13.0进行One-Way ANOVA单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，P < 0.05表示组间差异有统计学意义。
[0050]二、实验结果
[0051]1.一般状态
[0052]实验过程中，db/m组小鼠健康状态良好，进食、饮水均正常，毛色光泽；模型组db/db小鼠饮食饮水量明显增多，活动减少，精神稍萎靡，被毛蓬松无光泽。
[0053]2.体重变化
[0054]自实验O周至实验12周，db/db小鼠体重显著高于db/m对照组，p〈0.001 ;自实验第7周至12周，本发明药物组合物能够显著减轻模型小鼠体重。结果见图1。
[0055]3.小鼠血糖变化
[0056]模型组db/db小鼠空腹血糖水平在整个实验期间与正常对照组db/m小鼠相比，均显著升高，P〈0.05。本发明药物组合物治疗组对空腹血糖水平无改善作用。结果见图2。
[0057]4.小鼠血脂水平的变化
[0058]与db/m小鼠比，db/db小鼠血清TC和LDL-C均显著升高，本发明药物组合物治疗后小鼠血清TC合LDL-C显著降低，有统计学意义，说明本发明药物组合物具有降血脂作用。结果见图3。
[0059]5.小鼠肝功能的变化
[0060]与db/m小鼠比，db/db小鼠血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高，均为p〈0.01。本发明药物组合物治疗后ALT和AST均显著下降，说明本发明药物组合物具有保护肝功能的作用。结果见图4。
[0061]6.小鼠肝脏病理的变化[0062]实验12周小鼠肝脏病理图片(HE染色和油红O染色)见图5和6。HE染色结果表明，光镜下，db/m对照组肝小叶结构清晰完整，肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状排列，肝细胞分界清楚，细胞中央有大而圆的核，细胞质均匀，未见明显炎性细胞浸润、脂肪变肝细胞及纤维组织异常增生。db/db模型组肝细胞索排列紊乱，肝细胞肿胀，体积较正常增大，严重者胞质疏松，且汇管区及中央静脉周围脂肪变性明显。本发明药物组合物治疗组肝小叶结构完整，肝细胞排列尚整齐，肝细胞无明显脂肪变性。脂肪病变程度评分见图5。
[0063]油红O染色结果表明，db/m对照组肝组织无油红O着色，说明肝脏没有脂质沉积；与之相比，db/db小鼠肝组织大量油红沉积，而本发明药物组合物治疗后脂滴变小，数量变少，说明本发明药物组合物能够显著减少肝脏脂质沉积。结果见图6。
[0064]实验例2:本发明药物组合物治疗2型糖尿病脂代谢紊乱和肝损伤的疗效研究
[0065]一、材料及方法
[0066]1.实验动物
[0067]SPF级雄性Wistar大鼠，6周龄，体重160_180g，北京华阜康实验动物技术有限公司提供，合格证号:SCXK(京)2010-0001饲养于中日友好医院动物室屏障系统,许可证号:SYXK(京)2010-0011。实验期间，大鼠给予普通饲料(中国医学科学院实验动物研究所提供)，自由饮水、进食。
[0068]2.实验药物
[0069]供试品药物组合物按照以下方法制备本发明提取物，即为:黄芪300g，生地120g，三七30g，制大黄60g，卫矛150g，山萸肉90g，枳壳10g加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮I小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏，干燥，粉碎，得干粉；以蒸馏水按1.33g/kg和2.67g/kg的给药剂量配制成两种不同浓度的溶液，4°C保存，有效期3天，灌胃给药前取出放置至室温。
[0070]3.主要试剂
[0071]链脲佐菌素:美国Sigma公司，其他试剂与仪器同实验例I。
[0072]4.实验动物模型的建立
[0073]动物购入后适应性喂养3天，进行基础状态测定，剔除血糖与尿蛋白异常的动物3只，其余动物先按体重随机分为正常组(η = 10)和模型组(η = 22)。正常组大鼠给予普通饲料，模型组大鼠给予高脂饲料，5周后，正常组和模型组大鼠每组取4周进行胰岛素钳夹实验确认胰岛素抵抗的发生，模型组大鼠以25mg/kg体重的剂量给予I %的链脲佐菌素(STZ)(以ρΗ4.2-4.5的0.1M柠檬酸缓冲液配制)腹腔注射，72h后测定血糖，大于16.7mM视为造模成功。
[0074]5.分组与给药
[0075]造模成功动物20只，按体重和血糖随机分为模型组，发明提取物治疗组各10只，具体分组与给药方案如表2。
[0076]表2实验例2的动物分组及给药情况
[0077]