专利名称：一种适用于幼龄兔卵母细胞体外成熟培养的方法及培养液配方的制作方法JIVET 技术(juvenile in vitro embryo transfer)是集幼畜的超数排卵与米卵、卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养和胚胎移植等技术为一体的生物高技术体系，最早由澳大利亚南澳政府生埴与发育研究中心(South Australia ReproductionInstitute, SARD)研究开发。以幼畜为供体，对幼畜进行超数排卵，不仅可以为胚胎体外生产提供大量的卵母细胞资源，满足人们科研和生产的需求，而且还可以大大缩短世代间隔，加快育种进程，并且为受精生物学、发育生物学研究提供理想的技术平台。而对幼畜超排后获得的卵母细胞进行有效的培养，是JIVET技术的基础和关键。但目前对幼畜卵母细胞体外成熟的研究报道还较为少见。卵母细胞体外成熟培养技术是应用促性腺激素和类固醇激素在体外模拟卵泡环境，进而诱发卵母细胞成熟的ー项生物技术。自20世纪60年代以来，卵母细胞体外培养的研究得到迅速发展，众多科学家对哺乳动物卵母细胞的成熟培养进行了探索，并取得了很好的研究結果。目前，卵母细胞的体外成熟技术已被广泛应用于科学研究、畜牧生产和医学生殖工程中，牛、羊等未成熟卵母细胞经体外培养，排出第I极体率可达90%以上。已有的研究结果表明，动物的种类和年龄，卵母细胞类型，获取卵母细胞卵泡的大小，成熟培养液及添加成分(如激素、血清、卵泡液、抗氧化物质)等，均可影响卵母细胞的成熟效率。成熟基础培养液的构成直接影响到卵母细胞的成熟率及以后的受精和胚胎发育。目前，卵母细胞成熟基础培养液有TCM-199 (TCM199)、HTF、HAMF等，但大部分采用稳定性较好的TCM-199作为基础培养液。TCM199培养液(标准型)成分如表1，含Earle’ s混合盐，100mg/L谷氨酰胺，2200mg/L碳酸氢钠。pH值7. 2-7. 4。表I. TCM-199培养液(标准型)成分本发明属于生物学领域，具体涉及一种适用于幼龄兔卵母细胞体外成熟培养的方法及培养液配方。该方法采用TCM-199基础培养体系在体外培养卵丘卵母细胞复合体，以TCM-199培养液为基础，在其中添加10%FBS、0.11g/L丙酮酸钠、10μg/mlLH、10μg/mlFSH、1μg/mlE2、100IU/ml青霉素、100IU/ml硫酸链霉素、15－20μM的表没食子儿茶素没食子酸酯。本发明在TCM-199基础培养体系中通过添加EGCG研究其对幼龄新西兰兔卵母细胞体外成熟的影响，建立了一种简单、适用的幼兔卵母细胞体外成熟的方法。