专利名称：一种花生生物活性肽的制备方法花生是我国重要的油料作物，我国生产的花生除少部分作为干果食用之外，大部分是作为油料资源用于榨取食用油脂。榨油后所得占花生总重量56% 61%的花生饼粕中蛋白质含量为左右，其氨基酸组成较完全，含有大量人体必需氨基酸，营养价值可与 FAO推荐的模式蛋白质相媲美。且资源丰富，价格低廉，是酶解制备生物活性肽的良好植物蛋白资源。花生饼粕多被用作饲料或肥料，尚未充分深加工利用，因而造成花生蛋白资源的极大浪费。如果对花生蛋白进行有限的酶解，可生产出高营养、高附加值且易于吸收的具有生物活性功能的生物制品。肽是由氨基酸通过肽键连接而成的化合物，它是机体组织细胞的基本组成成分。 科学家已在人体中发现了 100多种生物活性肽，这些肽具有传递生理信息，调节生理功能的作用，对于人体的神经、消化、生殖、生长、运动、代谢、循环等系统的正常生理活动的维持非常重要，所有疾病的发生、发展、治疗、康复都与多肽有关系。花生肽是指花生蛋白经蛋白酶作用后，再经分离、精制等过程得到的蛋白质水解产物。花生肽具有较好的功能特性，如花生肽溶液在高浓度下黏度依然较低，能在较宽的 PH值范围内保持溶解状态；具有较高的吸湿性和保湿性；渗透压比氨基酸低得多；能抑制蛋白质形成凝胶，减少了由于花生蛋白大分子引起的过敏原性，增加了产品的稳定性等。此外，花生肽还具有抗氧化、抗疲劳、降血压、提高机体免疫力等多种生理活性，可广泛用于医药、保健食品、食品添加剂、调味品等多个领域，具有良好的应用前景。花生饼中除了含有50 55%左右的花生蛋白外，还含有糖分、粗纤维、粗脂肪、水分、矿物质等其它成分。由于含有这些杂质成分，目前制备花生肽的工艺中，很少将花生饼直接作为原料来使用，不仅浪费了生产原料，还增加了生产成本。另外，在纯化花生蛋白及制备花生肽的过程中，均有加酸碱调节PH的工序，因此，不可避免的代入大量盐分，影响了最终产品的品质。第三，现有技术由于水解条件不同，花生肽的分子量也不同，而不同分子量的花生肽具有不同的生理功能，怎样得到特定分子量的产品，并且提高该分子量产品的纯度，从而使产品具有特定的生理功能，也是目前需解决的问题。
本发明的目的是提供一种花生生物活性肽的制备方法。本发明的花生生物活性肽的制备方法如下(A)将花生饼粉碎，过60 80目筛，用95%正己烷溶剂在50°C条件下浸泡浊，浸提后晾晒至正己烷试剂完全挥发，为脱脂花生饼粉末，待用；(B)将步骤(A)中正己烷浸提之后的花生饼粉按1 5 1 10溶解至水中，加热至45 55°C，用碱试剂调节pH至8. 0 10. 0，搅拌15min，在3000 4000r/min的转速下，离心15min，取上清液；(C)将步骤(B)的上清液加热至70 90°C，用柠檬酸试剂调节PH至3. 0 5. 0， 搅拌15min，在3000 4000r/min的转速下，离心15min，收集沉淀，为花生蛋白；(D)将步骤(C)中收集的沉淀按沉淀与水的质量比为1 10 1 20的比例溶解至水中，加热至90 100°C，保持15 30min，然后冷却至40 50°C，用NaOH试剂调节并保持PH在7. 5 9. 0，按照花生蛋白质量的2 0Z0 10%的质量，添加碱性蛋白酶Alcalase， 酶解2 4h ；(E)待步骤(D)酶解结束后，迅速用HCl溶液调节pH至5. 0 3. 0，在3000 4000r/min的转速下，离心15min，取上清液，为花生肽粗制液；(F)将步骤(E)所得的花生肽粗制液注入储槽中，溶液经微滤后通过分子量截留量为IOOODa超滤膜，溶液中的小分子物质经中空纤维膜的内壁渗透出来成为超滤液，收集超滤液，为花生肽超滤液；溶液中的蛋白等大分子物质得以保留并得到浓缩，将浓缩液回收至步骤(D)中再次酶解；(G)交换树脂于去离子水中浸泡处理M小时后装柱，然后分别用7. 5%盐酸和 10% NaOH对其进行浸泡，转化为H+型阳离子交换树脂和0H_型阴离子交换树脂，再用去离子水清洗至PH为7. 0左右，待用将步骤(F)中所得的超滤液，以5 10倍柱体积/h的流速通过H+型阳离子交换树脂来脱除阳离子，待流出液pH = 4. 0左右时停止加样，之后将此流出液以同样流速通过 Off型阴离子交换树脂来脱除阴离子，至流出液呈pH为7. O时停止加样，收集为花生肽精制液；(H)由步骤(G)中得到的花生肽精制液，减压浓缩至固型物含量30% 40% ；(I)步骤(H)中的精制液经喷雾干燥或冷冻干燥制成花生肽干粉。上述步骤(A)的目的是用正己烷溶解花生饼中的残留脂质，以去除花生饼中的脂质，使最终产品的脂肪含量降低，所谓“浸提”，就是用正己烷溶解花生饼粉中的脂溶性物质，然后过滤或者离心去除液体，留下花生饼固体。上述步骤(B)碱溶的目的是利用蛋白质在碱性条件下溶解的特性，将花生蛋白和碱不溶性物质分离开，以提高花生蛋白的含量。上述步骤(C)酸沉的目的是利用蛋白质在酸性等电点条件下沉淀的特性，将花生蛋白和酸溶性物质分开，以提高花生蛋白的含量。上述步骤(B)、(C)的目的是为了去除花生饼中的杂质，提高花生蛋白的含量，为酶解提供原料。一般花生饼中蛋白的含量在50 %左右，经过上述方法处理后，花生蛋白含量可达90%以上。上述步骤(D)中酶解过程需要不断搅拌，同时加入NaOH溶液以保持pH值在7. 5 9. 0，酶解的目的是将花生饼中的大分子蛋白质酶解为小分子蛋白质和肽。上述步骤(E)调酸的目的是为了使酶失活，停止酶解反应；离心的目的是为了固液分离，收集酶解液。上述步骤(F)中超滤的目的是为了截取需要分子量的产品；二次酶解的目的是为了将分子量IOOODa以上的大分子蛋白水解成小分子，提高利用原料利用。4上述步骤(G)中脱盐的目的是为了去除酶解液中因酶解过程中不断调节pH而带入的盐离子。本发明与现有技术相比，具有如下优点和效果(1)直接以花生饼为原料，提高了原料利用率；(2)用浸提法除去花生饼中的残留油脂，使最终产品脂肪含量在以下；(3)利用碱溶酸沉法纯化花生蛋白，提高水解原料的品质，使最终产品的总氮量在 90%以上；(4)采用超滤法对花生肽进行分级处理，保证100%的花生肽分子量在IOOODa 以下，并对于分子量IOOODa以上的花生肽进行二次酶解，使最终产品的分子量分布均在 IOOODa 以下；(5)利用阴阳交换树脂对花生肽粗品进行脱盐，没有脱盐处理的产品盐分含量在 8%左右，采用本方法中的脱盐工艺处理的产品盐分含量在2%以下；(6)由本发明制备并精制的花生肽具有良好的提高动物免疫力的功能。本发明的方法制备的花生肽有较好的增强动物免疫力的效果，实验证明如下实验动物小鼠预饲3d后，按体重随机分组，将小鼠分成对照组，花生200mg/kg. d 剂量组，每组各30只。对照组给予一定剂量的生理盐水。喂养中，观察小鼠活动的能力，并且每三天称量体重一次。各组给药5周(35天)后，处死小鼠后实验。处死小鼠后，立即取出脏器，用吸水纸吸去污血，置于电子分析天平上称量脏器的重量，脏器指数以脏器重量 (mg)与体重(IOg)之比表示。处死小鼠后立即取出脾脏及胸腺，用吸水纸吸去污血，置于电子分析天平上称重，免疫器官指数以免疫器官重量(mg)与体重(IOg)之比表示。表1花生肽对小鼠体重的影响本发明公开了一种花生生物活性肽的制备方法，它是以花生饼为原料，经粉碎、浸提后得到脱脂花生饼粉末，再经碱溶、酸沉后得花生蛋白，将所得的花生蛋白进行酶解、离心和超滤获得小分子物质超滤液和大分子物质浓缩液，将小分子物质超滤液经交换树脂脱盐、浓缩、干燥得到花生肽干粉，将大分子物质浓缩液回收进行二次酶解、超滤、脱盐、浓缩、干燥获得花生肽干粉。本发明的花生肽有较好的增强免疫力的效果。