专利名称：兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂及其制备工艺的制作方法林可霉素(Lincomycin)，又名洁霉素，是由链霉菌培养液中取得的ー种林可胺类碱性抗生素。1962年由美国人Mason等首先提取获得，国内七十年代实现规模生产，得以广泛应用。林可霉素对组织和细胞的穿透力強，在治疗家畜因革兰氏阳性菌所引起的感染，猪密螺旋体、弓形虫等感染，以及家禽慢性呼吸道病、鸡坏死性肠炎等疾病中发挥了重要作用。在兽医临床上主要作为速效抑制细菌生长的治疗用药。在动物疾病防治中常用盐酸林可霉素，对常见的需氧革兰阳性菌，如金黄色葡萄球菌(包括耐青霉素G者)、表皮葡萄球菌、3溶血性链球菌、草绿色链球菌和肺炎链球菌等有较高抗菌活性。对厌氧菌包括破伤风杆菌、白喉棒状杆菌和产气荚膜杆菌等亦有良好的抗菌作用。盐酸林可霉素的性质稳定，水溶性极佳，PKa为7. 6 ;20%的水溶液pH值为3. 0 5. 5。(王忠等，林可霉素在兽医临床上的应用进展[J]，兽医导刊，2010，Ns 2，42)。抗生素的广泛应用和不按规定的滥用，使耐药菌株不断増加，并出现一菌多耐的现象，抗生素耐药菌株的产生，使抗生素应用受到威胁。寻求新的复方组合、引入协同增效作用成分是ー种有效途径。其中，中药和抗生素联合使用，利用中药的协同增效或逆转细菌耐药作用，治疗严重混合感染、扩大抗菌谱、減少耐药发生和减轻毒副反应，控制耐药菌所致的严重感染已成为抗感染性疾病的重要发展方向。药用青蒿素是从中药青蒿即菊科植物黄花蒿的叶和花蕾(Artemisia annua L.)中分离获得的。青蒿素的分子式为C15H22O5,分子量282. 34，是ー种新型倍半萜内酷，为白色针状結晶，熔点为156 157°C，[a]17D = +66.3° (C = I. 64氯仿)。易溶于氯仿、醋酸こ酷、石油醚和こ醇等有机溶媒中，几乎不溶于水。青蒿为菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)的全草,在我国作为抗痕药已有ニ千多年的历史，还有很多其它药用价值，如可用于消暑、杀菌、退热、治疗感冒等。近代研究表明青蒿素及衍生物能显著提高淋巴细胞转化率，增强抗体的免疫功能；对寄生虫类疾病、心血管系统疾病以及肿瘤等方面也有一定疗效。特别是对致病性细菌、真菌的活性(张建苹，青蒿素提取物抗真菌活性研究，东北师范大学硕士论文，2010 ;李斌，青蒿琥酯抗炎与抗菌增敏作用在其保护细菌脓毒症模型小鼠中的作用，三军医大，博士论文，2008)，同时青蒿素类药物低毒安全。应特别指出中药提取物制备合理也可实现低毒安全，不一定纯化为单体，为这类药物作为兽用药提供了前景。目前广泛使用的青蒿素衍生物蒿甲醚、ニ氢青蒿素和青蒿琥酯等价格数倍于青蒿素，而菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)中青蒿素含量很低，提取和纯化工艺比较复杂，成本还是比较贵。寻求价格比青蒿素更低的资源对青蒿素类药物在禽畜中的应用十分迫切。从菊科植物黄花蒿中提取分离纯化青蒿素，处决于提取分离纯化工艺水平，而提取又起关键降低成本作用。利用药材与溶剂之间有效成分的浓度差，逐罐将有效成分溶出扩散至起始浓度较低的提取溶剂中，达到最大限度转移药材中有效成分的目的多罐逆流提取比单个提取罐进行多次间歇式提取具有提取效率高、溶剂节省、能耗低等优点。
本发明所要解决的问题是针对上述现有技术而提出一种吸收快，生物利用度高，不易产生耐药性的兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。本发明为解决上述提出的问题所采用解决方案为兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂，包括有以下药物组分盐酸林可霉素10% 35%;青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物1% 20%; 3ー环糊精2% 20% ;其余为注射水；各组分百分比之和为100%，均为质量百分比。按上述方案，所述的3 —环糊精为羟丙基一 3 —环糊精或磺丁基醚ー 3 —环糊 姓不同O按上述方案，所述的注射剂规格为I 20ml/支。兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂的制备エ艺，包括有以下步骤I)青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物水溶性包结配合物的制备将青蒿素提取物、青蒿素或它们的混合物在40°C 50°C溶于こ醇中，搅拌下滴入^ -环糊精和蒸馏水的溶液中，反应4 8小吋，过滤，滤液真空浓缩至干，得黄色的青蒿素-￠-环糊精固体包结配合物；2)注射剂的配制、过滤和灭菌灌封称取盐酸林可霉素和青蒿素-￠-环糊精固体包结配合物分别溶于注射水中，按如下组成和质量百分比组成制成注射剂盐酸林可霉素10% 35% ;青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物1% 20% ； ^ ー环糊精2% 20% ;其余为注射水，各组分百分比之和为100%，经调节pH6. 5 7. 0，按常规过滤、灭菌灌封制得兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。所述的青蒿素提取物的制备方法采用青蒿素的含量在0. 2%以上的黄花蒿的叶和花蕾为原料，通过多个提取罐逆流提取获得膏状青蒿素提取物，其青蒿素含量> 90%，质量计；提取罐采用提取温度50°C;提取时间30 80min ;搅拌转速200 400转/分；提取溶剂为30 60°C石油醚或溶剂汽油；黄花蒿的叶和花蕾与提取溶剂的固液比I : 8 10。本发明的盐酸林可霉素是抗菌主体，占主要份额，青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物起抗菌增敏作用，通过协同增效作用提高药效，避免抗药性，青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物的水溶性很低，所以采用添加增溶剂或助溶剂以提高其溶解性能，但有些助溶剂，如聚氧こ烯蓖麻油和こ醇，易引起过敏反应及毒副作用，本发明采用￠-环糊精作为增溶剂，提高青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物水溶性，再与水溶性极好的盐酸克林霉素制成复方注射剂，采用羟丙基一 3 —环糊精、磺丁基醚ー 3 —环糊精为原料做增溶齐U，其安全性高，成本低。本发明的青蒿素提取物由湖北郧西地区产青蒿素的含量在0.2%以上的菊科植物黄花蒿的叶和花蕾(Artemisia annua L.)(简称青蒿)为原料,经石油醚或溶剂油多罐逆流提取、分离得到青蒿素提取物，再经纯化得青蒿素，青蒿素提取物中青蒿素的含量≥ 90%。本发明的注射剂可用于治疗畜禽革兰氏阳性菌感染，特别是耐青霉素而对本品敏感的细菌感染，也可用于防治猪密螺旋体性痢疾，支原体引起的猪喘气病和家禽慢性呼吸道病，还可用于牲畜原虫病的治疗。本发明有益效果在于皮下或肌肉注射给药吸收快、生物利用度高；中药有效成分和抗生素联合使用，能发挥中药的协同增效或逆转细菌耐药作用；青蒿素特别是青蒿素提取物价格比ニ氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯便宜得多；除多罐提取外，适合具有GMP条件的动物药厂注射车间生产，无需更新投入。图I为青蒿素提取物及青蒿素获取流程框图；图2为多逆流提取连接不意图。

P —环糊精 2% 20% ;其余为注射水。配制成注射剂，经调节pH6. 5 7. 0，按常规过滤、灭菌灌封等制成规格为I 20ml/支的兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。实施例I取湖北郧西地区产青蒿素的含量在0. 2%以上的菊科植物黄花蒿的叶置干燥箱中于40°C烘干，按文献(高彤文，天津大学硕士论文，2008，16 17)TLC法辨其真伪。粉碎及过60目 0.25mm筛。再按文献(李春莉等，[J]，重庆医科大学学报，2007，32 (4)，413)用紫外分光光度法測定青蒿素的含量，要求青蒿素含量> 0. 2%以上供用。称IOKg左右粉粹料置入提取罐组，如图2所示，按图I流程和エ艺參数逆流提取(提取罐采用提取温度50°C;提取时间60min ;搅拌转速200 400转/分；提取溶剂为50°C石油醚；黄花蒿的叶和花蕾与提取溶剂的固液比I : 9)。富含青蒿素有效成分的溶剂在流出罐组前与新鲜的被提取粉粹料接触，而将要被提取完全的粉粹料在流出罐组前与新鲜的溶剂接触，使有效成分的提取更加完全，提取率 95%。过滤，压干滤饼，合并滤液，真空浓缩脱溶得浸膏，石油醚冷凝回收套用。浸膏加70%的こ醇溶解，50°C恒温回流搅拌，萃取脱蜡，萃取液滤液加I 2%的活性炭50°C保温脱色I. 5小时，过滤，真空浓缩至干得青蒿素提取物，こ醇冷凝回收套用。青蒿素提取物用70%こ醇精制、过滤、干燥得青蒿素。将制得的青蒿素提取物(粗粹)50°C溶于こ醇中，搅拌下仔细滴入10分羟丙基-0 -环糊精和90分蒸懼水的溶液中，反应6小时,过滤,滤液5 IOmm Hg浓缩至干,得黄色的青蒿素-羟丙基-P -环糊精固体包结配合物。上述青蒿素-羟丙基-P -环糊精固体包结配合物和盐酸林可霉素分别溶于注射水中，按如下组成和质量百分组成盐酸林可霉素20% ;青蒿素提取物5% ;羟丙基-P —环糊精4% ;其余为注射水(即71% );配制成注射剂，经调节pH6. 5 7. 0，按注射剂制备常规过滤、灭菌灌封和灯检等制成规格为IOml/支的兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。实施例2以120溶剂汽油替代石油醚(30 60°C )，获取青蒿素提取物外，其余与实施例I相同。制得的青蒿素提取物按实施例I相同エ艺经青蒿素-羟丙基-￠-环糊精固体包结配合物，再与盐酸林可霉素配制成注射剂，常法过滤、灭菌灌封和灯检等制成规格为IOml/支的兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。实施例3
青蒿素提取物以青蒿素替代，其余与实施例I相同，按实施例I相同エ艺制备IOml/支的兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。实施例4
青蒿素提取物以青蒿素和青蒿素提取物各50%替代，其余与实施例I相同，按实施例I相同エ艺制备IOml/支的兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。


本发明涉及一种兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂，包括有以下药物组分盐酸林可霉素10％～35％；青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物1％～20％；β一环糊精2％～20％；其余为注射水；各组分百分比之和为100％，均为质量百分比，包括有以下步骤1)青蒿素、青蒿素提取物或它们的混合物水溶性包结配合物的制备；2)注射剂的配制、过滤和灭菌灌封制得兽用复方盐酸林可霉素和青蒿素注射剂。本发明有益效果在于皮下或肌肉注射给药吸收快、生物利用度高；中药有效成分和抗生素联合使用，能发挥中药的协同增效或逆转细菌耐药作用；青蒿素特别是青蒿素提取物价格比二氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯便宜得多；无需更新投入。