一种用于高内涵筛选的细胞培养装置制造方法 [0002] 高内涵筛选（High content screening,HCS)是指在保持细胞结构和功能完整性的 前提下，同时检测筛选对象对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号转导各个 环节的影响，在单一实验中获取大量与基因、蛋白及其他细胞成分相关的信息，确定其生物 活性和潜在毒性的过程，同时，也是样品制备、自动化分析设备、数据处理软件、配套检测试 齐U、信息学等多方面技术整和的结果，特别是电子荧光显微镜和荧光试剂对高内涵筛选方 法的建立起到重要作用，高内涵筛选应用高分辨率的荧光数码影像系统，旨在获得被筛样 品对细胞产生的多维立体和实时快速的生物效应信息，在细胞水平上检测多个指标的多元 化、功能性筛选技术平台。 [0003] 目前高内涵筛选常用的两种细胞样品处理方法是：①使用固定细胞与荧光抗体、 配体或核酸探针进行分析；②使用活细胞与多色荧光指试剂和生物传感器进行分析，其常 规的技术流程是将细胞接种至微孔板中，按照实验设计施加筛选对象进行干预，然后根据 实验要求选择将活细胞或固定细胞与荧光试剂结合，选择合适的缓冲液清洗多余的荧光试 齐IJ，再借助于高内涵筛选系统进行数据采集分析。 [0004] 但是，用传统的微孔板进行细胞样品制备时，有些许不便之处：微孔板孔内部高 度较高，多余荧光试剂的清洗需要借助移液器移除，这个过程中便很容易造成细胞损伤、流 失，而且不利于抗体的回收，实验试剂损耗多，操作难度大，费时费力，有碍实验进展。 [0005] 因此，本领域尚需对细胞培养装置进行改进。 实用新型内容 [0006] 本实用新型的目的在于提供一种用于高内涵筛选的细胞培养装置，可以用于多种 细胞、多种条件的同时筛选，且方便用于后续细胞与荧光试剂结合技术的实施，节省试剂、 缩短实验时间。 [0007] 本实用新型的第一方面，提供一种用于高内涵筛选的细胞培养装置，包括： [0008] -基板，
[0009] 位于所述基板的一个主表面之上的一个或多个通孔层，各所述通孔层上设置有η 个相互平行的通孔，η彡10,且所述通孔的高度为l-5mm ;
[0010] 其中，各所述通孔层粘贴在所述基板上，从而使得各通孔互不连通，并且所述通孔 与所述基板构成用于培养细胞的培养室，并且各所述通孔层是可独立地被剥离的。
[0011] 所述可独立地被剥离的是指根据需要从基板上剥离一个或多个通孔层。
[0012] 在另一优选例中，10彡η彡10000。
[0013] 在另一优选例中，所述通孔层为胶带。
[0014] 在另一优选例中，所述胶带为防水胶带或电工胶带。
[0015] 在另一优选例中，所述细胞培养装置具有1-100个通孔层。
[0016] 在另一优选例中，所述通孔层上每平方厘米上具有2-10个通孔。
[0017] 在另一优选例中，通孔层上每平方厘米上具有2-5个通孔。
[0018] 在另一优选例中，所述通孔的高度为l_3mm。
[0019] 在另一优选例中，所述一个或多个通孔层上共具有96、192、384或768个通孔。
[0020] 在另一优选例中，所述通孔层上共平行设置16行通孔，每行具有24个通孔。
[0021] 在另一优选例中，各通孔的直径为2. 5-3. 5mm ;相邻通孔之间的距离为 4. 5-5. 5mm。所述距离是指各通孔的中心线之间的垂直距离。
[0022] 在另一优选例中，各通孔的直径为3mm ;相邻通孔之间的距离为5mm。
[0023] 在另一优选例中，所述通孔层的长度为128mm，宽度为86mm，厚度为2mm。
[0024] 在另一优选例中，所述基板的长度为120-130mm，宽度为80-90mm，厚度为l-5mm。
[0025] 在另一优选例中，所述基板的长度为128mm，宽度为86mm，厚度为l-3mm。
[0026] 在另一优选例中，所述细胞培养装置还包括一个或多个盖板层，可剥离地粘在所 述一个或多个通孔层上。
[0027] 在另一优选例中，所述一个或多个通孔层构成一长方体，所述长方体的长度为 128mm，宽度为86mm，厚度为2mm。
[0028] 本实用新型的用于高内涵筛选的细胞培养装置，带有通孔的胶带层在玻璃板上划 分出数个独立的细胞培养区域，可以实现多条件筛选；且缩短了孔内部高度，减少了试剂用 量；在处理细胞样品时，可以揭去胶带层，直接将附着有活细胞或固定细胞样品的玻璃板浸 入荧光试剂中，与荧光试剂结合，也可以直接浸入缓冲液中清洗多余的荧光试剂，降低了操 作难度，减少了细胞损失，缩短了实验时间。
[0029] 应理解，在本实用新型范围内中，本实用新型的上述各技术特征和在下文（如实 施例）中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。 限于篇幅，在此不再一一累述。




[0030] 图1为本实用新型的细胞培养装置的结构示意图。
[0031] 图2为本实用新型的细胞培养装置的通孔层的结构示意图。
[0032] 图3为本实用新型的细胞培养装置的基板的结构示意图。


[0033] 本申请的发明人经过广泛而深入地研究，首次意外研发出一种新型的细胞培养装 置，将具有数个通孔的一个或多个通孔层粘在基板上，在基板上划分出数个独立的细胞培 养区域，可以实现多条件筛选。通过调节通孔层的厚度缩短通孔的高度，减少了试剂用量。 在处理细胞样品时，可以揭去一个或多个通孔层，直接将附着有活细胞或固定细胞样品的 基板浸入荧光试剂中，与荧光试剂结合，也可以直接浸入缓冲液中清洗多余的荧光试剂，降 低了操作难度，减少了细胞损失，缩短了实验时间。在此基础上，完成了本实用新型。
[0034] 下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本 实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通 常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量 计算。
[0035] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本实用新型方法中。 文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0036] 用于高内涵筛选的细胞培养装置
[0037] 如图1所示，本实用新型的细胞培养装置1的组成部件包括：
[0038] 一个或多个通孔层2,如图2所示，所述通孔层上具有数个相互平行的通孔20,通 孔20的高度为l-5mm ;
[0039] 基板3,所述一个或多个通孔层2粘贴在所述基板3的一个主表面之上，从而使得 各通孔20互不连通，并且所述通孔20与所述基板3构成用于培养细胞的培养室，并且各所 述通孔层2是可独立地被剥离的。
[0040] 所述通孔层2上可以具有10-10000个通孔20。
[0041] 在一优选实施方式中，所述通孔层2上每平方厘米上具有2-10个通孔20,较佳地， 所述通孔层2上每平方厘米上具有2-5个通孔20。
[0042] 在一优选实施方式中，各所述通孔20的高度为l_3mm
[0043] 所述细胞培养装置可以具有1-100个通孔层2。各通孔层2-同构成一四面体，在 一优选实施方式中，该四面体的长度为120_130mm，宽度为80-90mm，厚度为l-3mm，较佳地， 长度为128mm，宽度为86mm，厚度为2mm。
[0044] 本实用新型的通孔层2可以为胶带，如防水胶带或电工胶带。胶带的长度为 120-130mm，宽度为80-90mm，厚度为l-3mm。在一优选实施方式中，胶带的长度为128mm，宽 度为86mm，厚度为2mm。
[0045] 因通孔层2上具有数个通孔20,通孔层2粘在基板3上时，在基板3上划分出数个 独立的细胞培养区域，可以实现多条件筛选。因具有一个或多个通孔层2,可以根据需要剥 离一个或多个通孔层2,保留其他通孔层2。
[0046] 通孔20的数量可以根据需要设计，如优选各通孔层2上共具有96、192、384或768 个通孔20。在一优选实施方式中，各所述通孔层2上共平行设置16行通孔20,每行具有24 个通孔20,较佳地，各通孔20的直径为2. 5-3. 5mm，相邻通孔20之间的距离为4. 5-5. 5mm。 更佳地,各通孔20的直径为3mm ;相邻通孔20之间的距离为5mm。在另一优选例中，各通孔 20的高度为2mm。
[0047] 如图3所示，基板3为一薄的平板，在一优选例中，基板3长度为120_130mm，宽度 为80_90mm，厚度为l_5mm，较佳地，基板3的长度为128mm，宽度为86mm，厚度为l_3mm。
[0048] 本实用新型中，基板3可以为玻璃板或塑料板。
[0049] 在一优选实施方式中，在本实用新型的细胞培养装置1中，胶带的长度为128mm， 宽度为86mm，厚度为2mm ;玻璃板的长度为128mm，宽度为86mm，厚度为2mm ;胶带上平行设 置16行通孔20,每行具有24个通孔20,共具有384个通孔20,各通孔20的直径为3mm，相 邻通孔20之间的距离为5mm。
[0050] 在另一优选例中，所述细胞培养装置还包括一个或多个盖板层（图未示），可剥离 地粘在所述一个或多个通孔层上。
[0051] 将本实用新型的细胞培养装置用于高内涵筛选食管癌细胞放疗增敏药物，步骤如 下：将细胞培养装置放置无菌的细胞培养皿中，接种一种或多种食管癌细胞至该细胞培养 装置中，待细胞贴壁后，据实验设计添加药物库进行干预适当时间，之后取出该培养装置， 小心揭去通孔层，将附着有食管癌细胞的玻璃板置于PBS中清洗一次，再于4%多聚甲醛溶 液中静置15min以固定细胞，PBS清洗细胞三次，每次5min;然后将该玻璃板浸入0. 25% Triton-X-100溶液中放置lOmin以增加细胞膜通透性，PBS清洗细胞三次，每次5min ;细胞 样品再于含1% BSA的PBS中孵育30min后与合适浓度的的目的蛋白的一抗室温结合lh， PBS清洗细胞三次；每次5min ;细胞样品与对应的荧光标记二抗室温避光结合lh，弃去二抗 溶液，PBS清洗细胞三次；每次5min ;滴加封固液封固该薄玻璃板，并上机检测。
[0052] 本实用新型的有益之处在于：
[0053] (1)带有通孔的通孔层将基板上划分出数个（如384个）独立的细胞培养区域，可 以实现多种细胞、多种条件筛选；
[0054] (2)与传统的微孔板相比，本实用新型的用于高内涵筛选的细胞培养装置缩短了 通孔内部高度，减少了试剂用量；
[0055] (3)在处理细胞样品时，可以揭去通孔层，直接将附着有活细胞或固定细胞样品的 基板（如玻璃板）浸入荧光试剂中，与荧光试剂结合，也可以直接浸入缓冲液中清洗多余的 荧光试剂，降低了操作难度，减少了细胞损失，缩短了实验时间。
[0056] 在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被 单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技 术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求 书所限定的范围。