专利名称：一种家兔精液稀释保存液的制作方法家兔是草食性动物，是目前国家促进畜牧业产业结构调整重点发展扶持的农业项目，同时也是目前我国农村增收致富的特色产业。近30年来，我国畜牧业取得了长足的发展，但家兔产业技术水平相比较于其它畜禽业还相对滞后，特别是繁殖技术方面，猪、牛、鸡等早已实现人工授精进行繁殖，但目前家兔产业还基本采用自然交配的方式进行繁殖，严重制约了家兔产业的发展。长期以来，由于家兔的繁殖技术问题没有得到突破性进展，导致家兔生产效益较低，不能充分体现规模化养殖效益。因此，改进家兔繁殖技术，采用人工授精，实现同期发情、同期分娩、同期断奶、同期上市的全进全出周期化生产模式显得尤为必要；搞人工授精 首先要解决的是公兔精液体外保存问题，精液稀释保存液的研发又是重中之重，精液能有效的体外保存是人工授精技术成功的前提，同时也是该技术应用推广的保障。
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种家兔精液稀释保存液。本发明的技术方案如下一种家兔精液稀释保存液，组分为柠檬酸2. 13g，Tris3. 17g，无水葡萄糖O. 60g，溶解于IOOml蒸馏水中，然后进行高压灭菌处理，待灭菌完冷却后，将其放入无菌操作台，加入2ml卵黄，青霉素20万IU，链霉素20万IU。试验结果表明，自配的精液稀释保存液能在4°C体外保存公兔精液60h以上，且活力大于O. 5 (活力O. 5是保证能正常进行人工授精的指标)。其在体外保存能力远远高于5%葡萄糖溶液和生理盐水。同时进行的人工授精试验(活力O. 5时)的受胎率在75%左右，试验结果也表明，该稀释液配方在体外保存家兔精液60h以内均可进行人工授精。图I为自配稀释保存液体外保存精液IOh时间内，活力均为O. 8，无变化，但畸形率升高了 O. 78个百分点，A :正常精子；B :畸形精子。I. 2试验仪器与试剂试验仪器显微镜、电子天平、PH计、恒温水浴锅、高压灭菌锅、冰箱、无菌操作台、微量移液枪、采精器、血球计数板等其它玻璃仪器。试验试剂考马氏亮蓝染色液、Tris、柠檬酸、无水葡萄糖(分析纯)、卵黄、青霉素、链霉素、蒸馏水、5% (重量百分比)葡萄糖溶液、生理盐水、3% (重量百分比)Nacl溶液等。I. 3精液品质测定I. 3. I精液采集采用人工制作的假阴道采精器进行人工采精。 I. 3. 2 射精量用2. 5ml注射器进行测定，排除注射器内空气后进行读数、计数。1.3.3PH 值测定采用PH计进行直接测定。I. 3. 4精子活力通过目测法以十级制评估精子的活力。I. 3. 5精子密度将采集的新鲜精液用3% Nacl做100倍体积比稀释，摇匀稀释精液，采用血球计数板进行计数测定。Iml原精液的精子数=5个大方格内的精子数X5X 10X 1000X 100。I. 3. 6精子畸形率采用考马氏亮蓝染色剂染色，在1000倍下观察计数。精子畸形率=畸形精子数/300X100%I. 4精液体外保存试验I. 4. I稀释保存液配制电子天平准确称取朽1檬酸2. 13g, Tris3. 17g,无水葡萄糖O. 60g,溶解于IOOml蒸馏水中，然后进行高压灭菌处理。待灭菌完冷却后，将其放入无菌操作台，加入2ml卵黄，青霉素20万IU，链霉素20万IU。I. 4. 2体外保存研究将鲜精液用稀释保存液稀释，稀释后的浓度为30X 106/ml。同时用5%葡萄糖溶液、生理盐水做对照，原精液不做任何处理对照。将稀释后的精液、纯精液在4°C下保存。在稀释后的 2h、4h、6h、8h、IOh、12h、24h、36h、48h、60h、72h 进行观察测定。I. 5人工授精试验采用自配稀释保存液，稀释后的精液，活力在O. 5时间点进行人工授精试验，根据体外保存试验结果，选择在体外保存60小时时间点进行人工授精。选择500只初配母兔(齐卡大型新西兰)连续进行4胎人工授精，每只母兔输精浓度为15X106。配种后采用摸胎法进行妊娠检查。I. 6试验数据用Excel软件进行处理后，采用SPSS14. O统计软件，结果均以平均数土标准差表
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2结果与分析2. I鲜精液质量表I显示，其射精量、活力、PH值、密度、畸形率分别为1.43ml、0.81、7.23、
3.84X108/ml、8. 87%。表I精液质量测定结果


本发明公开了一种家兔精液稀释保存液，组分为柠檬酸2.13g，Tris3.17g，无水葡萄糖0.60g，溶解于100ml蒸馏水中，然后进行高压灭菌处理，待灭菌完冷却后，将其放入无菌操作台，加入2ml卵黄，青霉素20万IU，链霉素20万IU。试验结果表明，自配的精液稀释保存液能在4℃体外保存公兔精液60h以上，且活力大于0.5(活力0.5是保证能正常进行人工授精的指标)。其在体外保存能力远远高于5％葡萄糖溶液和生理盐水。同时进行的人工授精试验(活力0.5时)的受胎率在75％左右，试验结果也表明，该稀释液配方在体外保存家兔精液60h以内均可进行人工授精。