专利名称：一种dna低温保存溶剂及其保存方法DNA是染色体的重要组成充分，是遗传信息的载体，含有物种个体的遗传信息，是最重要的生物信息分子，可用于构建基因组文库、分离所需的基因和检测相关的分子标记等。基因组DNA是没有组织特异性的，即无论从何种生物组织制得的DNA都是一样的。由于DNA所含的遗传信息量大，并且容易获取，具有极其稳定的化学性质，是目前种质资源和遗传资源收集和保存的主要内容之一。DNA分子的序列结构具有三个重要特性:(I)不同个体序列不一样；(2)终生不变；同一生物各不同部位细胞中的DNA序列相同。因此DNA分子本身具备档案的特性，即具有长期稳定性、信息属性、个体特异性和可以备查的属性。实际上，在疾病基因组学、药物基因组学、群体遗传学和进化等研究领域，DNA是最可靠的证据和研究过程的基本材料，被广泛应用。同时生命科学研究者日益认识到保存DNA对于今后系统生物医学的发展的重要性，各国纷纷开始保存DNA。世界上最早开始实施大规模DNA保存的是冰岛的Decode公司，全部DNA样本极其相关资料来自于将近1/3的冰岛成年人和90%以上的冰岛老年人。利用其建立的生物样本库，Decode找到了心肌梗塞等20多种疾病的致病基因。随后英国、美国、以色列等国家研究单位建立了类似的遗传资源样本库，并且以色列对外销售这些资料齐全的人DNA样本。 为了维持DNA结构的完整性，避免DNA大规模断裂和降解，DNA最佳保存方法是干粉_80°C或者液氮低温保存，但要制成干粉则需要大量的DNA，取材困难，在实际DNA样本资源收集中不具有操作性。而用无水乙醇保存DNA，虽然可以事先分装保存，但也存在反复冻融问题。而固相DNA保存技术是最近提出的新概念，适用于永久保存，并且这种方法的保存基质是否影响DNA后续实验、保存具体效果，目前无这方面的任何数据，尚有待时间考验。并且对于保存期间需要多次使用的样本，需要重新提取DNA，操作复杂，并且容易导致DNA断裂，将导致一些对DNA质量要求高的检测实验无法进行。
本发明要解决的技术问题是提供一种DNA保存溶剂及其保存方法。利用该DNA保存溶剂，可以很简单地、长期保存DNA，并且DNA提取方便、避免DNA的反复冻融、成本低廉，为今后基因组学研究、身份鉴别、基因诊断、基因治疗、器官移植等提供最原始的DNA记录。为解决上述技术问题，本发明的DNA保存溶剂，其组分包括:所述小牛血清的终体积为0.1% 1% ;甘油的终体积为10% 24%，优选15% ;二甲基亚砜终浓度为30% 50 %，优选30 %;甜菜碱的终浓度为IM 7M，优选5M ；TE缓冲液的终浓度为I X 5 X TE，pH是6 8。上述甘油、二甲基亚砜和甜菜碱作用主要是维持液态环境。另外，本发明的DNA保存方法，包括步骤:(I)提取 DNA;其中，该DNA可从生物的任何细胞、按照常规的提取方法进行提取及纯化；(2)将DNA溶于如上所述的DNA保存溶剂中进行保存。其中，DNA保存的最终浓度可以为0.1 10μ g/L，如6μ g/L左右，优选I 3 μ g/L。如DNA保存浓度很低，如直接大用量实验，保存溶剂中高浓度的二甲基亚砜和甘油有可能影响后续的实验，而高保存浓度的DNA在实际应用中需要进一步稀释后才能实验，不影响后续实验。所述保存温度 可以为-20°C _196°C。与传统的DNA保存技术相比较，本发明具有如下优点:(I)制作简单、成本低廉，只需要低温冰冻保存即可；(2)由于含有保护溶剂，使得DNA—直处于液态环境中，避免机械切割力损害，从而能有效地防止DNA降解，因此，DNA保存效果好、保存期长。(3)由于DNA保存于液态环境中，从冰箱或液氮中拿出来后，不需溶解，就可直接取样或分装，从而避免了反复冻融。因此，本发明能长期低温保存DNAjB 20年以上。市售产品。


附图是实施例3的基因组DNA电泳图，其中，孔I为实施例3中按照实施例1保存的DNA，孔2为实施例3中按照实施例1保存的DNA，孔3为DNA分子标记。实施例1一、样本DNA的提取采用FlexiGene DNA Kit(QIAGEN, Cat.N0.51206)试剂盒抽提小鼠外周血中的基因组DNA。具体步骤如下:向300 μ I血液样本中加入750 μ I Buffer FGl，上下颠倒5次使其混匀。接着在12，OOOrpm转速下离心Imin0离心后倒掉上层清液，再加入150 μ IBuffer FG2及1.5 μ I蛋白酶溶液，立即振荡，直至沉淀完全溶解。接下来离心3 5s，然后65°C水浴5min。当溶液从红色变为橄榄绿色后，加入150 μ I 100%异丙醇，上下充分颠倒离心管，使其混合，直至DNA析出，呈肉眼可见的线状或块状。然后在12，OOOrpm转速下离心3min。离心后倒掉上层清液，再加入150 μ I 70%乙醇,并振荡5s。接着重新在12，OOOrpm转速下离心3min,离心后倒掉上层清液，自然风干沉淀，直至所有的液体都蒸发掉。二、保存向上述含有DNA的离心管中加入500 μ I的DNA冰冻保存溶剂后，37°C过夜，保证DNA充分溶解，然后于-80°C冰箱保存。
其中，DNA冰冻保存溶剂的组成为:终体积为15 %的甘油、终浓度为IXTE(pH7.6)、终浓度为5mol/L的甜菜碱、终浓度为30%的二甲基亚砜。实施例2采用实施例1中的DNA抽提方法，抽取实施例1的小鼠外周血300 μ I进行DNA抽提，然后向含有该DNA的离心管中加入500μ I的IXTE (pH7.6)，37°C过夜，保证充分溶解后，于-80°C冰箱保存。实施例3实施例1和实施例2中的DNA保存I个月后，每个工作日的10点和16点将实施例I和实施例2保存的DNA取出，置于37°C温箱15分钟，使实施例1和实施例2中的DNA充分溶解后，然后-80度保存，连续反复冻融4月，进行加速实验。各取反复冻融4个月后，取按照实施例1和实施例2保存的DNA 3 μ 1，用0.8%(0.8g/100ml)琼脂糖进行电泳鉴定，电泳结果如说明书附图所示。从电泳图中看出，实施例1保存的DNA经过连续4个月反复冻融后，孔I电泳结果显示基因组DNA未降解；而实施例2保存的DNA经过连续3个月反复冻融后，孔2电泳结果显示基因组DNA —片弥散，降解明显。实施例4采用实施例1中的DNA抽提方法，将得到的小鼠肝脏DNA中加入DNA冰冻保存溶齐IJ，使DNA的最终浓度为2 μ g/L, 37°C过夜，保证DNA充分溶解，然后于_20°C冰箱保存。其中，DNA冰冻保存溶剂的组成为:终体积为25 %的甘油、终浓度为I X TE (pH6)、终浓度为6mol/L的甜菜碱。 本实施例中所保存的DNA分子结构无破坏，能满足下游实验(如PCR、基因芯片等)需要。实施例5采用实施例1中的DNA抽提方法，将得到的培养皿细胞DNA中加入DNA冰冻保存溶剂，使DNA的最终浓度为3 μ g/L, 37°C过夜，保证DNA充分溶解，然后于_196°C保存。其中，DNA冰冻保存溶剂的组成为:终体积为80 %的甘油、终浓度为5 X TE (pH8)、终浓度为lmol/L的甜菜碱。本实施例中所保存的DNA分子结构无破坏，能满足下游实验(如PCR、基因芯片等)需要。实施例6采用实施例1中的DNA抽提方法，将得到的人肝脏DNA中加入DNA冰冻保存溶剂，使DNA的最终浓度为10 μ g/L, 37°C过夜，保证DNA充分溶解，然后于_120°C保存。其中，DNA冰冻保存溶剂的组成为:终体积为60 %的甘油、终浓度为2XTE(pH7.5)、终浓度为5mol/L的甜菜碱。本实施例中所保存的DNA分子结构无破坏，完全能满足下游实验(如PCR、基因芯片等)需要。


本发明公开了一种DNA低温保存溶剂及其保存方法，该DNA保存溶剂的组分包括小牛血清、甘油、TE缓冲液、二甲基亚砜、甜菜碱。其中，小牛血清的终体积为0.1％～1％，甘油的终体积为10％～24％，二甲基亚砜终浓度为30％～50％、甜菜碱的终浓度为1M～7M，DNA保存溶剂pH范围为6.0～8.0。该DNA保存方法，包括步骤(1)提取DNA；(2)将DNA溶于DNA保存溶剂中进行保存。本发明操作简单、成本低廉，而且DNA保存效果好、保存期长，并能避免反复冻融，为科学研究、身份鉴别、医疗诊断提供最完整的DNA。