检测线粒体dna鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法_戴小军专利（dna,三系,线粒体）-早鸽网

检测线粒体dna鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法

专利名称

检测线粒体dna鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法
发明者

戴小军, 栾霁, 梁满中, 陈良碧
公开日

2012年7月18日
申请日期

2012年2月16日
优先权日

2012年2月16日
申请人

湖南师范大学
文档编号

C12Q1/68GK102586435SQ20121003454
关键字

dna 三系线粒体不育鉴定水稻检测
权利要求

1.一种检测线粒体DNA鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，其特征在于包括以下步骤提取待测水稻叶片中的线粒体DNA ；用线粒体引物mtl、mt6、mt7、mtll对步骤(I)提取的线粒体DNA进行PCR扩增；对所得PCR扩增产物进行克隆测序；将所得碱基序列与三系不育水稻线粒体DNA分子指纹对比，确定待测水稻细胞质类型2.根据权利要求I所述检测线粒体DNA鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，其特征在于所述线粒体引物mtl 正向序列5-tcttcttcggacttgatgcac_3,反 ( ^lJ 5-gcgcccttgaaatcatctta-3 ；mt6 XE ( ^1J 5-ggtaagcggaccgtggaa~3,反向序列 5_gacgcgaccggacttca_3 ；mt7 正向序列 5-tgccctgccttcacctt_3,反向序列 5_ttcgcacttcagaaaatcg_3 ；mtll 正向序列 5-ccttaaccccgctttca_3,反向序列 5-gcagttctcactctgtccg_303.根据权利要求I或2所述检测线粒体DNA鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，其特征在于所述三系不育水稻线粒体DNA分子指纹野败型细胞质mtl扩增序列第1223-729位为1-494片段、mt6扩增序列第104-113位为1-9片段、mt7扩增序列第115-123位为1-8片段、mtll段扩增序列第104-95位为II-9 片段；红莲型细胞质mtl扩增序列第1223-729位为1-494片段、mt6扩增序列第104-113位缺失、mt7扩增序列第115-123位缺失、mtll段扩增序列第104-95位为II-9片段；BT型细胞质mtl扩增序列第1223-729位缺失、mt6扩增序列第104-113位为1_9片段、mt7扩增序列第115-123位为1_8片段、mtll扩增出两种序列，既一种序列第104-95位为的II-9片段，另一种序列缺失II-9片段，所述1-494片段表示插入片段序列tttgttgtggtttttggcgtgggttttttcccaacgaaaaacgaattagaacttccatgatgctagttgcctacagtgtggcaactgctatttagaatgtatataaagtagggactagcgtccccatgaacgaccagatcaagatagatcagatttaatgtaagaatctgctcctctatagagtccccaggaaaaaccatatttggaattatatcctggagtgcgagtccctccggcaattgggcattacctgaagtttgctcaaaaagcatttttagcttatattcaagcttttgagagagcatttctcttttcaatgcgagggaatggtctctaagaccccaccccgctttataagcgaaaaaaatggcaaccgaaacaatgattccggcgcctacatatgaaatgaattggttatccataaatgcagaatgttttattcttgttccgcttcttgctccaagcagaaagacttctttg/gatctc ；所述1-9片段表示插入片段序列ccctcctga ；所述1-8片段表示插入片段序列cgttgcgc ；所述II-9片段表示插入片段序列aggtttctc
技术领域

本项发明涉及一种鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法
背景技术
具体实施例方式

本发明以32份典型籼稻和典型粳稻细胞质为对照，对不同来源的17个三系不育系线粒体DNA序列进行分析，发现不同类型不育细胞质具有特征性碱基或碱基序列，以线粒体引物mtl、mt6、mt7、mtll的扩增序列差异建立了野败型、红莲型及BT型三种线粒体DNA 分子指纹以常规水稻日本晴为对照，对V20A等三系不育系的线粒体DNA的PCR扩增产物进行克隆测序，其序列结果见表I表

专利详情
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权力要求
说明书
法律状态

专利名称：检测线粒体dna鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法1966年，日本学者新城长友育成了由细胞质和细胞核共同控制的BT型(以印度籼稻品种Chinsuran Boro II为细胞质供体，以粳稻品种作核供体选育而成)三系不育系。1970年，袁隆平、李必湖等在海南野生稻中发现一株雄性不育株，通过核置换培育成了 “野败”型不育系。随后以海南红芒野生稻与籼稻品种莲塘早杂交选育成了红莲型不育系。再后育成了 K型、R型、印水型等。由于这些细胞质除与雄性不育有关外，没有细胞质标记性状，无法通过普通生物学性状对其细胞质进行区别。
本发明的目的在于提供一种鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，通过对三系不育水稻线粒体DNA的PCR扩增产物进行克隆测序即可鉴定三系不育水稻的细胞质类型。本发明所述的检测线粒体DNA鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，包括以下步骤(I)提取待测水稻叶片中的线粒体DNA ；(2 )用线粒体弓丨物mt I、mt6、mt了、mt 11对步骤(I)提取的线粒体DNA进行PCR扩增；(3)对所得PCR扩增产物进行克隆测序；(4)将所得碱基序列与三系不育水稻线粒体DNA分子指纹对比，确定待测水稻细胞质类型。本发明检测线粒体DNA鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，在鉴定三系不育水稻细胞质类型时只需对线粒体引物mtl、mt6、mt7、mtll的PCR扩增产物进行克隆测序，再与线粒体DNA分子指纹进行比较即可简单、高效的鉴定出三系不育水稻的细胞质类型。

本发明公开了一种检测线粒体DNA鉴定三系不育水稻细胞质类型的方法，以水稻叶片为材料，提取叶片中的线粒体DNA，用线粒体引物mt1、mt6、mt7、mt11进行PCR扩增，对扩增产物进行克隆测序，再与三系不育水稻线粒体DNA分子指纹进行比较即可简单、高效的鉴定出三系不育水稻的细胞质类型。

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