专利名称：一种双重TaqMan探针荧光RT-PCR检测O1群和O139群霍乱弧菌的非诊断性方法霍乱是由霍乱弧菌(Vibrio cholerae)引起的ー种古老且流行广泛的烈性肠道传染病，曾在世界上引起多次大流行，患者的临床症状多表现为剧烈的呕吐，大量米汤状排泄，会造成迅速脱水；如治疗不及时，可导致低血容量休克、酸中毒等，甚至死亡。霍乱弧菌由意大利解剖学家Filippo Pacini在1854年首次分离，属于弧菌科(Vibrionaceae)弧菌属(Vibrio),需氧或兼性厌氧菌,革兰氏阴性,菌体短小,稍弯曲，呈弧形或逗点状，菌体尾端有鞭毛，运动活泼。霍乱弧菌有多个血清型，其中能够引起霍乱流行的主要有两种01群和0139群。自1817年以来，7次全球范围的霍乱大流行均是由01群霍乱弧菌所引发；1992年印度和孟加拉国首次爆发了非01群霍乱弧菌引起的霍乱流行，目前已陆续波及亚、美、欧三大洲，构成超越国界、洲界的大流行态势。鉴于霍乱严重威胁公众的生命安全，因此快速、准确和灵敏地检测霍乱弧菌至关重要。霍乱在我国基本得到有效控制，但发生或流行的潜在威胁依然存在。传统的霍乱弧菌检测方法需要先在碱性蛋白胨培养液中进行菌株培养后取上层培养物做弧菌分离鉴定，该检测方法所需周期长、工作量大，且易受环境、培养条件及主观因素影响，不利于霍乱弧菌的快速诊断。因此建立ー种快速、敏感、特异的检测方法对霍乱防治工作具有十分重要的意义。以溶血素基因(hlyA)为探针建立的荧光定量PCR检测01群和0139群霍乱弧菌的方法，其特异度不高，且能同时检测出非01群和非0139群霍乱弧菌。 基于SYBR Green的双重荧光PCR方法特异性检测01群和0139群霍乱弧菌的方法，需借助熔解曲线来区分特异性扩增与非特异性扩增，这使得在待检菌株的目的扩增片段因出现碱基突变而影响产物熔解温度(Tm值)时将很难通过熔解曲线进行判断，在01群和0139群霍乱弧菌的鉴定应用上有一定的局限性。
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种特异性好、灵敏度高的检测01群和0139群霍乱弧菌的双重TaqMan探针荧光RT-PCR检测的非诊断性方法。为实现上述目的，本发明ー种双重TaqMan探针荧光RT-PCR检测01群和0139群霍乱弧菌的非诊断性方法，该非诊断性方法包括针对01群和0139群霍乱弧菌的O抗原合成基因rfb基因设计引物和探针本发明公开了一种双重TaqMan探针荧光RT-PCR检测O1群和O139群霍乱弧菌的非诊断性方法，针对O1群和O139群弧霍乱弧菌的O抗原合成基因rfb基因设计引物和探针，对待检样本进行实时定量检测，该方法对O1群和O139群霍乱弧菌的rfb基因片段非常灵敏，双重实时PCR的检测下限比普通PCR高了100倍，能够达到1.0×102拷贝/μl。双重实时PCR能够在一个反应体系中同时检测两个基因或者两种不同的细菌，大大减少了实验步骤、实验时间和对试剂的消耗，在实际中，尤其是疫情爆发时有很高的应用价值。