专利名称：用于多巴脱羧酶抑制剂连续施用的组合物的制作方法帕金森病是以脑内神经递质浓度减少为特征的退行性病症。左旋多巴(L-多巴或L-3，4- 二羟基苯丙氨酸)是多巴胺的直接代谢前体，与多巴胺不同，左旋多巴能够跨过血-脑屏障，并且最常用于恢复脑中的多巴胺浓度。在过去的40年中，左旋多巴仍然是治疗帕金森病的最有效的治疗剂。然而，左旋多巴才在血浆中的半衰期短，甚至在最通常的现行标准护理治疗下引起脉冲式多巴胺能刺激。因此长期治疗会并发运动波动和运动障碍，这代表着一些患者明显残疾的根源。最终以更加连续和生理性方式向脑递送左旋多巴/多巴胺的治疗策略将为标准的左旋多巴提供运动并发症减少的益处，并且是患有帕金森病和其它神经病学或运动病症的患者非常需要的(Olanow CW ;Mov. Dis. 2008，23 (增刊3) :S613_S622)。已经开发出持续释放的口服左旋多巴制剂，但是充其量此类制剂不比标准片剂更有效。还通过使用便携式泵或贴片尝试了十二指肠内施用或者灌注连续施用左旋多巴。此类治疗，尤其是十二指肠方式治疗，是创伤性的且极其不便。此外，此类治疗伴随有多巴胺能的不利事件；连续施用左旋多巴或者多巴激动剂仍然伴随有尽管连续递送药物但为自我限制性的关闭期。 Nutt JG ；Mov. Dis. 2008，23 (增刊 3) :S580_4。左旋多巴向多巴胺的代谢转化由芳香族的L-氨基酸脱羧酶催化，该酶是遍在的酶，特别是在肠粘膜、肝、脑和脑毛细血管中具有高浓度。由于存在左旋多巴在脑外代谢的可能性，有必要施用大剂量的左旋多巴，这导致多巴胺的脑外浓度高，在一些患者中引起恶心。因此，左旋多巴通常与口服施用多巴脱羧酶抑制剂，例如卡比多巴或苄丝胼并行施用， 这使对于临床响应所需的左旋多巴剂量降低60-80%，并且因此通过抑制左旋多巴在脑外向多巴胺的转变而防止了某些副作用。确切地该剂量如何降低是不确定的。包含仅左旋多巴或者左旋多巴与左旋多巴代谢降解有关酶的抑制剂的多种制剂是众所周知的，例如， 脱羧酶抑制剂例如卡比多巴和苄丝胼，儿茶酚-0-甲基转移酶(COMT)抑制剂例如恩他卡朋和托卡朋，和单胺氧化酶(MAO)-A或MAO-B抑制剂例如吗氯贝胺、雷沙吉兰或司来吉兰或safinamide。当前可以利用的口服药物包括包含卡比多巴或左旋多巴的SINEMET 和 SINEMET CR持续释放片剂；包含卡比多巴、恩他卡朋和左旋多巴的STALEVO 片剂；以及包含左旋多巴和苄丝胼的MAD0PAR 片剂。持续且迫切需要可实现连续刺激L-多巴以更有效地治疗运动病症例如帕金森病的方法和组合物。卡比多巴[(-)-L-a-胼基-α-甲基-β_(3，4-二羟基苯)丙酸一水合物]是白色结晶化合物，仅微溶于水中，它是通常与左旋多巴一起施用的多巴脱羧酶抑制剂。在人、 猴子和狗中仅口服剂量40-70%的卡比多巴被吸收。虽然在超过30年中已经将卡比多巴与左旋多巴一起经口施用，但是不曾有在适用于皮下或者经皮递送的体积中包含有效浓度的稳定液体制剂。长久迫切需要，特别是与当前的创伤模式例如十二指肠施用相比可以更容易地向患者施用的卡比多巴制剂。
根据本发明已经发现，卡比多巴的精氨酸盐可形成适于例如连续皮下、经皮、真皮内、静脉内和/或十二指肠内施用的在生理可接受PH的稳定液体制剂。此类公开的组合物能够向患者基本连续施用卡比多巴。还发现，基本连续施用多巴脱羧酶抑制剂例如卡比多巴加上不连续(例如口服) 共施用左旋多巴，可以基本上连续刺激L-多巴并且因此例如延长左旋多巴口服给药方案的有效性和/或降低左旋多巴的每日剂量，同时有效治疗运动和/或神经病学病症例如帕金森病。本发明在一个方面中涉及适用于例如连续皮下、经皮、真皮内、静脉内、口服或十二指肠内施用的、选自卡比多巴和左旋多巴的活性剂的精氨酸盐。本文还考虑了包括卡比多巴的精氨酸盐，例如包括卡比多巴和精氨酸的、可适用于向患者基本连续施用，例如使用或者不使用例如经皮贴片或皮下泵(例如胰岛素样泵) 的可药用液体(例如室温时为液体)或者凝胶制剂或组合物。如此考虑的液体组合物可包含至少1 %、至少4 %、至少6 %或更高重量的卡比多巴，(例如大约2 %至大约6 %重量的卡比多巴)，并且因此与仅能够具有小于重量卡比多巴的卡比多巴制剂相比，可利于施用更小量的可药用制剂达到效果。在另一个实施方案中，本文考虑了包含大约1.0 0.5至大约1 至大约2.5摩尔比，例如1 1.0-1. 2摩尔比卡比多巴碱性氨基酸，例如卡比多巴精氨酸的液体或者凝胶组合物。如本文考虑的包含卡比多巴和精氨酸的液体组合物可以具有生理可接受的ρΗ，例如25°C下pH大约6. 5至9. 5，例如大约7至大约9，或者大约8 至大约9。在又一实施方案中，本文考虑了包含大约1.0 0.5至大约1 2摩尔比，例如大约1 1.8摩尔比左旋多巴精氨酸的可药用液体或凝胶组合物。例如，本文提供了包含至少大约4%重量，或者至少5%，至少大约6% (例如大约3%至大约7% )或更高重量左旋多巴的液体组合物。如本文所考虑的具有左旋多巴和碱性氨基酸的液体组合物在25°C下可具有大约8至10，例如大约8. 5至大约9. 5的pH。本文考虑的示例性液体组合物可以是液体溶液，例如可以是包含卡比多巴和精氨酸的基本上均一的混合物，并且可以包含水，或者备选地可以基本上非水性的。在另外的实施方案中，考虑的组合物还可包含一种或更多种可药用赋形剂例如N-甲基吡咯烷酮 (NMP)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、丙二醇、抗氧化剂或其组合。在一些实施方案中，本发明的可药用液体组合物可包含另外的活性剂例如恩他卡朋或者托卡朋。本文还提供试剂盒，包括a)适用于连续施用的第一组合物，包含含有卡比多巴精氨酸盐的本发明的液体或凝胶制剂；b)适用于口服施用的包含左旋多巴或其可药用盐或酯的第二组合物；和c)任选的联合施用第一制剂和第二制剂的说明书。用于连续施用卡比多巴精氨酸盐的试剂盒中的第一组合物可以配制成用于经皮、 真皮内、皮下、静脉内或十二指肠内施用，例如通过使用灌注泵。试剂盒中的第二组合物，即左旋多巴组合物可包含左旋多巴，左旋多巴可药用盐， 优选如本文所公开的其精氨酸盐，或者可以是包含左旋多巴并且还包含一种或者更多种脱羧酶抑制剂例如卡比多巴和/或苄丝胼，或者一种或者更多种儿茶酚-0-甲基转移酶 (COMT)抑制剂例如恩他卡朋和/或托卡朋，或者一种或者更多种MAO-A或MOA-B抑制剂例如司来吉兰和/或雷沙吉兰，或者其组合的组合物。本文还提供用于治疗特征为患者脑内多巴胺水平降低的疾病或病症(例如帕金森病)的方法，包括向需要其的患者基本连续施用治疗有效量的脱羧酶抑制剂，其盐例如卡比多巴精氨酸盐，或其酯，并且施用治疗有效量的左旋多巴或其可药用盐(例如精氨酸左旋多巴)，或者包含左旋多巴的组合物(例如，施用具有左旋多巴作为唯一活性剂的组合物，例如片剂，或者包含左旋多巴和一种或更多种其它活性剂例如卡比多巴、苄丝胼、恩他卡朋、托卡朋、司来吉兰和/或雷沙吉兰的组合物)。在一个实施方案中，提供了治疗或者改善需要其的患者中神经病学或运动病症的方法，包括施用治疗有效量的包含卡比多巴碱性氨基酸盐(例如卡比多巴精氨酸)的组合物和施用治疗有效量的包含左旋多巴的组合物。例如，包含卡比多巴和精氨酸的组合物可以基本上连续施用和/或包含左旋多巴的组合物可以在基本连续施用包含卡比多巴精氨酸盐的组合物的过程中以不连续的间隔施用(例如一天一次、二次、三次或更多次口服施用)。本文还提供基本连续抑制脱羧酶活性的方法和/或增加左旋多巴在接受左旋多巴的患者中半衰期的方法，包括向患者施用(例如基本连续施用)包含卡比多巴盐例如卡比多巴精氨酸的液体或凝胶组合物。例如，所公开的方法可以导致，与施用左旋多巴与不连续口服施用卡比多巴后患者血清左旋多巴半衰期相比，在连续施用卡比多巴后患者血浆中左旋多巴的半衰期长至少1. 5，或者至少两倍。图1A-1C描述卡比多巴(⑶)精氨酸盐的质谱；图2A-2C描述左旋多巴(LD)精氨酸盐的质谱；图3A-3C显示在雌性兰瑞斯X长白猪(30_35kg)每8和12h 口服一次施用(3A) Stalevo(100/25/200mg, LD/CD/E), (3B)Dopicar+Lodosyn(125/25mg LD/CD)，(3C)Sinemet 0 (100//251^，0)/^)，同时连续皮下施用(正方形)或不施用(菱形)3%卡比多巴溶液之后的血浆中测定的卡比多巴平均水平；图4A-4B显示在口服施用左旋多巴/卡比多巴并且同时连续皮下施用或不施用卡比多巴的⑶-1小鼠中测定的L-多巴和多巴胺脑水平(4A，分别为左小图和右小图)以及卡比多巴和L-多巴的血浆水平GB，分别是左小图和右小图)；图5A-5B描述在雌性兰瑞斯X长白猪(30_3^g)连续皮下施用0、2和4 %卡比多巴同时每8小时一次口服施用Sinemet (100/25mg)后在血浆中测定的L-多巴(5A)和卡比多巴(5B)的平均水平；图6A-6B描述在两头雌性兰瑞斯X长白猪(30_3^g) (6A，猪#3 ；6B，猪#4)连续皮下施用2和4%卡比多巴并且同时每12小时一次口服施用Dopicar (125/12. 5mg LD/ CD)+Lodosyn (12. 5mg CD)后测定的血浆L-多巴平均水平；图7显示在雌性兰瑞斯X长自猪(30_3^g)每8小时一次口服施用Malevo (LD/ ⑶/E 100/25/200)并且同时连续皮下施用或不施用苄丝胼或卡比多巴(60mg/天)后测定的血浆平均(士SD)LD(左旋多巴)浓度(ng/ml)；图8A-8B描述在雌性兰瑞斯X长白猪(30_3^g)连续皮下施用2%卡比多巴并且同时施用或不施用2. 5%恩他卡朋，并口服施用L-多巴/卡比多巴(LD/⑶)后测定的血浆 (8A)L-多巴和(8B) 3-0-甲基多巴(3-CMD)水平；图9显示经皮递送卡比多巴丙酯(⑶PE)后的结果；图10A-10B描述与施用Sinemet (100/25mg LD/CD)相比，雌性兰瑞斯X长白猪 (30-35kg) 口服施用肠包衣或未包衣LD和⑶精氨酸盐(分别指定为LDs和⑶s，100/25mg LD/⑶)后测定的血浆(IOA)左旋多巴和(IOB)卡比多巴水平；图11描述卡比多巴和卡比多巴丙酯(⑶PE)对L-多巴脱羧作用的抑制；图12A-12B描述卡比多巴和卡比多巴丙酯对肝提取物中L-多巴脱羧作用(12A) 和L-多巴向多巴胺代谢(12B)的抑制。
Τττ . ο现在已经一般性描述了本发明，通过参照下列的实施例会更容易地理解本发明， 这些实施例仅仅是为了例证本发明的某些方面和实施方案，并且无论如何不旨在限制本发明。
实施例实施例1卡巴多巴-精氨酸盐的制备和表征卡比多巴(⑶)_精氨酸盐如下制备称重卡比多巴[Teva Pharmaceuticals Ltd.，以色列]与L-精氨酸[Merck](以 1 1的摩尔比)置于适宜的容器中并且加入0.2%的亚硫酸氢钠[Sigma]水溶液得到终浓度4.0%的卡比多巴。将混合物加热至65 士 10°C，并且不断搅拌。当固体完全溶解时，使用0.45 μ M尼龙膜将溶液过滤。过滤的溶液立即在干冰上冰冻然后进行冷冻干燥。得到灰白色的结晶然后进行MS分析。MS分析结果清楚地显示卡比多巴和L-精氨酸离子和碎片 (图la)。峰249代表具有碎片=227,188和144的卡比多巴+Na(226+23)(图lb)；峰176 代表具有碎片157、130和116的精氨酸+2H(174+2)(图Ic)。实施例2用于皮下施用的卡比多巴溶液/制剂的制备4%卡比多巴溶液/制剂如下制备卡比多巴[Assia Ltd.，以色列]称重置于适宜容器中，然后加入水得到73%的总预计批重。将混合物室温搅拌20分钟。向混合物中加入L-精氨酸[Sigma]得到与卡比多巴的摩尔比为1 1。将混合物加热至65士 10°C并不断搅拌。当固体完全溶解时，加入 N-甲基2-吡咯烷酮[Pharmas0lVe，ISP]得到终浓度10% (w/w) 0制备并加入亚硫酸氢钠 [Sigma]溶液得到终浓度(v/w) 0在65士3°C下持续搅拌另外30分钟。之后，制备并加入PVP[聚乙烯吡咯烷酮，Sigma]溶液得到终浓度(v/w) 0在65士3°C下持续搅拌30分钟。停止加热并使制备物冷却至室温。使用无菌0.22 μ M PVDF膜将溶液过滤。通过用各自量的双蒸水(DDW)稀释4%卡比多巴-精氨酸溶液/制剂制备2和3% 的卡比多巴-精氨酸溶液/制剂。实施例3-用于皮下施用的卡比多巴溶液/制剂的制备6%卡比多巴溶液/制剂如下制备卡比多巴[Teva Pharmaceuticals Ltd,以色列]和L-精氨酸[Merck](摩尔比 1 1. 1)称重置于适宜容器中，然后加入水得到84%的总预计批重。加入N-甲基2-吡咯烷酮[Pharmasolve，ISP]得到终浓度5% (w/w) 0制备并加入亚硫酸氢钠[Sigma]溶液得到终浓度0.1% (v/w) 0将混合物加热至65士 10°C并不断搅拌。当固体完全溶解时停止加热并使制备物冷却至室温。使用无菌0. 22 μ M PVDF膜将溶液过滤。实施例4-用于皮下施用的卡比多巴溶液/制剂的制备4%卡比多巴溶液/制剂如下制备卡比多巴[Teva]和L-精氨酸[Merck](摩尔比1 1. 1)称重置于适宜容器中并且加入水得到89%的总预计批重。加入N-甲基2-吡咯烷酮[Pharmasolve，ISP]得到终浓度3. 5% (w/w) 0制备并加入亚硫酸氢钠[Sigma]溶液得到终浓度0. 05% (v/w) 0将混合物加热至65士 10°C并不断搅拌。当固体完全溶解时，停止加热并使制备物冷却至室温。使用无菌0. 22 μ MPVDF膜将溶液过滤。通过使用各自量的包含3. 5% Ν-ΜΡ，包含或不包含0. 05%亚硫酸氢钠的双蒸水 (DDff)将4%卡比多巴-精氨酸溶液/制剂稀释，制备2和3%的卡比多巴-精氨酸溶液/ 制剂。实施例5-用于经皮递送的卡比多巴制剂的制备8%卡比多巴制剂如下制备卡比多巴[Teva]和L-精氨酸[Merck](摩尔比1 1)称重置于适宜容器中并且加入丙二醇[Merck]得到75%的总预计批重。制备并加入亚硫酸氢钠[Sigma]溶液得到终浓度0.05%。将混合物加热至65士 10°C并不断搅拌。当固体完全溶解时，停止加热并使制备物冷却至室温。加入PEG-400[Merck]，得到10%的总预计批重。用85%乳酸[Fluka] 调节pH至7. 5。实施例6-卡比多巴-精氨酸、卡比多巴-赖氨酸和卡比多巴-组氨酸溶液/制剂的制备和稳定性卡比多巴溶液/制剂如下制备卡比多巴[Teva]和L-精氨酸[Merck]或L-赖氨酸[Sigma]或L-组氨酸[Sigma] (以1 1、1 1. 1或1 2的摩尔比)称重置于适宜容器中并且加入水。加入N-甲基 2-吡咯烷酮[Pharmasolve，ISP]得到终浓度5% (w/w) 0制备并加入亚硫酸氢钠[Sigma] 溶液得到终浓度0.05% (v/w) 0将混合物加热至68士3°C并不断搅拌。当固体完全溶解时，停止加热并使制备物冷却至室温。将稳定的制剂⑶赖氨酸和2%⑶精氨酸1 1. 1摩尔比)于25°C下在t = 0和t = 7天时进一步进行HPLC分析。结果显示，对于对卡比多巴在水溶液中的溶解度和稳定性的影响，在三种碱性氨基酸[L-精氨酸(PI-10. 76)、L-赖氨酸(PI-9. 74)和L-组氨酸(PI-7. 59)]之间存在显著差异表1表明了如通过肉眼(表1A)或通过UVHPLC(表1B)确定的卡比多巴在含有碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸或组氨酸)的这些水溶液中的溶解度和稳定性。使用精氨酸制备了 6%卡比多巴的稳定溶液，而使用赖氨酸会配制成仅小于4%的溶液(表1A)。此外，于 25°C下7天后，使用赖氨酸的2%卡比多巴的溶液比使用精氨酸的溶液稳定性差(表1B)。 此外，使用组氨酸不能够制备浓度> 的稳定溶液(表1A)。表 IA卡比多巴和精氨酸溶液


本文公开了卡比多巴和左旋多巴的精氨酸盐以及包含例如卡比多巴精氨酸盐的组合物，其适用于连续施用与左旋多巴施用一起治疗神经病学或者运动疾病或病症，例如不宁腿综合征、帕金森病、继发性帕金森病、亨廷顿舞蹈病、帕金森样综合征、PSP、MSA、ALS、夏-德综合征和源自脑损伤，包括一氧化碳或锰中毒的病症。