专利名称：含亲水性生物大分子的乳剂、其制备方法及用途的制作方法胰岛素为代表的亲水性生物大分子药物，包括蛋白质或多肽、多糖、核酸，是药物 领域中日益重要的一类药物，但这类物质的一个共同特点是，口服给药无效，临床中需要频 繁的注射给药。因此，开发一种患者依从度高、适合口服给药的给药体系，是医药界的共同王困相几十年来，研究人员采用共价修饰、酶抑制剂、吸收促进剂、微囊微球包裹、W/ 0(油包水)乳剂等策略，以期解决这些亲水性生物大分子药物口服生物利用度低的问 H。 Carino G. P. et al (2000) J. Control. Release. 65 :261-269 ；Kathryn ffehitehead, et al(2004)J. Control. Release. 98 :37-45 ；Yan Pan, et al(2002)Int. J. Pharm 249 139-147 ；Nerurkar Μ. Μ. et al (1996)Pharm. Res. 13 :528-534 ；Marschutz Μ. K. et al (2000)Biomaterials 21 :1499-1507 ；Christopher J.H. et al (1997)Adv. Drug. Deliver. Rev. 25 :71-89 Jeff Wang, et al (2003) J. Control. Release. 88 :369-380 ； RogerR. C. New, et al (1997)Adv. Drug. Del iver. Rev. 25 :59-69 ；AnjaGraf，et al(2008) Int. J. Pharm. 350 :351-360 ；R. NeslihanGursoy et al (2004) Biomed. Pharmacother. 58 173-182 ；CN01115327. X，US4849405, US5824638。但是上述常规的解决亲水物质口服给药方法的安全隐患，例如共价修饰会降低 药物活性，并可能改变药物分子的药理、毒理，带来严重的安全隐患；酶抑止剂，长期服用将 造成消化吸收紊乱甚至胰脏的肿大或增生；吸收促进剂有可能对细胞膜造成不可逆的破 坏，长期服用会导致膜中毒。此外，目前已经报道的关于生物大分子的口服生物利用度的数据并不理想。口 服胰岛素微乳剂生物利用度仅为4.44% (Amani Elsayed, et al, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics73 (2009) 269-279) ；口服 PTH 制剂生物利用度仅为 2. 1 % (AndreaLeone-Bay, et al, Pharmaceutical Research, Vol. 18, No.7,2001)。维生素E，又称生育酚，是一种常见的脂溶性维生素E。当作为抗氧化剂使用时，浓 度一般小于1%。维生素E也常被作为营养补充剂，广泛应用在保健、食品、医疗、美容等领 域。维生素E因其特殊的结构，对紫杉醇、环孢素、留体类物质等一些疏水分子，有着很好的 溶解性，Constantinides等人据此，在“水溶”、“油溶”之外，又提出了“维生素E溶”的概念 (Constantinides, P. P.，et al. (2004)Adv DrugDeliv Rev. 56 :175-82)。以维生素E为溶剂，应用于疏水分子的新型给药载体，最先见于Y. Kato等人的 研究，随后相关的研究层出不穷(Y. Kato, et al. (1993) Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 41 599-604 ；Constantinides, P.P. ， et al. (2000)Pharm Res. 17 :175-82 ；P.B.Nielsen, et al. (2001) Int. J. Pharm. 222 :217-24 ；Constantinides, P. P. ， et al. (2006)PharmRes. 23 :243-55 ；WO 95/11039 ；W097/03651；WO 99/04787 ；US 6，479，540；US 6，458，373 ； US7030155B2)。维生素E作为食源性物质和营养补充剂，有着高度的安全性，但是目前的研究仅 将维生素E作为疏水药物的载体，尚未见到利用维生素E实现亲水性生物大分子药物的口 服化给药的报道。
本发明人经过大量的试验和创造性地劳动，得到了一种含亲水性生物大分子的乳 剂，其中，使用维生素E或维生素E的酯类衍生物作为亲水性生物大分子的载体。维生素E 或其酯类衍生物本身无毒，可以有效解决目前口服给药的亲水性生物大分子药物的安全隐 患问题。本发明人惊奇地发现，将维生素E或维生素E的酯类衍生物作为亲水性生物大分 子的给药载体，能显著提高这些亲水性生物大分子药物的口服生物利用度。由此提供了下述发明一种含亲水性生物大分子的乳剂，包含亲水性生物大分子、水相、油相、乳化剂，其 特征在于，所述乳剂还包含维生素E和/或维生素E的酯类衍生物。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述亲水性生物大分子选自蛋白质或多 肽、多糖、以及核酸。所述亲水性生物大分子可以从生物机体中分离获得，也可以通过基因 工程手段或有机合成方式获得。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述维生素E为选自d-α -维生素E和 dl-α -维生素E中的一种或多种，所述维生素E的酯类衍生物为选自d- α -维生素E醋酸 酯、dl- α -维生素E醋酸酯、d- α -维生素E琥珀酸酯、dl_ α -维生素E琥珀酸酯、d_ α -维 生素E琥珀酸聚乙二醇酯、和dl- α -维生素E琥珀酸聚乙二醇酯中的一种或多种。本发明中的维生素E或维生素E的酯类衍生物可以是天然的，也可以是人工合成 的。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述亲水性生物大分子为0.01-1重量 份，并且所述维生素E和/或维生素E的酯类衍生物为50-1000重量份、50-500重量份、或 者100-300重量份。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述水相、油相、以及乳化剂合计为 20-2000重量份、20-1000重量份、或者50-500重量份。对本领域技术人员而言，可以容易 地确定水相、油相、以及乳化剂各自的量。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述蛋白质或多肽选自降钙素、胰岛素、 GLP-I (胰高血糖素样肽-1)、甲状旁腺激素、和生长激素；所述多糖选自肝素、低分子量肝 素(平均分子量在4000-6000)、硫酸软骨素、硫酸角质素、和透明质酸；所述核酸选自反义 核酸、核酶、干扰RNA、DECOY核酸、和三链核酸；具体地；所述降钙素为鲑鱼降钙素、鳗鱼降 钙素、或人降钙素；所述胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、或人胰岛素；所述甲状旁腺激素为 人体甲状旁腺激素1-84、或人甲状旁腺激素1-34、所述生长激素为猪生长激素、牛生长激 素、或人生长激素。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述水相为选自水、生理盐水、以及水相 缓冲液中的一种或多种。6根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述乳化剂为选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷 脂、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、卡波姆、吐温20、吐温80、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯、聚 氧乙烯醚(35)蓖麻油、聚氧乙烯醚GO)氢化蓖麻油、聚甘油-6-二油酸酯、聚甘油-3-油 酸酯、聚乙二醇-32-月桂酸甘油酯、聚乙二醇-32-硬脂酸甘油酯、以及聚乙二醇辛酸/癸 酸甘油酯中的一种或多种。根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述油相为选自中链脂肪酸甘油酯、大豆 油、玉米油、花生油、油酸、聚乙二醇400、甘油、乙醇、以及丙二醇中的一种或多种。所述中链 脂肪酸甘油酯可以为中链脂肪酸甘油一酯、中链脂肪酸甘油二酯、以及中链脂肪酸甘油三 酯中的一种或多种。所述中链脂肪酸甘油酯中的中链脂肪酸可以结合在甘油分子中的任何 一个或多个羟基位置，当形成中链脂肪酸甘油二酯或中链脂肪酸甘油三酯时，甘油分子中 的羟基上结合的中链脂肪酸分子可以相同或者不同。在本发明中，中链脂肪酸是指碳原子 数6-12的脂肪酸，其可以是饱和的，也可以是不饱和的，可以是直链的，也可以是支链的。 具体地，所述中链脂肪酸为辛酸和/或癸酸。根据本发明的任一项所述的乳剂，其还包含PH调节剂，所述pH值调节剂选自盐 酸、乳酸、醋酸、枸橼酸、磷酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、以及磷酸二氢钠中 的一种或多种。根据本发明的任一项所述的乳剂，其为微乳剂。微乳是指由水、油、乳化剂组成的， 各向同性、透明、热力学稳定的分散体系，通常粒径小于500nm。根据本发明的任一项所述的乳剂，其通过口服给药。在本发明的一个具体的实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含量如下鲑鱼降钙素0. 001重量份
1摩尔盐酸适量
生理盐水0. 35重量份
d- α -维生素E0. 7重量份
油酸0. 3重量份
聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯1. 5重量份
吐温801. 5重量份。
本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防骨质疏松的药物中的用途。本发明还涉及
一种治疗或预防骨质疏松的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含量如 下重组人胰岛素0. 03-0. 05重量份氢氧化钠适量去离子水0. 8-1. 2重量份dl-α -维生素E醋酸酯0. 8-1. 2重量份中链脂肪酸甘油酯(例如Labrafac 0. 6-0. 7重量份Lipophile 1349, Gattefosse)聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯(例如 2. 5-3. 5重量份Sofitgen 767，SAS0L)
泊洛沙姆1880. 1-0. 3重量份大豆卵磷脂0.4-0. 6重量份。本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。 本发明还涉及一种治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的方法，包括给予有效量的该乳剂的 步骤。在本发明的一个具体的实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含量 如下重组人胰岛素0. 04重量份氢氧化钠适量去离子水1重量份dl-α -维生素E醋酸酯1重量份中链脂肪酸甘油酯(例如Labrafac0. 5重量份Lipophile 1349, Gattefosse)聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯(例如3重量份Sof i tgen 767，SAS0L) 泊洛沙姆188 0. 2重量份大豆卵磷脂 0. 5重量份。本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。 在本发明的一个具体的实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含
量如下GLP-I 0.0005重量份PBS缓冲液 0.3重量份d- α -维生素E琥珀酸聚乙二醇酯 1 .5重量份聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 2重量份吐温20 0.5重量份本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。 本发明还涉及一种治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含量如 下PTH 1-34 0.005-0.015重量份水(优选双蒸水)0.4-0.6重量份醋酸 适量dl-α-维生素E 0.6-0.8重量份d-a-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯 0.4-0.6重量份大豆油 1.0-1.4重量份大豆卵磷脂0.6-0.8重量份
聚氧乙烯醚GO)氢化蓖麻油 2.5-3.5重量份 聚乙二醇4001.5-2.5重量份 本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防骨质疏松的药物中的用途。本发明还涉及
-种治疗或预防骨质疏松的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。
在本发明的一个具体的实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含量如下
PTH 1-340. 01重量份
水(优选双蒸水)0. 5重量份
醋酸适量
dl-α-维生素E0. 7重量份
d-a-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯0. 5重量份
大豆油1. 2重量份
大豆卵磷脂0. 7重量份
聚氧乙烯醚GO)氢化蓖麻油3重量份
聚乙二醇4002重量份。
本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防骨质疏松的药物中的用途。
在本发明的一个具体的实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含量如下
低分子量肝素0. 3重量份
PBS缓冲液0. 5重量份
dl-a-维生素E0. 2重量份
聚甘油-3-油酸酯1. 2重量份
吐温801重量份
聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯2. 7重量份
聚乙二醇4000. 5重量份。
本发明还涉及该乳剂在制备抗凝血和或溶栓的药物中的用途。本发明还涉及一种
治疗或预防血栓、或者抗凝血的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。在本发明的一个具体的实施方案中，所述含亲水性生物大分子的乳剂的组分及含 量如下小分子干扰RNA (例如大小为500bp)0. 0003重量份注射用水0. 5重量份dl-α -维生素E0. 2重量份聚甘油-3-油酸酯0. 3重量份聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯2. 7重量份甘油0. 5重量份。本发明的另一方面涉及本发明的任一项所述的含亲水性生物大分子的乳剂的制 备方法，包括下述步骤1)在4-25 °C条件下，将亲水性生物大分子溶于水相；2)在20-70°C条件下，将维生素E和/或维生素E的酯类衍生物与油相、乳化剂相 混合，并在200-800rmp搅拌条件下持续搅拌，直至整个体系呈透明清亮状；3)在4-37°C条件下，将步骤1)产物，逐滴加入步骤幻产物中，并在200-800rmp 条件下继续搅拌，直至形成透明清亮的均勻制剂，最终获得含亲水性生物大分子的乳剂。本发明的还一方面涉及本发明的含亲水性生物大分子的乳剂在制备治疗或预防
9糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途，其中，所述亲水性生物大分子为胰岛素或GLP-I。本发明的还一方面涉及本发明的含亲水性生物大分子的乳剂在制备治疗或预防 骨质疏松的药物中的用途，其中，所述亲水性生物大分子为降钙素、甲状旁腺激素、甲状旁 腺激素1-84、或人甲状旁腺激素1-34。本发明的还一方面涉及维生素E和/或维生素E的酯类衍生物在制备含亲水性 生物大分子的乳剂中的用途。具体地，所述含亲水性生物大分子的乳剂为本发明的任一 项所述的含亲水性生物大分子的乳剂。具体地，所述维生素E为选自d-α-维生素E和 dl-α -维生素E中的一种或多种，所述维生素E的酯类衍生物为选自d- α -维生素E醋酸 酯、dl- α -维生素E醋酸酯、d- α -维生素E琥珀酸酯、dl_ α -维生素E琥珀酸酯、d_ α -维 生素E琥珀酸聚乙二醇酯、和dl- α -维生素E琥珀酸聚乙二醇酯中的一种或多种。具体地， 所述亲水性生物大分子及水相、油相、乳化剂、PH调节剂等及其用量如上文中所描述。发明的有益效果本发明与现有技术相比，具有以下优点及突出性效果1)本发明中，借助于维生素E和/或维生素E的酯类衍生物，实现亲水性生物大分 子药物的口服化给药，并且具有安全有效、口服生物利用度高的特点，生物利用度可以达到 5%、10%、12%、15%甚至 30% 以上；2)制得的含亲水性生物低分子药物的维生素E微乳剂，遇水后能够自发乳化为 300nm以下的乳滴，更好的被胃肠道吸收利用，发挥更好的生物活性。3)本发明的制备工艺简单，成本低廉，适合于大规模工业化生产。


图1 不同给药方式下，大鼠血糖变化图。图2 不同给药方式下，大鼠PTH1-34药浓度时相图。

1)4°C下，将鲑鱼降钙素溶于生理盐水，加入适量盐酸、搅拌至澄清，得A溶液；》70°C下，将上述重量的d-α-维生素E、油酸、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯、吐温 80，混合并在200rpm搅拌条件下，搅拌至透明清亮；;3)30°C下，将A溶液，逐滴加入到步骤2、的产物中，在800r/min转速下将混合物 搅拌至透明清亮，最终获得含鲑鱼降钙素的乳剂(微乳剂)(称为样品1)。本领域技术人员可以理解，尽管实施例1中的各组分的重量单位是g，但是也可以 理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例1中的重量比例就可以。棚列2 ★翻λ·綠白视· (mm)其组成如下重组人胰岛素0.04克5摩尔氢氧化钠适量去离子水1克dl-α-维生素E醋酸酯1克中链脂肪酸甘油酯(Labrafac Lipophile0. 5 克 1349，Gattefosse)聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯(3(^以8611@3克767，54500泊洛沙姆188 (Lutrol F68，BASF)0. 2 克大豆卵磷脂(Epikuron 170，Degussa)0. 5 克。该制剂的制备方法，简述如下1)25°C下，将上述重量的重组人胰岛素溶于0.5克去离子水，加入适量氢氧化钠， 搅拌至澄清，得A溶液；2) 20°C下，将上述重量的dl- α -维生素E醋酸酯、中链脂肪酸甘油酯、聚乙二醇辛 酸/癸酸甘油酯、泊洛沙姆188、大豆卵磷脂，和剩余水相混合，并在SOOrpm搅拌条件下搅拌 至透明清亮；3)4°C下，将A溶液，逐滴加入到步骤幻的产物中，在200r/min转速下将混合物搅 拌至透明清亮，最终获得含重组人胰岛素的乳剂(微乳剂)(称为样品2)。本领域技术人员可以理解，尽管实施例2中的各组分的重量单位是g，但是也可以 理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例2中的重量比例就可以。实施例3 含GLP-I的乳剂(微乳剂)的制备其组成如下GLP-IPBS缓冲液d- α -维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(TPGS，聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯(Solutol HS吐温20该制剂的制备方法，简述如下1)20°C下，将上述重量的GLP-I溶于PBS缓冲液，搅拌至澄清，得A溶液；2) 60°C下，将上述重量的d- α -维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇十二羟基硬 脂酸酯、吐温20，混合并在600rpm条件下搅拌至透明清亮；;3)37°C下，将A溶液，逐滴加入到步骤2~)的产物中，在500r/min条件下将混合物
0. 0005 克
0.3克
1.5 Eastman) 2 克 15，BASF)
0. 5 克。搅拌至透明清亮，最终获得含GLP-I的乳剂(微乳剂)(称为样品3)。本领域技术人员可以理解，尽管实施例3中的各组分的重量单位是g，但是也可以 理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例3中的重量比例就可以。实施例4 含PTH 1-34的乳剂(微乳剂)的制备其组成如下PTH 1-34双蒸水醋酸dl-α-维生素 E
0.01 克 0. 5克
适量
0.7克 d-a-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(TPGS， 0. 5克festman)
1.2克 0.7克 3 克 ! ! 40，BASF)大豆油大豆卵磷脂(Epikuron 170, Degussa)聚氧乙烯醚00)氢化蓖麻油(Cremophor聚乙二醇4002克。该制剂的制备方法，简述如下1)20°C下，将上述重量的PTH 1_34溶于双蒸水中，加入适量醋酸，液搅拌至澄清， 得A溶液；2) 50°C下，将上述重量的dl- α -维生素E、d_ α -维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、大 豆油、大豆卵磷脂、聚氧乙烯醚GO)氢化蓖麻油、聚乙二醇400，混合并在400rpm条件下搅 拌至透明清亮；3) 30°C下，将A溶液，逐滴加入到步骤2)的产物中，并在500r/min转速下，继续搅 拌至透明清亮，最终获得含PTH 1-34的乳剂(微乳剂)(称为样品4)。本领域技术人员可以理解，尽管实施例4中的各组分的重量单位是g，但是也可以 理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例4中的重量比例就可以。^MM 5(MILM1其组成如下低分子量肝素0.3克PBS缓冲液0.5克dl-α-维生素 E聚甘油-3-油酸酯
0. 2克 1.2克
吐温801克
聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯2. 7克
聚乙二醇4000.5克。
该制剂的制备方法，简述如下
1) 10°C下，将上述重量的低分子量肝素溶于PBS溶液，搅拌至澄清，得A溶液2)50°C下，将上述重量的dl-a-维生素E、聚甘油_3_油酸酯、吐温80、聚乙二醇 辛酸/癸酸甘油酯、聚乙二醇400，混合并在400rpm条件下搅拌至透明清亮；3) 30°C下，将A溶液，逐滴加入到步骤2)的产物中，并在500r/min转速下，继续搅 拌至透明清亮，最终获得含低分子量肝素的乳剂(微乳剂)(称为样品5)。
本领域技术人员可以理解，尽管实施例5中的各组分的重量单位是g，但是也可以 理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例5中的重量比例就可以。实施例6 含小分子干扰RNA的乳剂(微乳剂)的制备其组成如下小分子干扰RNA(自制，来源于乙肝病注射用水dl-α-维生素 E聚甘油-3-油酸酯聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯甘油该制剂的制备方法，简述如下1)4°C下，将上述重量的小分子干扰RNA溶解于注射用水，搅拌至澄清，得A溶液；2) 50°C下，将上述重量的dl- a -维生素E、聚甘油_3_油酸酯、聚乙二醇辛酸/癸 酸甘油酯、甘油，混合并在300rpm条件下搅拌至透明清亮；3) 10°C下，将A溶液，逐滴加入到步骤2)的产物中，并在200r/min转速下，继续搅 拌至透明清亮，最终获得含小分子干扰RNA的乳剂(微乳剂)(称为样品6)。本领域技术人员可以理解，尽管实施例6中的各组分的重量单位是g，但是也可以 理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例6中的重量比例就可以。实施例7 粒径测定试骑用Malvern Zetasizer 3000HSA粒度分析仪检测实施例1-6制备的样品1-6的粒 径，测定前，样品用Millipore超纯水稀释30倍，结果如表1所示。表1 样品1-6稀释后的平均粒径


本发明属于药物学和制剂学领域，涉及一种含亲水性生物大分子的乳剂、其制备方法及用途。具体地，所述乳剂包含亲水性生物大分子、水相、油相、乳化剂，其特征在于，所述乳剂还包含维生素E和/或维生素E的酯类衍生物。本发明具有口服生物利用度高，安全有效的特点。