专利名称：用于保存脐带组织的液体的制作方法人体脐带组织可以制备分离出优质的间充质干细胞(MSCs)。MSCs是一种具有自我更新和多项分化潜能的多能成体干细胞，其具有巨大的应用潜力，例如，可以为造血干细胞(HSCs)提供合适的微环境、可以预防和治疗异体造血干细胞移植后产生的移植物抗宿主病(GVHD)，以及治疗自生免疫性疾病，如红斑狼疮、风湿性关节炎和硬皮病等。MSCs在通过体外的培养和扩增达到临床应用细胞的过程中，其组织/细胞在制备培养的全过程中都需要处于无菌状态。为保证采集好的脐带在运输和贮存过程中能保持无菌，传统采用将脐带组织浸没在PBS采集液里进行保存。由于PBS的配制复杂，自行配制时， 在大批量制备上会增加大量的工作量，若购买成品，则因其价格昂贵，使用成本较高。
鉴于此，本发明提供了一种用于保存脐带组织的液体，实验表明可以满意解决上述问题。本发明用于保存脐带组织的液体，采用的是含有青霉素和链霉素的生理盐水溶液。其中，每毫升生理盐水中含青霉素50U-150U，含链霉素50mg-150mg。根据所使用的生理盐水来源或配制等不同，还允许含有可接受量的其它杂质性成分。优选的是，上述用于保存脐带组织的液体为每毫升生理盐水中的青霉素含量为 100U，和/或每毫升生理盐水中的链霉素含量为lOOmg。上述用于保存脐带组织的液体中，所说的生理盐水优选为采用医用氯化钠注射液。实验结果显示，在用于脐带组织成分保存和/或培养、扩增时，本发明上述含有青霉素和链霉素(双抗)的生理盐水保存液体完全可以替代传统同样使用双抗的PBS。由于生理盐水的显著优点，是渗透压与人体的渗透压一致，PH值也与人体的生理环境相当，能很好地保护组织和细胞不受刺激和损害。特别是氯化钠注射液作为一种临床常用药剂，已有多家大型专业药厂生产，并都经过了严格的质量检验，来源广泛，质量可靠，价格便宜。实验结果还显示，本发明的上述保存液体的有效期限已超过半年，并还可以继续延长。以下结合附图所示实施例的方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。图1是在存放0天的本发明的一种保存液体和传统保存液中储存24h内脐带分离制备的msc状态示意图。图2是在存放0天的该同一种本发明和传统保存液中储存7天脐带分离制备的 msc状态示意图。图3是在存放30天的该同一种本发明和传统保存液中储存M小时内脐带分离制备的msc状态示意图。图4是在存放30天的该同一种本发明和传统保存液中储存7天脐带分离制备的 msc状态示意图。图5是在存放9个月的该同一种本发明和传统保存液中储存M小时内脐带分离制备的msc状态示意图。图6是在存放9个月的该同一种本发明和传统保存液中储存7天脐带分离制备的 msc状态示意图。图7是在本发明的另一种保存液体中储存M小时内脐带分离制备的msc状态示意图。图8是在本发明的又一种保存液体中储存M小时内脐带分离制备的msc状态示意图。在无菌条件下将经过0. 22um滤膜过滤HYCL0NE公司生产的青-链霉素，用氯化钠注射液(四川科伦药业股份有限公司生产)配制成浓度为每毫升中含有青霉素100U和含链霉素 IOOmg的混合溶液)，然后无菌分装至已灭菌的采集瓶内，每瓶150ml。实施例2
取本发明上述实施例1的保存液体，分别进行了抑菌效果试验和脐带存放后生长性实验，同时取该保存液体适量，分别在2飞。C和常温存放30天和9个月后，再进行抑菌效果测定和脐带存放后生长性实验，并与传统PBS保存液进行平行实验对照。对照用的传统PBS 保存液的配制方法
PBS溶剂组成NaCl
KCl
Na2HPO4 · 12H20
8. Og
0. 2g
2. 9g 0. 2g IOOOml0 990ml IOml IOOOml0
KH2PO4 超纯水至PBS保存液组成PBS灭菌溶剂
青-链霉素混合溶液 "PBS+双抗”保存液PBS保存液配制方法按以上组成称取各种药品，用超纯水溶解稀释至规定量， 进行湿热蒸汽灭菌(12rC，20min)，将灭菌好的溶液在超净工作台内按1:100的比例加入经过0. 22um滤膜过滤的HYCL0NE公司生产的青-链霉素混合液(每毫升液体中含青霉素 100U，含链霉素lOOmg)，分装到脐带采集瓶内，每瓶分装150ml，加盖旋紧后，用灭菌复合袋进行密封保存，放置在2 6°C和20°C下放置0天、30天和9个月后进行抑菌效果测定和脐带存放后，以同样方式做抑菌效果试验和脐带存放后生长性实验，进行对比。一、采集品的抑菌实验
抑菌效果测定采用微量肉汤法，试验药物浓度最大为50μ g (U)/ml，为实际药物浓度
的一半。微量肉汤稀释法步骤根据计数结果，用常规的MH肉汤(营养肉汤)将增菌液稀释至 IO5-IO6 个 /ml ；
将混勻的菌液加至96孔板，每孔100 μ 1 ；
在第一列分别加入采集液100 μ 1，每批采集液两个，充分吹打混勻后吸取100 μ 1至第二列，一直倍比稀释至第11列，37°C培养12-1^1。结果记录以无菌生长的最后一列对应的列数作为结果记录，以高浓度和底浓度都长菌为耐药，高浓度不长菌、低浓度长菌表示为中度抑菌，高浓度和低浓度都不长为高度抑菌。 保存液存储0天和30天的抑菌效果，以及存储9个月抑菌效果的实验结果，如表 1所示。其中，本发明实验组和PBS对照组各有3组平行的试验样本。、
表ι 保存液存放不网时W后的的摔__果


用于保存脐带组织的液体，为每毫升生理盐水中含青霉素50U-150U，含链霉素50mg-150mg的溶液。该保存液体来源广泛，质量稳定、价格便宜，且实验显示，本发明的液体与传统的PBS保存源在抑菌性、对采集的脐带组织的有效保存性等方面无明显差别，保存液的有效期至少可达半年，并可继续延长。