专利名称：组织培养器皿与组织培养方法组织工程是当前生命科学研究的前沿学科，人类身体健康离不开组织工程科学的发展和完善。传统机体修复多采用自体组织移植手术，虽然可以取得满意疗效，但它是以牺牲自体健康组织为代价，挖东墙补西墙的保守办法，最终会导致很多并发症及附加二次损伤。最重要的是，一些人体重要的组织在机体内是独一无二的，例如，眼角膜。在眼角膜受到伤害之后，机体内没有可以替代的组织，只能采用其他供体的或者人造的。但是，目前人体 捐献的供体眼角膜来源十分有限，许多病人的健康恢复无法得到保障。从而，组织工程为众多的组织缺损的病人治疗带来了曙光。组织培养是组织工程得以发展和组织产品能够快速应用的重要技术基础。目前，组织培养研究较为迅速和成熟的是有关皮肤、眼角膜和卵巢组织的培养或再造等方面。通过体外培养角膜，再移植回人体，让因为角膜缺失或损坏而失明的人士恢复视力。对于被烧伤、炎症等因素损害的皮肤，通过体外培养皮肤组织移植人体，达到修复皮肤的外形和功能的目的。通过卵巢组织的培养，能够实现卵巢内遗传资源的开发和利用，对于现代畜牧业的遗传育种、新品种培育和濒临灭绝野生动物的保护具有着重要的意义。由于组织培养不同于细胞培养，组织培养需要有一个气液共存的培养环境。而目前常规的细胞培养器皿的结构无法提供理想的气液共存的培养环境，不能满足组织培养的需要。因此，当前缺乏专业的组织培养器皿。
本发明要解决的技术问题是提供一种专用于组织培养的培养器皿。本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种使用上述培养器皿的组织培养方法。对于组织培养器皿，本发明采用的技术方案是一种组织培养器皿，包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养皿，内腔中还包括至少一个托盘和支架，托盘底设有通孔；托盘设在支架上。作为改进，支架为圆筒形，支架与底壁固定连接；托盘外缘伸出3个耳攀；托盘通过3个耳攀架在圆筒形支架上。作为另一个改进，支架为圆柱形，支架与底壁固定连接；托盘底部与圆柱形支架连接。作为进一步改进，托盘由塑料制成。 更进一步的改进,支架与培养皿由塑料一体制成。对于组织培养方法，本发明采用的技术方案是一种使用所述组织培养皿的组织培养方法，包括以下步骤 (1)使用二甲基硅油溶液处理托盘，使托盘表面具有疏水性； (2)把二甲基硅油溶液处理过的托盘通过耳攀与培养支架进行连接； (3)向托盘下方的支架所在的培养皿中内添加组织培养液，直到培养液液位升高并透过托盘底部通孔，使托盘底部现出薄层培养液为宜； (4)把培养的组织放入培养液中，以组织块的上表面暴露的空气中，下表面浸在培养液中为准，盖上组织培养器皿盖子，放入培养箱中培养。为了避免在组织培养过程中，培养组织与托盘之间发生粘连，在培养前先使用二 甲基硅油溶液处理托盘，疏水性试剂聚二甲基硅氧烷在托盘表面形成一粘附层，能够有效避免组织培养过程中组织粘贴在托盘表面，能够有效保持组织的形态和完整性。聚二甲基硅氧烷又称二甲基硅油，具有较高耐热性和耐寒性，防潮绝缘和极强的疏水性，是日常广泛应用的消泡剂，在_50°C 200°C条件下具有良好的稳定性能，透光性为透光率100%。二甲基硅油除直接使用外，为了使甲基硅油分散好，便于浸溃，喷涂，提高效率。也可配成溶液型，脂类，乳液型三种类型使用。二甲基硅油无毒无味，一般公认是安全的，在食品中常作为酿造、发酵时间的消泡剂，在医用方面，常用于急性肺水肿和肠胃胀气治疗的消泡剂。本发明的有益效果是
通过在普通培养皿的结构上增加用支架支撑的托盘，营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境，使得所培养的组织在该环境中既能接触空气，又能保持营养供给，培养的组织具有保持既定的形态和完整性，其使用方便、成本低廉、培养效果好，能够有效解决当前组织培养专业器皿的缺乏问题。本发明非常适合表面积较大或组织密度较小的组织块的培养。


下面结合附图和
对本发明作进一步详细的说明。图I是本发明组织培养器皿实施例I的主视图。图2是本发明组织培养器皿实施例I的俯视图。图3是本发明组织培养器皿实施例2的主视图。图4是本发明组织培养器皿实施例2的俯视图。图中，I-外壁，2-支架，3-托盘，301-耳攀，302-漏孔。

图2是一种用于组织培养的器皿,具有由底壁与4个侧壁构成的正方形外壁I,在外壁围成的内腔中设有4个圆形托盘3与圆筒形的支架2。在图I中，托盘3为碟形，托盘的外缘四周设有3个耳攀301，托盘3底设有数个漏孔302。合上盖子101即将培养皿内腔封闭。支架2为圆筒形，支架与底壁固定连接。托盘3外缘伸出3个耳攀301，托盘通过3个耳攀架在圆筒形支架上。耳攀301与圆筒形支架之间留有间隙，用于往圆筒形支架内加入培养液。使用时，通过托盘与培养支架之间的空隙，向圆筒形的支架内添加组织培养液，培养液添加至托盘底部出现薄层培养液为准。为使用方便，支架2与培养皿外壁I可以由透明塑料制成一体。托盘系用疏水性能良好的透明塑料制作，更进一步地还可以在托盘上涂上无毒的疏水性涂料(如二甲基硅油)。这样在取出所培养的组织时不会造成破碎或损坏，大大提高了组织培养的成功率。由于托盘面积可以制作的较大，培养时托盘在下方托住生长中的组织，因此非常适合用于表面积较大或组织密度较小的组织块的培养。
本实施例由于采用圆筒形的支架，培养液加在圆筒形支架内部。这样每个托盘下方的培养液相互不流通，可防止发生各个托盘之间病菌的相互感染。实施例2
在图3和图4中，支架2为圆柱形，支架与培养皿底壁固定连接。托盘3的底部中央与圆柱形支架2连接。支架2与培养皿外壁I由透明塑料制成一体。 本实施例的其他结构与实施例I相同。使用时，直接向支架2所在培养皿中添加组织培养液，直至托盘底部现出薄层培养液。以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。


本发明公开了一种组织培养器皿与组织培养方法。组织培养器皿包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养器皿，内腔中还包括至少一个托盘和支架，托盘底设有通孔；所述托盘设在支架上。组织培养方法包括如下步骤(1)对托盘表面疏水性处理；(2)托盘架设在支架上并向支架所在培养皿内加入组织培养液；(3)加入组织块放入培养箱中培养。本发明通过在普通培养皿的结构上增加用支架支撑的托盘，营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境，使得所培养的组织在该环境中既能接触空气，又能保持营养供给，并且取出组织时不易造成破碎，具有使用方便、成本低廉、培养效果好、更适合表面积较大或组织密度较小的组织块的培养。