一种富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法

孙理兰, 张慧慧, 李荣荣, 王泰华

2011年11月30日

2011年7月20日

2011年7月20日

王泰华

A61L27/38GK102258810SQ201110203210

自体 隆胸 脂肪组织 干细胞 富集

1.一种富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法，其特征为，主要包括如下步骤(1)从病患身上微创抽取脂肪组织，GMP实验室内经过分离提取、纯化、检测、扩增等步骤，获得高数量的干细胞；(2)全麻，用插管和负压抽脂机抽取脂肪组织；(3)取一半脂肪组织离心，分离脂肪吸入物，得到移植脂肪组织，并置于无菌容器内冰浴保存；(4)取另一半脂肪组织离心分离脂肪部分和液体部分，然后分别用酶消化法和梯度离心法分离其中的SVF，并计数测活度；(5)将扩增好的脂肪干细胞添加到新制备好的SVF中，按107100ml脂肪的比例添加， 最后将SVF和移植脂肪组织混勻2.根据权利要求1所述的富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法，其特征在于所述病患为体重指数大于15的十几岁到七十多岁的健康人群，其中，身上少脂肪的运动员除外3.根据权利要求1或2所述的富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法，其特征在于步骤(1)中，微创抽取脂肪组织的量为5ml4.根据权利要求1或2所述的富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法，其特征在于步骤(3)中，脂肪组织以500G的速度离心5min5.根据权利要求1或2所述的富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法，其特征在于步骤(4)中，脂肪组织以300G的速度离心5min

本发明属于生物医学领域，特别涉及一种富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法背景技术隆乳术或丰乳术(mammary augumentation)是整形外科最常见的一项美容手术，于20 世纪初诞生以来，填充材料就成为了焦点问题，先后尝试过许多隆乳材料，例如石腊、硅凝胶、盐水、自体真皮脂肪瓣等等，然而，长期的医疗实践证明，所有类型的组织替代品多多少少有一些不适感及并发症(包括挛缩，变形、变硬、渗漏)，这给求医者和医生们带来很大的困惑所以，在70年代末有人开始尝试在真皮脂肪瓣移植隆胸的基础上利用自体脂肪组织隆胸，自体脂肪隆胸是将身体腰、腹、臀、腿等脂肪较丰厚的部位的脂肪颗粒移植到胸部的一种隆胸术手术将隆胸者本身的多余脂肪用细针吸出，活化处理成纯净脂肪颗粒，通过微型管针分条理均勻注入隆乳区使之成活；不开刀、不出血，丰胸成效真实自然，同时又达到了减肥塑身，具有减肥丰胸的效果尤其是近几年，随着脂肪抽吸术的日益成熟，利用自体脂肪颗粒注射隆胸迅速发展起来，成为目前最热门的丰胸方法之一但是目前脂肪填充后液化吸收率太高，可以达70%以上，成活率较低(低于40%)，要想达到持久丰满的效果必须选用“少量多次”的办法，给求医者和医生们带来了极大地麻烦脂肪组织的主要组成部分有脂肪细胞，脂肪基质细胞(ASC)，血管内皮细胞，外膜细胞脂肪基质细胞(ASC)被看作是脂肪组织专属祖细胞，即生脂祖细胞和血管源祖细胞， 有些脂肪基质细胞能够分化成多种细胞，而被称为脂肪源干细胞脂肪基质细胞对于脂肪组织运转发挥重要作用，(脂肪组织大约每2-10年循环一次)，并为下一代提供细胞但是抽脂得到的主要是脂肪组织的零散成分，研究表明，抽脂术获得脂肪组织含有的脂肪基质细胞数量仅是完整脂肪组织含量的一半，比起完整脂肪组织，吸脂所得脂肪组织是一种干细胞源性差的脂肪组织，而脂肪移植后，从微观环境看，在组织修复的急性期，损伤有关的增长因素和炎症有关细胞活素和化学增活素会影响脂肪基质细胞(ASC)的表现脂肪移植将经历脂肪细胞和毛细血管重组脂肪基质细胞(ASC)是修复脂肪组织中的主要作用力量如果吸入脂肪组织中脂肪基质细胞(ASC)相对不足，会影响替换过程，导致术后植入脂肪萎缩这也是目前单纯脂肪颗粒移植隆胸效果不能持久的原因所在，因此要想获得持久的隆胸效果，必须向祖细胞不足的吸入脂肪组织增补脂肪基质细胞(ASC)或脂肪干细胞的数量，以提高移植脂肪的存活率发明内容本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种持久性强、隆胸效果好的富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法本发明是通过如下技术方案实现的一种富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法，主要包括如下步骤 (1)从病患身上微创抽取脂肪组织，GMP实验室内经过分离提取、纯化、检测、扩增等步骤，获得高数量的干细胞；(2)全麻，用插管和负压抽脂机抽取脂肪组织；(3)取一半脂肪组织离心，分离脂肪吸入物，得到移植脂肪组织，并置于无菌容器内冰浴保存；(4)取另一半脂肪组织离心分离脂肪部分和液体部分，然后分别用酶消化法和梯度离心法分离其中的SVF，并计数测活度；(5)将扩增好的脂肪干细胞添加到新制备好的SVF中，按107100ml脂肪的比例添加， 最后将SVF和移植脂肪组织混勻所述病患为体重指数大于15的十几岁到七十多岁的健康人群，其中，身上少脂肪的运动员除外本发明的填充材料主要由自体脂肪组织和脂肪来源的基质血管成分SVF (stroma vascular fraction)组成，该技术简称细胞辅助式脂肪移植CELL-ASSISTED LIP0TRANSFER (CAL)SVF是一个细胞混合体，也包括了基质细胞，高浓度的脂肪干细胞，血管内皮细胞、 白细胞和红细胞等血细胞该技术的关键在于加入了含有高浓度的脂肪干细胞的SVF成分 隆胸时抽的脂肪分两部分，一部分经过无菌处理后低温保存用于移植，另一部分在GMP实验室通过特异的SVF分离技术制备SVF细胞群并与制备好的脂肪混勻用于移植SVF能保持脂肪组织细胞的丰富，其中的各种细胞能够促进周围环境的的生长因子如PDGF，EGF, FGF, VEGF, IGF等分泌，从而进一步促进血管新生作用，在短时间内为移植的脂肪提供血液和养分，提高了祖细胞和脂肪组织的存活率；另一方面，SVF具有免疫调节的作用，能够降低炎症反应，为移植的脂肪存活提供了一个适宜的环境为了提高脂肪干细胞的浓度，我们首先从病号仅抽取5ml组织，经过分离、纯化、 及体外培养扩增得到高数量的脂肪干细胞，最后添加到新制备的SVF成分中，与脂肪组织混勻用于隆胸移植本发明的更优方案为步骤(1)中，微创抽取脂肪组织的量为5ml步骤(3)中，脂肪组织以500G的速度离心5min步骤(4)中，脂肪组织以300G的速度离心5min本发明通过预先抽取微量的脂肪组织并获得大量的脂肪干细胞，这样就可以减少脂肪移植时用于制备SVF脂肪组织的用量，以弥补大量女性因体重指数偏低(目前小于17 的无法自体脂肪隆胸)而无法获得大量的脂肪组织来制备SVF而不能进行自体脂肪隆胸的弊端