专利名称：生物型脊髓支架的制作方法脊髓损伤常引起瘫痪，至今未找到有效治疗方法。以往一直认为脊髓神经是不能再生的，脊髓损伤是不治之症。近年来，对中枢神经及神经干细胞的深入研究发现，包括脊髓神经在内的中枢神经是可以再生的，关键是要有适于神经组织再生和重建的临时性基质和良好的微环境。这里所谓临时性基质就是供神经干细胞以及其分化形成的神经元细胞及神经胶质细胞分裂、增殖、迁移的温床，它可被降解吸收，为神经细胞提供养分。所谓优良微环境是指有利于诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞及胶质细胞和促进这些细胞分裂、增殖和迁移的物质环境和新组织生长的空间。组织工程习惯将这些可作为组织重建的临时性基质和微环境，简单化地称为“支架”，虽不很确切，胜在简单。但现有技术未能提供这样的支架。
本实用新型的目的是提供一种生物相容性好、可被降解吸收的生物型脊髓支架。本实用新型的技术解决方案是生物型脊髓支架，由心体、包裹在心体外的半透膜、固定在半透膜外的螺旋骨架以及包裹在螺旋骨架外的外膜组成，其中心体、半透膜及外膜分别由通过非醛类固定剂交联固定和活泼试剂及强氢键试剂去除抗原的动物脊髓、动物膜组织制成。动物组织易被微生物降解或分解，需用固定剂使之交联固定，传统上使用戊二醛作固定剂，有残留毒性，我们选用非醛类固定剂，如环氧化物、二酰二胺、二异氰酸酯、聚乙二醇或碳化二亚胺，就没有这一缺点，以环氧化物为例，当应用环氧化物来代替醛类作固定试剂时，由于环氧化物很不稳定，易发生开环交联反应，控制反应条件可以做到使其与胶原蛋白的交联产物很稳定，不轻易降解，只有在再生组织生长、增殖需对其蚕蚀时，分泌出激肽释放酶、纤溶酶、糖皮质激素协同胶原酶作用下才能将其缓慢分解为多肽及氨基酸，并被吸收利用。这样一种被动式降解与组织的再生是同步的，是最有利于组织的再生性修复的，而且无醛类的残留毒性；根据现代免疫学理论，动物组织的抗原性主要是由蛋白质中某些特殊位置的活性基团及特异构象引起的，这些活性基团主要是-OH，-NH2，-SH等，而特异构象则主要是由于蛋白质分子螺旋链的某些持殊氢键引起，在处理动物组织时，用一种或多种易与这些基团起反应的活泼试剂(如酸酐、酰氯、酰胺、环氧化物等)与这些基团结合，将其封闭起来，去除其抗原，同时，还应用强氢键试剂(如胍类化合物)，置换引起特异构象的氢键，改变其构象，从多方面有效的消除其抗原性。本实用新型中的心体是用去抗原的异种脊髓基质制成，无抗原，生物相容性好，可以作为神经干细胞以及神经元细胞、胶质细胞寄居、分裂、增殖及迁移的优良基质和载体。半透膜和外膜是用猪、牛、羊、猴等动物的膜组织经系列生化处理得到的，具有脊髓软、硬脊膜相似的组成和特性，生物相容性好。螺旋骨架可以由半透膜或外膜裁成细长片条，在半透膜外螺旋盘绕粘贴多层而形成，除对支架起到支撑作用外，所形成的螺旋凹坑，还起到临时性脑脊液通道腔的作用，类似于脊髓蛛网膜下腔的作用。作为一种优化方案，所述心体、半透膜及外膜分别由通过偶联剂偶合多肽及糖胺聚糖类活性组分的动物脊髓、动物膜组织制成，使之具有粘附生长因子，促进组织生长的功能。对于半透膜及外膜，考虑到一些膜组织，力学强度还不能满足应用要求，而且在生化处理中常会引起力学性能的损失，所以还设置了对胶原蛋白分子进行接枝改性的处理步骤，如在胶原蛋白分子中适当接枝聚氨酯、聚酰胺、聚酯、聚乳酸、聚羟乙酸等链段，来提高基材的力学强度和韧性。接枝的原料是用它们的预聚体，方法可以选用缩合、引发、辐射等高聚物接枝方法。所述的多肽之一是由16个赖氨酸(K16)、甘氨酸(G)、精氨酸(R)、天冬氨酸(D)、丝氨酸(S)、脯氨酸(P)及半胱氨酸(C)缩聚而成的，所述的糖胺聚糖是透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、肝素、硫酸乙酰肝素或硫酸角质素。这些多肽或糖胺聚糖对生长因子有广谱粘附和富集作用或激发未分化细胞定向分化，具有诱导机体组织的再生性修复的功能。所述的半透膜为动物的肠膜或者其它经过机械薄化处理的动物膜组织；所述外膜为动物心包膜或膈膜或脂肪网膜或胸膜或腹膜；所述的螺旋骨架为半透膜或外膜裁成的长片条螺旋粘贴而成。
所述心体、半透膜和外膜交联固定所用的非醛类固定剂为易与蛋白质分子发生交联反应的试剂，如环氧化物、二酰二胺、二异氰酸酯、聚乙二醇或碳化二亚胺试剂中的一种或两种，这里的环氧化物可以是单环氧化物 也可以是双环氧化物 这里R＝CnH2n+1-，n＝0-10，还可以是低聚环氧化物如聚环氧丙烷。
所述心体、半透膜和外膜去除抗原所用的活泼试剂可以是小分子有机酸酐、酰氯、酰胺或环氧化物，强氢键试剂为胍类化合物。
所述心体、半透膜和外膜偶合多肽或糖胺聚糖活性组分所用的偶联剂为二酰二胺、二酸酐、碳化二亚胺、双环氧化物或其它能与-NH2，-OH，-COOH等起缩合反应的双官能团试剂。
本实用新型的优点是仿照人体脊髓的组成和结构设计，心体类似于人脊髓的髓质(灰质和白质)，它是用去抗原异种脊髓基质，引入可粘附神经干细胞及有关生长因子的活性组分制成，可征集神经干细胞并诱导其定向分化，促进脊髓组织的再生。半透膜类似于脊髓的软脊膜，可透过脊液中的营养物质。螺旋骨架除起支撑作用外，所形成的螺旋凹坑起到脑脊液流动腔的作用。外膜类似于硬脊膜。所有的构造都是天然生物材料制成，生物相容性好，无免疫原性，可被降解吸收，可诱导组织再生。


附图1为本实用新型实施例的结构示意图；1、心体，2、半透膜，3、螺旋骨架，4、硬脊膜。

实施例如图1所示，生物型脊髓支架，由心体1、包裹在心体外的半透膜2、固定在半透膜2上的螺旋骨架3以及包裹在螺旋骨架3上的外膜4组成，其中心体1、半透膜2及外膜4分别由通过非醛类固定剂交联固定、活泼试剂和强氢键试剂去除抗原以及通过偶联剂偶联特定多肽或糖胺聚糖活性组分的处理步骤的动物脊髓、动物膜组织制成，对于半透膜及外膜由于对强度要求高，还增设了一个增韧改性的步骤。
具体制备步骤如下一、心体材料的制备取新鲜的猪脊髓，小心剪除硬脊膜、蛛网膜及软脊膜，取髓质，小心剔除微血管，放入0.2～2％的NaOH溶液中浸泡2小时，取出，用水漂洗三次。取出沥干水分，用有机溶剂抽取其中脂肪及脂溶性杂质。取出，除去溶剂后，用碳链环氧化物与之进行交联固定反应。取出，洗净，冷冻干燥，用乙酸酐或丁酸酐与之反应，封闭抗原基因；再用盐酸胍的Tris缓冲溶液处理，改变引起抗原的特异构象。取出，洗净，用碳化二亚胺(R-N＝C＝N-R)作偶联剂将由16个赖氨酸(K16)、甘氨酸(G)、精氨酸(R)、天冬氨酸(D)、丝氨酸(S)、脯氨酸(P)及半胱氨酸(C)缩聚而成的多肽或糖胺聚糖偶合到髓质的胶原分子上，洗净，即得心体材料，置于生理盐水中低温保存备用。
二、半透膜2和外膜4的制备分别取牛心包或猪心包或猪胸膜及猪肠膜，洗净，小心除去多余组织和杂质，取坚实平整的膜体，洗净，用0.1～2％浓度的KOH溶液浸泡处理2小时。取出，用水漂洗三次以上，取出沥干水分，用有机溶剂抽取其中脂肪及脂溶性杂质。取出，除去溶剂后，用碳链环氧化物与之进行交联固定反应。取出，洗净，冷冻干燥，用乙酸酐或丁酸酐与之反应，封闭抗原基因；再用盐酸胍的Tris缓冲溶液处理，改变引起抗原的特异构象。取出洗净，冷冻干燥，用P2O5作脱水缩合剂将聚羟基乙酸的预聚体接枝到膜材的胶原分子上。用碳化二亚胺(R-N＝C＝N-R)作偶联剂将由16个赖氨酸(K16)、甘氨酸(G)、精氨酸(R)、天冬氨酸(D)、丝氨酸(S)、脯氨酸(P)及半胱氨酸(C)缩聚而成的多肽或透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、肝素、硫酸乙酰肝素或硫酸角质素偶合到上述膜材的胶原分子上，洗净，置于生理盐水中低温保存备用。半透膜2选用最薄渗透性最好的猪肠膜，外膜4选用较厚的猪、牛心包或猪隔膜。
三、生物型脊髓支架的制备在设定直径的圆棒模具上，用医用胶将相应尺寸的半透膜2边边粘合形成圆管状体。另取上述任一膜裁成规定宽度的长片条，用医用胶将长片条按一定间距螺旋盘绕粘贴到软脊膜的管壁上，绕粘数层，形成有一定支撑力的螺旋骨架3，再用医用胶将外膜4粘合到螺旋骨架3的凸梁上，自身再边边粘合成圆管体。脱出圆棒模具，小心将制好的心体材料充填到管心的圆柱腔内形成心体1，必要时加少量医用蛋白胶作赋形剂。充填密度不宜太紧，也不宜太松，以适中为好，填好后冷冻干燥以定型，至此，生物型脊髓支架便整体制成。用生理盐水作保存液密封包装，用钴-60辐射灭菌，即得到产品。