专利名称：用作植物雌激素的中药组合物及其用途的制作方法用作植物雌激素的中药组合物及其用途技术领域本发明属于中药领域，涉及一种具有植物雌激素样作用的中药组合物，特别涉及 一种包含杜仲、补骨脂、丹参和任选的知母的中药组合物。本发明还涉及所述中药组合物在 制备用于治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或症状的药物中的用途。植物雌激素是一类具有雌激素特性的植物来源的化合物，可以直接与雌激素受体 相互作用，其结合的能力较弱，仅是雌激素的1/500 1/1000，但在激素替代疗法中副作用 小。已有的研究表明，植物雌激素在女性更年期综合征以及绝经后妇女的冠状动脉性心脏 病、动脉粥样硬化、血管内皮损伤、高血压和骨质疏松症等疾病或症状的治疗或预防中显示 出令人鼓舞的结果。青娥丸配伍应用首载于宋代《和剂局方》，由补骨脂、杜仲、核桃仁和大蒜组成。以 古方为基础，通过现代制药工艺制成的中成药青娥丸，已经收录于《中国药典》。临床报道， 青娥丸方治疗慢性腰肌劳损、骨质增生、骨质疏松症、冠心病及黄褐斑等中医肾阳虚证者， 取得一定疗效。有关青娥丸的研究较多，沈阳药科大学熊志立等在文章《青娥丸提取物对成 骨样细胞UMR106增殖分化作用的研究》中，证明青娥丸提取物对成骨样细胞UMR106具有增 殖分化作用，并筛选出青娥丸乙酸乙酯萃取部位是防治骨质疏松的有效部位。《青娥丸对骨 质疏松症(OP)动物模型的骨代谢调节作用与作用机制研究》证明青娥丸治疗OP模型动物 的骨质疏松效果显著，具有强的植物雌激素作用。不同的文献中也证明该方单味药补骨脂 或杜仲具有一定的雌激素活性，中国专利申请200810043844. 9比较了青娥方原方和拆方 的雌激素作用，证实青娥丸的主要药效组成是补骨脂和杜仲的联合使用，加入核桃仁和大 蒜后的效果更优。现有技术提示，青娥方可以用于防治雌激素缺乏引起的更年期综合征。尽管如此，仍然需要提供新的具有植物雌激素样作用的安全、有效的中药制剂，以 满足临床上治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的需求。发明内容本发明人通过大量的实验令人意外地发现，以补骨脂和杜仲两味中药为基础，增 加丹参，再任选增加知母制成的药组合物可以有效地治疗或预防受试者中与体内雌激素水 平失调有关的疾病或改善其症状。此外还发现，补骨脂和杜仲两味中药配伍丹参能显著地 降低补骨脂、杜仲单独使用时的副作用和风险。基于上述发现，本发明人完成本发明。一方面，本发明提供一种中药组合物，其包含有效治疗或预防受试者中与体内雌 激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂、杜仲和丹参，以及任选的药学上可 接受的辅助物质，其中补骨脂、杜仲和丹参的重量比为1 0.2 10 0.2 10。在该方面的一个实施方案中，本发明提供一种中药组合物，其活性成分由有效 治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂、杜 仲和丹参组成，任选包含药学上可接受的辅助物质，其中补骨脂、杜仲和丹参的重量比为1 0. 2 10 0. 2 10。在该方面的另一个实施方案中，补骨脂、杜仲和丹参的重量比为1 0.5 4 0. 5 4。
在该方面的一个具体实施方案中，补骨脂、杜仲和丹参的重量比为1 2 2、 1 4 2 或 1 0. 5 2。
在该方面的一个可替代方面，本发明提供一种中药组合物，其包含有效治疗或预 防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂乙醇提取物、杜 仲乙醇提取物和丹参乙醇提取物，以及任选的药学上可接受的辅助物质，其中所述补骨脂 乙醇提取物、杜仲乙醇提取物和丹参乙醇提取物的重量比为1 0.2 5 1 5。
在该可替代方面的一个实施方案中，本发明提供一种中药组合物，其活性成分由 有效治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂 乙醇提取物、杜仲乙醇提取物和丹参乙醇提取物组成，任选包含药学上可接受的辅助物质， 其中所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物和丹参乙醇提取物的重量比为1 0.2 5 1 5。
在该可替代方面的另一个实施方案中，所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物 和丹参乙醇提取物分别是通过如下方法制备得到的
向补骨脂生药中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液减压回收乙醇至尽，用氢 氧化钠水溶液溶解得到的残余物，然后向得到的溶液中加入盐酸水溶液，将其PH值调节至 中性，收集沉淀物并干燥，得到补骨脂乙醇提取物；
将炮制杜仲过粉碎机，向得到的粉末中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液中 减压回收乙醇至尽，并将残余物真空干燥，得到杜仲乙醇提取物；
将丹参过粉碎机，向得到的粉末中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液中减压 回收乙醇至尽，并将残余物真空干燥，得到丹参乙醇提取物。
在该可替代方面的另一个实施方案中，所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物 和丹参乙醇提取物的重量比为1 0.5 2 2 4。
在该可替代方面的一个具体实施方案中，所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取 物和丹参乙醇提取物的重量比为1 1 4、1 0. 25 4或1 2 4。
另一方面，本发明提供一种中药组合物，其包含有效治疗或预防受试者中与体内 雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂、杜仲、丹参和知母，其中补骨脂、 杜仲、丹参和知母的重量比为1 0.2 10 0.2 10 0.2 5。
在该方面的一个实施方案中，本发明提供一种中药组合物，其活性成分由有效治 疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂、杜仲、 丹参和知母组成，任选包含药学上可接受的辅助物质，其中补骨脂、杜仲、丹参和知母的重 量比为 1 0.2 10 0.2 10 0.2 5。
在该方面的一个实施方案中，补骨脂、杜仲、丹参和知母的重量比为1 0.5 4 0. 5 4 0. 5 4。
在该方面的一个具体实施方案中，补骨脂、杜仲、丹参和知母的重量比为 1 2 2 1、1 4 2 0. 5 或 1 0. 5 2 2。
在该方面的一个可替代方面，本发明提供一种中药组合物，其包含有效治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂乙醇提取物、杜 仲乙醇提取物、丹参乙醇提取物和知母乙醇提取物，以及任选的药学上可接受的辅助物质， 其中补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、丹参乙醇提取物和知母乙醇提取物的重量比为 1 0. 2 5 1 5 0. 5 5。
在该可替代方面的一个实施方案中，本发明提供一种中药组合物，其活性成分由 有效治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的量的补骨脂 乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、丹参乙醇提取物和知母乙醇提取物组成，任选包含药学上可 接受的辅助物质，其中补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、丹参乙醇提取物和知母乙醇提 取物的重量比为1 0.2 5 1 5 0.5 5。
在该可替代方面的另一个实施方案中，所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、 丹参乙醇提取物和知母乙醇提取物分别是通过如下方法制备得到的
向补骨脂生药中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液减压回收乙醇至尽，用氢 氧化钠水溶液溶解得到的残余物，然后向得到的溶液中加入盐酸水溶液，将其PH值调节至 中性，收集沉淀物并干燥，得到补骨脂乙醇提取物；
将炮制杜仲过粉碎机，向得到的粉末中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液中 减压回收乙醇至尽，并将残余物真空干燥，得到杜仲乙醇提取物；
将丹参过粉碎机，向得到的粉末中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液中减压 回收乙醇至尽，并将残余物真空干燥，得到丹参乙醇提取物；
向知母生药中加入数倍量的乙醇，回流提取，从提取液中减压回收乙醇至尽，将残 余物真空干燥，得到知母乙醇提取物。
在该可替代方面的另一个实施方案中，所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、 丹参乙醇提取物和知母乙醇提取物的重量比为1 0.5 4 3 5 1 2。
在该可替代方面的一个具体实施方案中，所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取 物、丹参乙醇提取物和知母乙醇提取物的重量比为1 1 4 1或1 0. 25 4 2。
根据本发明的中药组合物，其中所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、丹参乙 醇提取物或知母乙醇提取物可以替代为用它们各自用水、乙醇或水-乙醇混合物作为溶剂 提取得到的提取物。所述补骨脂乙醇提取物、杜仲乙醇提取物、丹参乙醇提取物和知母乙醇 提取物也可以替换为补骨脂、杜仲、丹参和知母共同提取所得的提取物。
在本发明的中药组合物中，所述乙醇提取物是用50 98%乙醇作为溶剂经提取 得到的提取物，例如是用55 98 %、60 98 %、65 98 %、70 98 %、70 95 %、约70 %、 约75%、约80%、约90%、或约95%的乙醇作为溶剂经提取得到的提取物。
本发明中使用的补骨脂乙醇提取物含有较少的补骨脂素和异补骨脂素以及能水 解产生补骨脂素和异补骨脂素的补骨脂苷和异补骨脂苷，富集补骨脂酚和补骨脂黄酮类成 分。
本发明的中药组合物具有植物雌激素样作用，因此可以用于治疗或预防受试者中 与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状，或可用于制备用于治疗或预防受试者中 与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的药物。
再一方面，本发明提供上述任意一项实施方案中所述的中药组合物在制备用于治 疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的药物中的用途。
在该方面的一个可替代方面，本发明提供上述任意一项实施方案的中药组合物用 作具有植物雌激素样作用的药物的用途。
在该方面的一个可替代方面，本发明提供一种治疗或预防受试者中与体内雌激素 水平失调有关的疾病或改善其症状的方法，该方法包括将有效量的上述任意一项实施方案 的中药组合物给予该受试者。
在该方面及其可替代方面的一个实施方案中，所述与体内雌激素水平失调有关的 疾病或症状选自更年期综合征以及绝经后妇女的冠状动脉性心脏病、动脉粥样硬化、血管 内皮损伤、高血压和骨质疏松症。
在该方面及其可替代方面的另一个实施方案中，所述与体内雌激素水平失调有关 的疾病或症状选自更年期综合征(例如潮热、心慌等)、心血管疾病和骨质疏松症。
下面对本发明的各个方面和实施方案作进一步的描述。
通过引用将本说明书中所引用文献的全部内容并入本说明书，并且如有科技术语 在这些文献所表达的含义与本发明中的含义不一致时，以本发明中的含义为准。此外，本发 明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希 望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一 致的，以本申请中所表述的含义为准。
本发明中所述的术语“补骨脂”、“杜仲”、“丹参”和“知母”应分别符合2005年版《中华人民共和国药典》相应项下的规定。
本发明中所述的术语“植物雌激素样作用”是指类似于雌激素所具有的生理学功 能的作用；所述雌激素在用植物修饰(即植物雌激素)时，是指一种来源于植物(例如从植 物中提取或者植物中含有并通过全合成或半合成的化学合成过程获得的)的化合物，并且 该化合物具有类似于雌激素所具有的生理学功能。
本发明中所述的术语“有效量”是指该术语所对应的组分在受试者中实现治疗、预 防、减轻和/或缓解本发明中所述疾病或病症的剂量。
本发明中所述的术语“中药组合物”是指可用于在受试者中实现治疗、预防、减轻 和/或缓解本申请所述疾病、病症、症状的物质。
本发明中所述的术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明中药组合物和提 取物以治疗、预防、减轻和/或缓解本申请所述疾病、病症、症状的动物，特别是哺乳动物， 例如人、狗、猴、牛、马等。
本发明中所述的术语“疾病或症状”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态 与本申请所述疾病或症状有关。
本发明中所述的符号“ ％ ”，如未特别指明，对于总物料是固体时，一般是指重量/ 重量的百分比；对于总物料是液体时，一般是指重量/体积的百分比。当然，对于总物料是 液体并且溶质是液体时，表征该液态溶质的百分比一般是指体积/体积的百分比。
本发明人通过实验证实，本发明的中药组合物能有效调节去势雌性大鼠的雌激素 缺乏效应，有效缓解围绝经期综合征的各种症状；显著降低TC，LDL，并且能显著升高HDL， 具有调节脂代谢功能；促进去势大鼠整体动物雌二醇的分泌，子宫增重明显，子宫系数增 加。这些实验结果表明，本发明的中药组合物可以用于绝经后妇女心血管系统保护。本发 明人通过实验还证实，本发明的中药组合物可以明显提高骨密度。因此，本发明的中药组合物可以用于治疗更年期综合征如潮热、心慌等，以及用于更年期妇女雌激素缺乏造成的心 血管疾病的风险以及骨质疏松等病症。

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限 于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以 对本发明进行各种变化和修饰。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本 领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。
在下文中，提及“青娥方”时，它是指由补骨脂和杜仲两味中药或其提取物组成的组合物；相应地，提及“1 娥方加丹参”时，它是指由补骨脂、杜仲和丹参三味中药或其提取物组成的组合物；提及“青娥方加丹参加知母”时，它是指由补骨脂、杜仲、丹参和知母四味中药或其提取物组成的组合物。
实施例1A、本发明中药组合物的制备
处方
补骨脂IOOg
杜仲200g
丹参200g
知母IOOg
将以上四味药分别粉碎，混合，每IOOg粉末用炼蜜50g加适量水泛丸，干燥，制成大蜜丸。每丸含有相当于补骨脂生药1. 0g。
实施例1B、本发明中药组合物的制备
补骨脂IOOg
杜仲20g
丹参20g
知母500g
将以上四味药分别粉碎，混合，每IOOg粉末用炼蜜50g加适量水泛丸，干燥，制成大蜜丸。每丸含有相当于补骨脂生药1. 0g。
实施例1C、本发明中药组合物的制备
补骨脂IOOg
杜仲IOOOg
丹参20g
知母20g
将以上四味药分别粉碎，混合，每IOOg粉末用炼蜜50g加适量水泛丸，干燥，制成大蜜丸。每丸含有相当于补骨脂生药1. 0g。
实施例1D、本发明中药组合物的制备
补骨脂IOOg
杜仲20g
丹参IOOOg
知母20g
将以上四味药分别粉碎，混合，每IOOg粉末用炼蜜50g加适量水泛丸，干燥，制成 大蜜丸。每丸含有相当于补骨脂生药l.Og。
实施例1E、本发明中药组合物的制备
补骨脂IOOg
杜仲300g
丹参30g
知母IOOg
将以上四味药分别粉碎，混合，每IOOg粉末用炼蜜50g加适量水泛丸，干燥，制成 大蜜丸。每丸含有相当于补骨脂生药l.Og。
实施例2A、本发明提取物的制备
步骤1、补骨脂提取物的制备
补骨脂500g用95%乙醇回流提取三次，每次10倍量池。合并三次提取液，减压 回收乙醇至尽，用4%氢氧化钠水溶液溶解，加入10%盐酸水溶液调节pH值到中性，取沉淀 干燥得补骨脂提取物102g。
步骤2、杜仲提取物的制备
炮制杜仲lkg，过粉碎机(不加筛网)，加入10倍量(IOL) 70%乙醇回流提取两次， 每次池，合并提取液，回收乙醇至尽，真空干燥得杜仲提取物104g。
步骤3、丹参提取物的制备
丹参lkg，过粉碎机(不加筛网)，加入10倍量(IOL) 70%乙醇回流提取两次，每次 池，合并提取液，回收乙醇至尽，真空干燥得丹参提取物421g。
步骤4、知母提取物的制备
知母500g，加入10倍量(5L)70%醇回流提取两次，每次池，合并提取液，回收乙醇 至尽，真空干燥得知母提取物108g。
步骤5、本发明中药组合物的制备
将以上步骤1-4分别得到的单组分提取物以1. 02g 1. 04g 4. 21g 1. 08g的 比例混合均勻，得到四种生药比为1 :2:2: 1所得的提取物。
实施例2B、本发明中药组合物的制备
将实施例2A步骤1-4分别得到的单组分提取物以 1.02g 2. 08g 4. 21g 0. 54g的比例混合均勻，得到四种生药比为1 4 2 0. 5所 得的提取物。
实施例2C、本发明中药组合物的制备
将实施例2A步骤1-4分别得到的单组分提取物以1.02g 1. 04g 4. 21g Og 的比例混合均勻，得到四种生药比为1 :2:2: 0所得的提取物。
实施例2D、本发明中药组合物的制备
将实施例2A步骤1-4分别得到的单组分提取物以 1.02g 0. 26g 4. 21g 2. 16g的比例混合均勻，得到四种生药比为1 0. 5 2 2所 得的提取物。
实施例3 本发明中药组合物的制剂
颗粒剂的制备
处方组成
补骨脂50g 杜仲IOOg
丹参IOOg 知母 50g
分别取实施例2A中步骤1-4所得的提取物。称取丹参提取物21. 05g、杜仲提取物 10. 4g、知母提取物10. 8g混合均勻，加150g糖粉混合均勻，过200目筛备用；称取补骨脂提 取物10.2g溶于80%乙醇中，以补骨脂提取物溶液对混合药粉进行软材，80目筛制粒。干 燥后过20目筛整粒，装铝塑袋，每袋包含相当于Ig的补骨脂生药。得到呈颗粒剂剂型的本 发明中药组合物，在本发明中可以称为加味青娥颗粒。
实施例4、本发明中药组合物的药效试骑
观察了本发明中药组合物对雌激素缺乏大鼠(子宫切除)的雌激素作用。
4. 1选择实验动物和饲养条件、随机分组和试药
实验动物选择52只健康的6月龄经产雌性SPF级Sprague-Dawley大鼠(SD)， 平均体重270 士 50g。
饲养地点天津中医药大学动物中心。
饲养条件大鼠每笼4只，恒温02 士 2) °C、恒湿(55%士 5% )、标准维持鼠料自 由饮用净化水，自由取食，每周称食重，计算平均每只大鼠每周食用量。
分组大鼠熟悉环境2周后称重，按体重排序，应用EXCELL生成随机数，进行随机 分组。共分6组，每组8 9。具体分组如下
Sham组假手术组；
OVX组去卵巢组；
BDL组去卵巢+青娥方(由补骨脂杜仲=1 2组成)1. 75克生药/千克体 重组(即0. 121克实施例2A步骤1补骨脂提取物+0. 121克实施例2A步骤2杜仲提取物 /千克体重大鼠)；
BDH组去卵巢+青娥方(由补骨脂杜仲=1 2组成)3. 5克生药/千克体重 组(即0. 243克实施例2A步骤1补骨脂提取物+0. 243克实施例2A步骤2杜仲提取物/ 千克体重大鼠)；
BDD组去卵巢+本发明中药组合物(0.243克实施例2A步骤1补骨脂提取物 +0. 243克实施例2A步骤2杜仲提取物+0. 491克实施例2A步骤3丹参提取物/千克体重 大鼠)；
BDDS组去卵巢+本发明中药组合物(0.243克实施例2A步骤1补骨脂提取物 +0. 243克实施例2A步骤2杜仲提取物+0. 491克实施例2A步骤3丹参提取物+0. 126实施 例2A步骤4知母提取物/千克体重大鼠)。
4. 2建立动物模型
实验所采用的6月龄的SD大鼠，于卵巢切除手术后7天开始进行阴道涂片检查。 去势手术前阴道涂片显示动情周期存在，术后仅能观察到动情后期和动情间期的白细胞， 动情周期消失，标志OVX手术成功。
4. 3药物干预
4. 3. 1药物干预的具体形式
表1药物干预分组


本发明涉及用作植物雌激素的中药组合物及其用途。具体地说，本发明涉及一种中药组合物，其包含补骨脂、杜仲、丹参和任选的知母，或其乙醇提取物，以及任选的药学上可接受的辅助物质。本发明还涉及本发明的中药组合物在制备具有植物雌激素样作用的药物中的用途，或者在制备用于治疗或预防受试者中与体内雌激素水平失调有关的疾病或改善其症状的药物中的用途。