专利名称：用于鉴定肠膜明串珠菌的引物及其应用的制作方法肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)是乳酸菌中的明串珠菌属的重要菌种，一般存在于植物体表，常用于发酵乳制品、青贮、泡菜和果酒中。它能够降解葡苷聚糖为寡糖，发酵糖类产生多种酸和醇，具有高产酸能力、抗氧化能力和拮抗致病菌等特性，已被广泛应用于医药、食品和生化制剂等行业，还将有望成为新型微生态制剂。目前国内分离鉴定肠膜明串珠菌多采用平面培养法、生理生化试验等传统检验方法，上述方法存在检出周期长、自动化程度低、准确性差等缺点。随着分子生物学的发展， 16S rDNA序列分析逐渐被用于乳酸菌的分离鉴定。测序前PCR扩增是以碱裂解等方法抽提的DNA为模板，成功率高，然而显得较为繁琐。从大量样品中定向筛选某种菌时，16S rDNA 序列测序分析成本也较高。
本发明的目的是提供一种用于鉴定肠膜明串珠菌的引物，该引物能够特异性扩增肠膜明串珠菌16S rDNA的部分序列，扩增特异性高，时间短，能够准确、快速鉴定肠膜明串珠菌。本发明的另一目的是提供该引物在鉴定肠膜明串珠菌中的应用，该引物用于鉴定肠膜明串珠菌过程简单，鉴定方法稳定、高效。同时，采用菌落PCR方法，将样品跳过DNA抽提这一步，而直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，不仅缩短了检测时间，也降低了检测成本。本发明的目的是通过如下技术方案实现的本发明提供一种用于鉴定肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)的引物， 其特征在于正向引物具有序列表中SEQ ID No :1所述的碱基序列，反向引物具有序列表中SEQ ID No :2所述的碱基序列。本发明所述的引物序列可用于鉴定肠膜明串珠菌，鉴定过程如下(1)使用所述的引物对待测菌株进行菌落PCR扩增；(2)利用电泳检测PCR产物，在430bp处产生特异性扩增条带的菌株，则判断为肠膜明串珠菌。其中，制备待测菌株的模板的过程如下用灭菌的牙签或枪头挑取微量待测菌株的单菌落至0. 5mL的离心管中，PCR扩增94°C变性时，菌体热解后暴露的DNA即为模板。其中，菌落PCR扩增程序如下95°C预变性5min，94°C变性30s，55°C退火30s， 72°C延伸30s，进行30次循环，最后72°C延伸IOmin。其中，所述的琼脂糖凝胶为质量体积比为2%的琼脂糖凝胶电泳，并用溴化乙锭染色。其中，本发明制备待测菌株模板的过程中涉及的肠膜明串珠菌仅为实验材料，本发明不限定特定菌株，可为现在国内外公开或可购买的任何一株肠膜明串珠菌，也可为任意的自行分离材料，无论任何一株肠膜明串珠菌均不影响本发明的实施。本发明的引物可为现在任何一株肠膜明串珠菌进行鉴定，与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下优点本发明的用于鉴定肠膜明串珠菌的引物序列能够特异性扩增肠膜明串珠菌16S rDNA的部分序列，扩增特异性高，能够准确、快速鉴定肠膜明串珠菌。该引物用于鉴定肠膜明串珠菌的菌落PCR过程简单，鉴定方法稳定、高效，不仅缩短了检测时间，而且降低了检测成本(表1)。本发明为肠膜明串珠菌种质资源鉴定提供了检测方法，进而为筛选肠膜明串珠菌的优良菌株奠定了基础。表1本发明的检测方法与传统检测方法的比较本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于鉴定肠膜明串珠菌的引物及其应用。本发明的用于鉴定肠膜明串珠菌的引物能够特异性扩增肠膜明串珠菌16S rDNA的部分序列，扩增特异性高，能够准确、快速鉴定肠膜明串珠菌。该引物用于鉴定肠膜明串珠菌过程简单，鉴定方法稳定、高效，不仅缩短了检测时间，而且降低了检测成本。本发明为肠膜明串珠菌种质资源鉴定提供了检测方法，进而为筛选肠膜明串珠菌的优良菌株奠定了基础。