专利名称：用于治疗多发性硬化症的组合物及方法多发性硬化症(简称MS)是自身免疫性情形，其中，免疫系统袭击中枢神经系统， 导致脱髓鞘。经常在青年中发生发病情况，并且在女性中更为常见。其流行率在每十万人中有大约2例与150例之间。MS影响大脑和脊髓中的神经细胞的彼此通讯的能力。神经细胞通过沿包围在叫作髓磷脂的隔离物质中的被称作轴突的长纤维发送叫作动作电位的电信号来通讯。在MS中， 机体的自身免疫系统袭击并损害髓磷脂。当髓磷脂损失时，轴突不能再有效地传导信号。多发性硬化症的名称是指大脑和脊髓的主要包括髓磷脂的白质中的疤痕(硬化-更多地称为斑块或病变)。尽管已经了解很多有关疾病进程的机制，但是疾病的成因仍然未知。理论包括遗传和/或感染。也发现了不同的环境风险因子。几乎任何神经症状可出现疾病，并往往发展为身体残疾和认知障碍。MS有若干形式，有着发生为不连续发作(复发形式)或随时间推移的缓慢累积(进展形式)的新的症状。在发作之间，症状可完全消失，但是通常发生永久的神经问题，尤其是疾病的恶化。MS 往往在对其他原因进行的神经检测过程中被意外地发现。没有已知的治愈MS的情形。治疗试图在发作之后恢复功能、防止新的发作并防止残疾。MS药物可以产生副作用或耐受性很差，许多患者寻求另类疗法，尽管这缺乏科学研究的支持。预后是难以预期的；这取决于疾病的亚型、每个患者的疾病特点、初期症状以及随着时间推移患者所经历的残疾程度。患有MS的人的预期寿命，至少前几年，几乎与未受影响的人是相同的。几乎40% 的患者达到生命的第七个十年。然而，患有MS的人的死亡的一半与疾病的影响直接相关， 而15%以上是由于自杀，比例远高于健康人群。尽管大多数患者在死亡之前失去行走的能力，但是90%的患者在患病的第10年仍能够独立行走，75%的患者在患病的第15年仍能独立行走。MS导致髓磷脂变薄或完全损失，并且随着疾病的发展导致轴突或神经元的延伸的切割(横断)。当髓磷脂损失时，神经元不再能有效地传导电信号。髓鞘再生的修复过程发生在疾病的早期阶段，但少突胶质细胞不能完全重建细胞的髓鞘。反复发作导致接下来较少的有效的髓鞘再生，直到疤痕样斑块围绕受损的轴突积聚。除了髓鞘再生，疾病的其他病理特点是由T细胞引起的炎症。很好地建立了宽范围炎症介质在进展型多发性硬化症中的中心参与。这些因子扮演着包括促进T细胞迁移到中枢神经系统(CNQ、破坏血脑屏障以及在疾病早期阶段加速髓磷脂破坏和轴突变性的多种角色。晚期阶段与暴露在脱髓鞘的斑块中的裸露轴突导致的主要神经轴突损伤有关。治疗尽管没有已知的治愈多发性硬化症的情形，但是已经证明一些疗法是有益的。疗法的首要目的在于在发作之后恢复功能、防止新的发作并防止残疾。如伴随任何药物治疗的，用在治疗MS中的药物具有多种副作用。某些患者追求另类治疗，尽管缺乏支持的、可比较的和可重复的科学研究。目前的治疗策略包括目的在于减少炎症期的免疫调节策略和免疫抑制策略。在对症攻击中，高剂量静脉注射诸如甲泼尼龙的皮质类固醇激素对于急性复发是常规疗法。这种治疗的目的在于尽早结束攻击并给患者留下较少的持续损害。虽然一般在短期内缓解症状有效，但是皮质类固醇激素治疗对于长期的恢复不具有显著的效果。潜在的副作用包括骨质疏松症和记忆力下降，后者是可逆的。疾病改善治疗昂贵且这些的大多数需要频繁(每日)注射。其他的需要以1-3个月为间隔静脉输液。诸如干扰素的非特异性药剂具有有限的长期功效且耐受性不好。如2007年，不同国家的监管机构已经批准了 6种用于MS的疾病改善治疗。三种是干扰素干扰素β-la的两种制剂(商标名称Avonex、CinnoVex、ReciGen和Rebif)和干扰素β-Ib的一种制剂(美国商标名称Betaseron，在欧洲和日本是Betaferon)。第四种药物是醋酸格拉替雷(Copaxone)。第五种药物，米托蒽醌，是一种也被用在癌症化疗中的免疫抑制剂，仅在美国获准并主要用于继发性进展型MS。第六种是那他珠单抗(以Tysabri 投放市场)，是阻止免疫细胞的活动并有效地降低CNS的炎症的抗VLA-4的抗体。虽然它们的疗效不同，但是全部六种药物对于减少攻击的数量和减速进展到残疾是温和有效的，而仍然缺乏对它们的长期影响的研究。免疫调节剂(除了米托蒽醌)之间的比较表明，最有效的是那他珠单抗，无论是在降低复发率还是制止残疾进展方面；其还被证明可以降低MS 的严重性。米托蒽醌可能是它们中最有效的，但是由于其用途受到严重的心脏毒性的限制， 所以一般不考虑将它作为长期疗法。通过频繁注射来传送干扰素和醋酸格拉替雷，从每天一次醋酸格拉替雷到每周一次Avonex(但为肌肉内注射)而改变。通过每隔一个月静脉输液来给入那他珠单抗和米托蒽醌。进展型MS的治疗比复发缓解型MS的治疗更为困难。米托蒽醌已经表现出对具有继发性进展型和进展复发型病程的病人的积极作用。其适当有效地减慢疾病的进展并降低患者在随后短期内的复发频率。没有治疗已被证明改善原发进展型MS的病程。正在调查可以减少复发或改善功能的一些治疗。这些治疗的某些包括已经在使用的用于多发性硬化症的药物的组合，例如米托蒽醌与醋酸格拉替雷(Copaxone)的联合用药。然而，已在临床试验中大部分的治疗方法涉及用于其他疾病的药物。最近，已经强烈暗示与神经束蛋白186反应的自身抗体，一种基础神经纤维蛋白质，在神经元变性中与进展型MS相关，并代表潜在的新目标。如对于任何药物治疗来讲，这些治疗具有若干副作用。最常见的一个是对用于醋酸格拉替雷和干扰素治疗的注射部位的刺激性。随着时间的推移，由于脂肪组织的局部破坏，可发展为在注射部位的可见凹痕，已知为脂肪萎缩。干扰素产生类似流感的症状；一些使用格拉替雷的患者经历通常持续少于30分钟的表现为发热、胸闷、心悸、气短和焦虑的注射后反应。更危险的是由干扰素和米托蒽醌导致的肝损伤，后者的免疫抑制效果和心脏毒性；公认的那他珠单抗与诸如进行性多灶性白质脑病之类的危及生命的并发症的某些情况之间的联系。因此，仍然需要有改善治疗并减少副作用的可选的MS治疗方法。本发明的目的在于克服或改进现有技术疗法中的至少一个缺点或者提供有用的可替换物。
根据本发明的第一方面，提供了一种治疗多发性硬化症的方法，所述方法包括对需要包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物治疗的对象的施用。根据第二方面，本发明提供了一种治疗多发性硬化症的症状的方法，所述方法包括对需要包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物治疗的对象的施用。根据第三方面，本发明提供了一种治疗多发性硬化症的共同疗法的方法，所述方法包括对需要包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物和另外的对多发性硬化症治疗有效的活性药物治疗的对象的施用。优选的要治疗的多发性硬化症的类型是进展型多发性硬化症。进展型多发性硬化症可以是原发进展型多发性硬化症、继发进展型多发性硬化症或慢性进展型多发性硬化症。可选地，要治疗的多发性硬化症的类型可以是复发-缓解型多发性硬化症。可以通过任何已知的方法将包含交联到微粒(MIS416)的胞壁酰二肽的组合物施用到对象，但是优选地通过输液或注射来施用。施用的适合模式还可以选自肌肉注射、腹腔给入、静脉注射、皮下注射、直肠给入、鼻给入、口服，经胃给入、经肺给入等。考虑到多发性硬化症的类型、疾病的严重性及其症状以及患者的整体状况，医学从业者可以容易地确定MIS416的剂量。典型的给入剂量将在50yg至1500yg的范围并且可以以每日、每周、每两周或每月给入。合适的剂量方案的示例可以从100 μ g的起始 MIS416剂量开始，接着按例如每周或每两周50 μ g至200 μ g增大剂量，直到在患者中观察到适当的有益的治疗效果，而没有显著的副作用。该剂量可以作为单次大药丸剂量给入或随着时间输液给入，或者以分割的剂量给入。当作为共同治疗施用时，可以将MIS416组合物与例如类固醇、干扰素、抗体等的其他用在MS治疗中的活性药物一起施用。可以与MIS416组合物联合施用的用在治疗MS中的其他活性药物可以选自于例如甲基强的松龙的皮质类固醇激素、例如干扰素β-Ia和干扰素β-Ib的干扰素、醋酸格拉替雷、米托蒽醌、例如那他珠单抗的抗体或者它们的组合。可以将MIS416组合物与其他在治疗MS中有效的药物同时给入，或者可顺序给入。根据第四方面，本发明提供了用于治疗多发性硬化症的交联到微粒的胞壁酰二肽或者包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物。根据第五方面，本发明提供了用于治疗多发性硬化症的症状的交联到微粒的胞壁酰二肽或者包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物。根据第六方面，本发明提供了在多发性硬化症的治疗中用于共同治疗的交联到微粒的胞壁酰二肽或者包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物。在本发明的上下文中，将在这里对包含交联到微粒的胞壁酰二肽的组合物 (MDP-微粒)可互换地称作MIS或MIS416。图1 :MIS416诱导抗炎细胞因子。图2 在MIS416的单次静注之后MS患者中的血清Th2细胞因子的抑制。图3 长达12周的对进展型MS患者的MIS416疗法致使对于白细胞迁移重要的细胞粘附分子的血清水平下降。图4 :MIS416通过作为最有潜力的IFN α分泌免疫细胞的浆细胞样树突状细胞诱导IFNa。IFNa对于一些形式的多发性硬化症的具有临床有效性。图5 :MIS416抑制T细胞响应于非自身MHC抗原(同种异型抗原)的增殖。可以抑制T细胞增殖的试剂具有用来减少与多发性硬化症相关的自身反应T细胞激活的能力。图6 当在疾病诱导时施用时，MIS416诱导复发-缓解型多发性硬化症的小鼠模型中的发病率和发生率的延迟的机制。图7 用MIS416的预冶疗诱导改善多发性硬化症的复发-缓解型小鼠模型中的疾病自发恢复阶段的机制。图8 进展型MS患者中的长期MIS416疗法致使对白细胞的运输重要的可溶性粘附分子的升高水平持续降低。图9 重复研究(实验#2)表明，在多发性硬化症的小鼠模型中的变态反应性脑脊髓炎(EAE)诱导时施用的MIS416延缓疾病的发病率和严重程度。图10:在实验#2中，小鼠EAE模型中疾病诱导时用MIS416治疗也显著降低了最大疾病得分。图11 在小鼠EAE模型中疾病诱导时用MIS416治疗显著增大了外周血血清中存在的IFN-Y水平。图12 在小鼠EAE模型中疾病诱导时用MIS416治疗显著增大了 EAE诱导后第22 天的外周血单核细胞的绝对数量。

.MIS416可以改变复发-缓解型多发性硬化症模型(EAE)鼠的发病率和疾病的严重性。在这些研究中，已经确定了 MIS416作用的一些潜在机制。特别需要注意的是，在该鼠模型中对EAE起保护的高水平IFN-Y的MIS416介导诱导。MIS416疗法还增大循环单核细胞的绝对计数，表明它们已经被有效地调动。单核细胞是已知的抗炎症细胞因子IL-10 的细胞来源。·与其他已经批准的用于治疗MS的药物相比，MIS416无毒且无免疫原性，并且适合长期治疗。可以以任何适合的方式来使用包含MIS416的组合物。施用的示例性方法是肌肉注射、皮下注射、静脉注射、腹腔内注射、滴眼剂、通过饮水、气溶胶或喷鼻剂。当施用到动物时，可以使用任何适合的兽医配方。除了以上描述的以外，配方可以以粉末或糊剂的形式并且可被添加到饲料或以通常的方式口服。可以在诸如Remington=The Science and Practice of Pharmacy,19th Ed,1995(Mack Publishing Co. Pennsylvania, USA), British Pharmacopoeia, 2000等标准文本中找到适合的配方流程和赋形剂。医学从业者可以基于在这里提供的指导、MS的性质和严重性及其症状以及患者对治疗的反应来容易地确定合适的MDP微粒组合物的单次剂量、施用的总量和施用时间。作为示例，有用的单次剂量可以从50 μ g至1000 μ g的范围选择，并且可以根据患者的状况、 症状、耐受性和对治疗的反应而以每日、每周或每月施用。MDP微粒组合物可以以选自于大约 50μ g、75y g、100y g、125y g、150y g、175y g、200y g、225y g、250y g、275y g、300y g、 325 μ g>350μ g>375μ g、400 μ g>425μ g、450 μ g>475μ g、500 μ g>525μ g>550μ g>575μ g、 600 μ g、625 μ g、650 μ g、675 μ g、700 μ g、725 μ g、750 μ g、775 μ g、800 μ g、825 μ g、850 μ g、 875“8、90(^8、925“8、95(^8、975“8或100(^8的剂量来施用。根据需要也可以使用更大范围的剂量，例如，50yg至1500yg范围的剂量。施用的MDP微粒的总量将取决于患者的反应和对治疗的耐受性。可以根据患者的反应来每日、每周、每两个星期或每月使用组合物而达总的周期。不希望受到任何具体作用机制的限制，认为MIS416的影响至少部分地涉及短暂的炎症期、1-3级发热和与治疗剂量有关的畏寒。因此，可以预期MIS416的50yg至IOOyg 的初始剂量激发很少的反应或根本没有反应，因此可以构成在剂量递增治疗方案中的适合的初次剂量，目的在于最终引发轻微的发烧及畏寒的反应。在没有这样的反应的情况下， 可以提高剂量，例如，每周或每两个星期50 μ g，直到患者报告预期的轻度(1级至2级)发热和畏寒反应。给药间隔可根据患者的反应和对治疗的耐受性改变并可包括用较少量的 MDP微粒组合物更频繁地用药(例如，每周或每两星期用药可分为更小的剂量并且可以以每天、每周两次或其他合适的间隔来给药)。这可以根据患者的反应由医学从业者来容易地确定。本领域技术人员将清楚，MIS416治疗可形成MS治疗中的联合疗法的组分。因此， 可以连同其他已知的诸如干扰素、类固醇、抗体等的MS治疗来施用MIS416。在联合疗法治疗中，可以与其他治疗同时或者与其他治疗顺序地施用MIS416。现在将参照非限制性示例更具体地描述本发明。示例示例I-MDP微粒的准备
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从丙酸杆菌属腺体(Propionibacterium acini)中分离多个重复的胞壁酰二肽 (MDP)，这形成了该示例的MDP微粒免疫刺激剂的核心结构。优选的单体亚单位的化学构成如下所示


本发明涉及用于治疗多发性硬化症(MS)的新组合物和方法，具体涉及治疗MS的包含胞壁酰二肽微粒的免疫刺激组合物。