专利名称：一种银杏叶组合物及其制备方法银杏，为银杏科银杏属多年生落叶乔木银杏，在地球上存在约2亿多年，素有“天然活化石”之称。银杏又名公孙树、白果树等，其种子白果仁作为止咳平喘、缩小便、止带浊的中药在我国已有很久历史。其叶子银杏叶又称白果叶，味苦、甘涩、性平、小毒。银杏叶的化学成分很复杂，迄今已发现170多种化合物，主要为黄酮类、萜类、醇类、生物碱类、聚异戊二烯类、多糖等具有药理作用的活性成分，有毒成分为银杏酸。银杏叶药用最早载于《神农本草经》，早在宋朝我国民间就使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎。我国药典中记载银杏叶有润肺、平喘、止痛之功效，用于肺虚咳嗽、冠心病心绞痛寸。现代研究证实，银杏叶提取物具有以下方面的应用1、治疗冠心病心绞痛60年代我国利用银杏叶提取物“6911”治疗冠心病，银杏叶提取物对治疗冠心病心绞痛有明显的作用，可改善冠脉血流量、减少冠脉阻力、减少心肌耗氧量，可明显改善冠心病患者的临床症状，如对头晕、胸闷、心悸、气短、乏力等均有较好的改善作用；2、治疗高脂血症，银杏叶提取物对高脂血症有治疗作用，可明显降低血脂水平，降低中老年人冠心病的发病率；3、治疗脑血管疾病通过对银杏叶提取物制剂的临床研究，发现他能够改善细胞血液循环、活化细胞代谢，因此对老年痴呆症、脑损伤后遗症、脑血栓等疾病的疗效显著；4、抗癌作用银杏叶提取物还能抑制亚硝胺等物质的致癌作用。关于银杏叶提取物，国内有很多文献公开中国专利申请200710117950. 2、“一种银杏叶冻干粉针剂及其制备方法”中公开了一种银杏叶提取物的制备方法，该方法是将银杏叶切碎，按照重量比加入5-8倍量的 40-60%乙醇，回流提取2-4次，每次1-1. 5小时；然后加入絮凝剂，静置6_10小时，滤过，上清液浓缩至相对密度1. 03-1. 09 (500C )；加入乙醇使药液含醇量为70-85%，静置12- 小时，倾出上清液，回收乙醇，减压浓缩至无醇味；加水稀释至含生药4g/ml，上样至处理的聚酰胺柱，用8-20%乙醇洗脱，收集上样流出液和洗脱液，减压浓缩得药液I，用25-40%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液II ；继续用55-70%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液III ；其中上样时按照0. 5柱体积/小时的流速进行，洗脱时按照1. 5柱体积/小时的流速进行。药液I用水饱和的乙酸乙酯萃取3次， 水层弃去，有机层回收溶剂，得药液IV ；药液II用水饱和的正丁醇萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，备用；药液III用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂， 与药液II萃取的有机层浓缩物、药液VI合并，滤过，减压浓缩。该方法得到的银杏叶提取物，其有效部位的总含量可以达到80%以上，其中总黄酮醇苷达到40%以上，萜类内酯达到10%以上。提取用乙醇浓度低，提取液中水溶性杂质增多，加大了后续处理的难度，不但增加了絮凝剂处理步骤，而且每步洗脱所得洗脱液均需用有机溶剂萃取纯化，增加了带入外来杂质的几率，工艺复杂。中国专利申请CN200810068921. 6、“银杏叶提取物与双嘧达莫的组合物制剂及其制备方法”，公开了银杏叶提取物的制备方法，包括取银杏叶粉碎，用乙醇回流提取，提取液回收乙醇，得银杏叶醇提液备用；药渣用水提取，提取液与前述醇提液混合，混合液适当浓缩，用无机陶瓷膜进行过滤，过滤速度为10-15L/h，过滤后的药液直接通过已处理好的树脂柱进行吸附，流出液废弃，用PH值为2-6的去离子水或1-30%乙醇洗柱，再用pH值为4-6 的60-95%乙醇洗脱，收集颜色较深部分洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥即得银杏叶粗提取物。 这个工艺有水提过程，水提液、醇提液混合，过滤后直接上树脂柱处理，工艺过程较简单，但无除杂步骤，最终所得提取物纯度低，杂质含量较高。中国专利申请CN03150054. 4公开了一种银杏叶的提取方法鲜银杏叶清洗打浆， 稠厚浆液用乙醇提取，醇提液用碱调PH8-10，过滤，滤液用酸调pH3-8，优选5-6，过滤，滤液回收乙醇，获得黑棕色粘稠物，热水提取，水提液冷藏过滤，滤液上大孔树脂柱脱盐，梯度乙醇洗脱，回收乙醇，任选检测浓银杏叶提取液总黄酮含量。该提取方法既包括醇提又包含水提，上柱洗脱后再无后续纯化步骤，所得浓提取液杂质多。中国专利申请CN200810022162. X公开了将银杏叶粉碎；将粉碎的银杏叶放入乙醇浸泡；将浸泡银杏叶中的乙醇回收；去除浸泡过银杏叶中的杂质；加入树脂第一次吸附银杏酸；用乙醇洗脱，得到洗脱液；加入树脂第二次吸附银杏酸；用乙醇洗脱，得到洗脱液； 将乙醇回收；烘干即得到低酸银杏黄酮。为除去银杏酸，用了两次树脂，过程繁琐，增加了带入杂质(树脂残留)的几率。另外采用浸泡的方式进行提取，提取率偏低。中国专利申请CN200810030767. 3公开了一种银杏叶提取物的制备工艺，其工艺步骤包括取干银杏叶粉碎成细粉；当于细粉体积10-15倍的浓度为10-20%乙醇对银杏叶细粉进行搅拌提取得到提取液，提取温度为50-70°C，时间为1. 5-3小时；将所得到的提取液直接过AB-8树脂；用浓度为60-80%的乙醇解析树脂，得到的洗脱液浓缩、干燥后得到所需的银杏叶提取物。提取用乙醇浓度过低，且无任何纯化步骤，水溶性杂质多。AB-8树脂对黄酮类物质有一定吸附作用，但对内酯作用弱。中国专利申请CN200910154390. 7公开了一种银杏提取物的生产工艺，将银杏叶原料加入8倍50-70%的乙醇对银杏叶分3次进行浸提，浸提温度70度，然后收集提取液， 真空蒸发，回收乙醇，离心后收集上清液；将经过离心处理的提取液过径高比为1 10的大孔树脂层析柱，用5-15%的乙醇分批淋洗至洗出液澄明，然后用70%的乙醇解吸，解吸完毕后，收集解吸液，将上述解吸液再过径高比为1 30的大孔树脂层析柱，收集解吸液，减压回收乙醇，浓缩成稠膏后，真空干燥即得银杏提取物。无纯化步骤，杂质多，树脂柱径高比偏高，不适于大生产。中国专利申请CN200910217956.6公开了银杏叶提取工艺，将银杏叶粉碎后，经乙醇浸泡、浓缩过滤、乙醇冷藏、树脂吸附、乙醇洗脱等技术处理，得到银杏提取液。单纯浸泡， 提取率低。中国专利申请201010132782. 6，名称为“一种治疗血管性痴呆的组合物及其制备方法”公开了银杏叶加8倍量体积的70%乙醇回流提取3次，每次1. 5小时，合并提取液，减压回收乙醇，药液通过DlOl大孔吸附树脂柱，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积的洗脱液， 滤过，减压回收乙醇并干燥，得银杏叶总黄酮。仅能获得银杏叶总黄酮，不能同时得到萜内酯等其他有效成分。中国专利申请CN201010148970.8，名称为“一种从银杏叶中提取总黄酮甙的方法” 公开了如下方法1)将干银杏碎叶于乙醇中，加热回流l_4h后过滤；2)所得滤渣用微波炉进行微波辐射处理后，将其与滤液合并加入水中，加热提取30-90min后过滤；幻浓缩步骤 (2)所得滤液至流浸膏，加去离子水溶解，以醚萃取2-3次后，水相碱调pH = 8-9，过大孔树脂柱，洗脱，收集洗脱液，浓缩，结晶，干燥。本发明采用微波辐射辅助提取与大孔树脂纯化处理相结合，产品提取率50%以上。用醚萃取，醚为低毒试剂，不适于大生产用。上树脂柱前调碱性，是使黄酮类物质易于吸附于大孔吸附树脂柱上，但会使内酯类物质被破坏掉。针对上述方法的不足，发明人研究了一种简单易行、可靠的方法，在提取过程中可同时获得一定比例的总黄酮及萜内酯，收率高，有效成分纯度高、杂质少，并能有效去除烷基酚酸类有害物质。
本发明的目的是提供一种银杏叶组合物。本发明还提供了一种银杏叶组合物的制备方法。本发明还提供了一种银杏叶组合物的应用。本发明提供的一种银杏叶组合物，该组合物中含有对-45%总黄酮醇苷、4-18%银杏内酯、2-6%白果内酯，且银杏酸少于百万分之五。优选的，本发明提供的银杏叶组合物中含有24-39%总黄酮醇苷、6. 5_18%银杏内酯、2-5%白果内酯，且银杏酸少于百万分之三。进一步优选，本发明提供的银杏叶组合物中含有观-39%总黄酮醇苷、6. 5-18%银杏内酯、3-4%白果内酯，且银杏酸少于百万分之一。其中，总黄酮醇苷的苷元是由槲皮素、山奈素和异鼠李素按照重量比为 0. 9-1. 3:1:0. 35-0. 8 组成。本发明提供的银杏叶组合物中，还含有6-15%的总氨基酸，6-18%的总糖。上述提供的银杏叶组合物中，还含有药学上可接受的载体或稀释剂。该组合物为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液或注射剂，所述注射剂为注射液、 注射用无菌粉末、注射用冻干粉和注射用浓溶液。所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、 粘合剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。其中所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖等；所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解剂选自微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠；所述润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、二氧化硅、滑石粉或硬脂酸镁；所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等；所述矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素或糖精钠。本发明提供了一种银杏叶组合物优选为注射液，由20-45%总黄酮醇苷、4-18%银杏内酯、2-6%白果内酯与山梨醇、乙醇、丙二醇、羟丙基-β-环糊精中的一种或多种组成， 每种辅料所占比例为1_5%，多种辅料总和不超过10%，且该注射液中的银杏酸少于百万分之五。本发明还提供了一种银杏叶组合物的制备方法，该方法包括以下步骤称取银杏叶，用3-6倍量的65-80%乙醇回流提取2次，每次1-2小时，合并提取液，在ρΗ值7. 0-8. 0 的条件下静置12-36小时，滤过，回收乙醇至无醇味，加水稀释后调ρΗ值4. 0-5. 5，离心，离心液上大孔吸附树脂柱，依次用纯化水、浓度为2. 5-3. 5% (g/ml)的乙酸钠溶液、纯化水、 浓度为20%的乙醇冲洗，然后用浓度为70-75%的乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤，回收乙醇至无醇味，浓缩至含生药3. 8-4. 2g/ml，加入乙醇使含醇量达80-90%，调节ρΗ值7. 0-8. 0， 静置M-36小时，浓缩，干燥，粉碎，制成制剂。上述方法中所述大孔吸附树脂柱的型号为HPD450。本发明还提供了上述银杏叶组合物在制备治疗静脉栓塞、视网膜静脉中央阻塞、 改善视力障碍的药物中的应用。本发明提供的银杏叶组合物及其制备方法的优点在于1、本发明提供的制备方法与中国专利200710117950. 2的区别在于1)乙醇浓度略有不同提取过程中，乙醇浓度低于65%，水溶性杂质增加，造成后续过程增加纯化的步骤 (萃取)，生产时间延长，易污染。本发明工艺采用65-80%乙醇提取，能有效保留有效成分， 同时除掉大部分杂质。2)调节 ρΗ 值静置前调ρΗ值是为了去除色素类等杂质成分；上树脂柱前调ρΗ值是为了调整溶解性，利于有效成分易于吸附于大孔吸附树脂柱上。同时PH值的调节对总黄酮和内酯的含量影响也较大，在有效去除杂质，最大限度保留有效成分时的酸碱度值的确定很重要。3)过大孔吸附树脂后用水、乙酸钠、乙醇洗脱200710117950. 2号专利采用聚酰胺树脂柱，更适于对极性大的有机物的吸附；本发明采用大孔吸附树脂柱，适于水溶性成分的分离，尤其是大分子亲水成分，如多糖、黄酮、 三萜类化合物。因而本发明更能有效的分离纯化得到所有目标成分，同时乙酸钠洗脱步骤更是显著去除了酚酸类毒性成分。本发明提供的提取方法可同时提取一定比例的黄酮与内酯有效成分，有效去除烷基酚酸类有害物质，各批次间有效成分含量稳定。缩短生产时间，避免污染。收率高，杂质少。对静脉栓塞引起的疾病有显著疗效，应用安全。2、本发明提供的银杏叶组合物各成分固定，比例关系明确，临床疗效显著。目前银杏叶制剂中各成分复杂多变、比例关系不明确，本发明通过大量试验研究，确定了各成分的最佳配比，使其在静脉栓塞引起的疾病方面的临床治疗效果更佳，尤其对视网膜静脉中央阻塞的治疗尤其显著。3、将本发明的银杏叶组合物制备成注射剂与现有技术中的银杏叶提取物注射剂相比，本发明注射剂各成分比例关系明确，稳定性好，质量均一，溶液颜色浅，临床疗效好， 应用更安全。溶液，即得。2)标准品溶液的制备精密量取铅、砷、镉、铜标准品储备液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每 Irnl 含铅、砷 0ng、lng、5ng、10ng、20ng，含镉 Ong,0. 5ng、2. 5ng、5ng、10ng，含铜0ng、50ng、100ng、200ng、500ng的系列浓度混合溶液。另精密量取汞标准品储备液适量， 用10%硝酸溶液稀释制成每Iml分别含汞0ng、0. 2ng、0. 5ng、lng、2ng、5ng的溶液，本液应临用配制。3)内标溶液的制备精密量取锗、铟、铋单元素标准溶液适量，用水稀释制成每 Iml各含Iyg的混合溶液，即得。4)供试品溶液的制备取供试品于60°C干燥2小时，粉碎成粗粉，取约0. 5g，精密称定，置耐压耐高温微波消解罐中，加硝酸5-10ml。密闭并按各微波消解仪的相应要求及一定的消解程序进行消解。消解完全后，消解液冷却至60°C以下，取出消解罐，放冷，将消解液转入50ml量瓶中，用少量水洗涤消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金单元素标准溶液 (1 μ g/ml)，200μ 1，用水稀释至刻度，摇勻，即得。除不加金单元素标准溶液外，余同法制备试剂空白溶液。5)测定法以测量值(3次读数的平均值)为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。将仪器的样品管插入供试品溶液中，测定，读取3次读数的平均值。从标准曲线上计算相应的浓度。在相同的分析条件下进行空白试验，扣除空白干扰。6. 3大孔吸附树脂残留检查照残留溶剂测定法(《中国药典》2010年版二部附录 VIIIP第二法)测定。1)色谱条件与系统适用性试验以键合/交联聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱(30mX0. 25mmX0. 25μπι)；氢火焰离子化检测器，柱温，程序升温，起始温度为 600C，维持16分钟，再以每分钟20°C升温至200°C，维持2分钟；检测器温度300°C ；进样口温度240°C ；载气为氮气，流速为每分钟1. Oml0顶空进样，顶空瓶平衡温度为90°C，平衡时间为30分钟。理论板数以邻二甲苯峰计算应不低于40000，各待测峰之间的分离度应符合规定。2)对照品溶液的制备精密称取正己烷，苯，甲苯，对二甲苯，邻二甲苯，苯乙烯， 1，2_ 二乙基苯和二乙烯苯对照品适量，加N，N-二甲基乙酰胺制成每Iml中分别含20yg、 4 μ g、20 μ g、20 μ g、20 μ g、20 μ g、20 μ g、20 μ g的溶液，作为对照品储备液。精密吸取上述储备液2ml，置50ml量瓶中，加25 % N, N- 二甲基乙酰胺溶液稀释至刻度，摇勻，精密量取 5ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得。3)供试品溶液的制备取本品约0. lg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入 25 %的N，N- 二甲基乙酰胺溶液5ml，密封瓶口，摇勻，即得。4)测定法分别精密量取顶空气体1ml，注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。检测结果总黄酮醇苷(％) :28.6(其中槲皮素的含量为4.50%、山柰素的含量为4. 55%、异鼠李素的含量为2. 35%)；银杏内酯(％) :7.5;白果内酯(％ ) :3.6;总糖 (%) :14.3;总氨基酸(％) :10.4;银杏酸(百万分之)未检出；炽灼残渣(％) 0. 45 ；铅 (百万分之)未检出；镉(千万分之)未检出；砷(千万分之)未检出；萊(千万分之) 未检出；铜(百万分之):未检出；正己烷(％ ):未检出；苯(％ ):未检出；甲苯(％ )未检出；对二甲苯(％ ):未检出；邻二甲苯(％ ):未检出；苯乙烯(％ ):未检出；1，2_ 二乙基苯 (% )未检出；二乙烯苯(％ )未检出。实施例2 银杏叶组合物1、称取银杏叶1kg，适度破碎(0. 3cm以下)，回流提取两次，第一次加入6倍量 80%乙醇浸泡1. 5小时，回流提取1. 5小时，第二次加入3倍量80%乙醇回流提取1小时， 合并提取液，备用；2、提取液33°C下调节pH值至7. 9，静置18小时，滤过，回收乙醇至无醇味，然后加水稀释至含生药2. lg/ml后调pH值至4. 0，离心，离心液上大孔吸附树脂柱(型号为朋0450)，依次用树脂1倍量纯化水、树脂2倍量浓度为3.2% (g/ml)的乙酸钠溶液冲洗树脂柱、然后用纯化水冲洗树脂柱直到冲洗液PH 7. 0，再用树脂1. 5倍量的浓度为20%乙醇冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的浓度为75 %乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤，回收乙醇至无醇味，浓缩至含生药3. 8g/ml，加入乙醇使含醇量达到85%，调节pH值至7. 8，静置30小时， 浓缩干燥，粉碎，得银杏叶组合物0. 42kg。3、含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(％ ) :38. 9 (其中槲皮素的含量为7. 40%、山柰素的含量为5. 74%, 异鼠李素的含量为2.36%)；银杏内酯(％) :6.5;白果内酯(％) :3.3;总糖(％ ) :11.7; 总氨基酸(％ ) :9· 6 ；银杏酸(百万分之)未检出；炽灼残渣(％ ) :0· 38 ；铅(百万分之) 未检出；镉(千万分之)未检出；砷(千万分之)未检出；汞(千万分之)未检出；铜 (百万分之)未检出；正己烷(％)未检出；苯(％)未检出；甲苯(％)未检出；对二甲苯(％ )未检出；邻二甲苯(％ )未检出；苯乙烯(％ )未检出；1，2_ 二乙基苯(％ )未检出；二乙烯苯(％ )未检出。实施例3:银杏叶组合物1、称取银杏叶1kg，适度破碎(0. 2cm以下)，回流提取两次，第一次加入4倍量 75%乙醇浸泡2小时，回流提取2小时，第二次加入5倍量70%乙醇回流提取1. 5小时，合并提取液，备用；2、提取液37°C下调节pH值至7.0，静置M小时，滤过，回收乙醇至无醇味，然后加水稀释至含生药1. 8g/ml后调pH值至4. 5，离心，离心液上大孔吸附树脂柱，依次用树脂1 倍量的纯化水、树脂2倍量的浓度为2. 9% (g/ml)的乙酸钠溶液冲洗树脂柱、然后用纯化水冲洗树脂柱直到冲洗液PH 7. 0，再用树脂1. 5倍量的浓度为20%乙醇冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的浓度为70%乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤，回收乙醇至无醇味，浓缩至含生药 4. 2g/ml，加入乙醇使含醇量达到80 %，调节pH值至7. 3，静置24小时，浓缩干燥，粉碎，得银杏叶组合物0. 38kg。3、含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(％ ) :42.8(其中槲皮素的含量为6.7%、山柰素的含量为6. 1%、异鼠李素的含量为4. 25%)；银杏内酯(％) :11.2;白果内酯(％) :4.2;总糖(％) :12.9;总氨基酸(％ ) 10.1 ；银杏酸(百万分之)未检出；炽灼残渣(％ ) 0. 42 ；铅(百万分之) 未检出；镉(千万分之)未检出；砷(千万分之)未检出；汞(千万分之)未检出；铜 (百万分之)未检出；正己烷(％)未检出；苯(％)未检出；甲苯(％)未检出；对二甲苯(％ )未检出；邻二甲苯(％ )未检出；苯乙烯(％ )未检出；1，2_ 二乙基苯(％ )未检出；二乙烯苯(％ )未检出。实施例4 银杏叶注射液取实施例1组合物，加水溶解，滤过，加入配制总量0. 3 %的活性炭脱色，调节pH值至5. 0，加水至规定量，过滤，灌装，灭菌，得注射液。经检测，含总黄酮醇苷0. 90mg/ml，银杏内酯0. 24mg/ml，白果内酯0. 1 lmg/ml，总糖 0. 45mg/ml，总氨基酸 0. 33mg/ml。实施例5:银杏叶注射液取实施例1组合物，加水溶解，滤过，加入各4%的山梨醇和乙醇溶液，搅拌，加入配制总量0. 3 %的活性炭脱色，调节pH值至5. 6，加水至规定量，过滤，灌装，灭菌，得注射液。经检测，含总黄酮醇苷0. 88mg/ml，银杏内酯0. 23mg/ml，白果内酯0. llmg/ml，总糖 0. Mmg/ml，总氨基酸 0. 32mg/ml。实施例6 银杏叶注射液取实施例2组合物，加水溶解，滤过，加入5 %山梨醇和3 %乙醇溶液，搅拌，加入配制总量0. 3%的活性炭脱色，调节pH值至5. 8，加水至规定量，过滤，灌装，灭菌，得注射液。经检测，含总黄酮醇苷0. 85mg/ml，银杏内酯0. 14mg/ml,白果内酯0. 07mg/ml,总糖 0. 26mg/ml，总氨基酸 0. 21mg/ml。实施例7 银杏叶注射液取实施例1组合物，加水溶解，滤过，加入1.8%羟丙基-β-环糊精溶液，搅拌，加入配制总量0. 3 %的活性炭脱色，调节pH值至5. 5，加水至规定量，过滤，灌装，灭菌，得注射液。经检测，含总黄酮醇苷0.8%ig/ml，银杏内酯0. 22mg/ml，白果内酯0. llmg/ml，总糖 0. 42mg/ml，总氨基酸 0. 31mg/ml。实施例8 银杏叶注射液取实施例3组合物，加水溶解，滤过，加入4%丙二醇溶液，搅拌，加入配制总量0.3%的活性炭脱色，调节pH值至4. 7，加水至规定量，过滤，灌装，灭菌，得注射液。经检测，含总黄酮醇苷0. 88mg/ml，银杏内酯0. 23mg/ml，白果内酯0. 09mg/ml,总糖 0. 27mg/ml，总氨基酸 0. 21mg/ml。对比例1 (参考中国专利200710117950. 2的实施例1的方法)1、取银杏叶切碎，按重量比加入8倍量的55%的乙醇，回流提取3次，每次1. 5小时，合并、滤过，减压浓缩；2、加入0. 2倍量体积的的明胶，静置8小时，滤过，上清液浓缩至相对密度约1.06 (50 0C )；3、加入乙醇使药液含醇量为80%，静置M小时，倾出上清液，回收乙醇，减压浓缩至无醇味；4、加水稀释，上样至处理的聚酰胺柱，用8%乙醇洗脱，收集上样流出液及洗脱液， 减压浓缩得药液I ；用25%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液II ； 继续用55%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液III ；其中上样时按照0. 5柱体积/小时的流速进行，洗脱时按照1. 5柱体积/小时的流速进行；5、药液I用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，得药液IV ； 药液II用水饱和的正丁醇萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，备用；药液III用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，与药液II萃取的有机层浓缩物、药液IV 合并，减压浓缩至稠膏，60°C真空干燥，得银杏叶组合物。6、含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(% ) :21.8;银杏内酯(% ) :5.7;白果内酯(% ) :0.8;总糖(% ) 5.2;总氨基酸(％) :4.4;银杏酸(百万分之)1.1;炽灼残渣(％) :066;铅(百万分之) 1 M (千万分之)1 ；砷(千万分之)4 ；汞(千万分之)未检出；铜(百万分之)5。
对比例2 (参考中国专利200710117950. 2的实施例2的方法)1、取银杏叶切碎，按重量比加入8倍量的60%的乙醇，回流提取3次，每次1小时， 合并、滤过，减压浓缩；2、加入0. 4倍量体积的0. 5%的海藻酸溶液，静置10小时，滤过，上清液浓缩至相对密度约1.09 (50 0C )；3、加入乙醇使药液含醇量为70%，静置M小时，倾出上清液，回收乙醇，减压浓缩至无醇味；4、加水稀释至含生药4g/ml，上样至已处理的聚酰胺柱，用20%乙醇洗脱，收集上样流出液及洗脱液，减压浓缩得药液I ；用40%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇， 减压浓缩得药液II ；继续用70%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液III ；其中上样时按照0. 5柱体积/小时的流速进行，洗脱时按照1. 5柱体积/小时的流速进行；5、药液I用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，得药液IV ； 药液II用水饱和的正丁醇萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，备用；药液III用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，与药液II萃取的有机层浓缩物、药液IV 合并，减压浓缩至稠膏，真空干燥，得银杏叶提取物。6、含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(% ) :23.6;银杏内酯(% ) :6.4;白果内酯(% ) :0· 7 ；总糖(% ) 4.8;总氨基酸(％) :4.3;银杏酸(百万分之)1.2;炽灼残渣(％) :062;铅(百万分之) 1 ；镉(千万分之)未检出；砷(千万分之)5 ；汞(千万分之)未检出；铜(百万分之) 2。对比例3 (参考中国专利200710117950. 2的实施例3的方法)1、取银杏叶切碎，按重量比加入6倍量的40%的乙醇，回流提取3次，每次1. 5小时，合并、滤过，减压浓缩；2、加入0. 3倍量体积的1. 5%聚乙烯吡咯烷酮溶液，静置8小时，滤过，上清液浓缩至相对密度约1.03 (50 0C )；3、加入乙醇使药液含醇量为70%，静置M小时，倾出上清液，回收乙醇，减压浓缩至无醇味；4、加水稀释含生药4g/ml，上样至处理的聚酰胺柱，用10%乙醇洗脱，收集上样流出液及洗脱液，减压浓缩得药液I ；用30%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液II ；继续用60%乙醇洗脱聚酰胺柱，收集洗脱液，回收乙醇，减压浓缩得药液 III ；其中上样时按照0. 5柱体积/小时的流速进行，洗脱时按照1. 5柱体积/小时的流速进行；5、药液I用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，得药液IV ； 药液II用水饱和的正丁醇萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，备用；药液III用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，水层弃去，有机层回收溶剂，与药液II萃取的有机层浓缩物、药液IV 合并，减压浓缩至稠膏，60°C真空干燥，得银杏叶提取物。6、含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(% ) :27.8;银杏内酯(% ) :6.2;白果内酯(% ) :0· 5 ；总糖(% )4.5;总氨基酸(％) :3. 7;银杏酸(百万分之)1. 6 ；炽灼残渣(％) :0. 68;铅(百万分之) 2;镉(千万分之)未检出；砷(千万分之)未检出；萊(千万分之)未检出；铜(百万分之)3。对比例4 =03150054. 4的方法将鲜银杏叶lOOOg，用打浆机粉碎成糊状，加5000ml 70%的乙醇及Ig硫酸氢钠回流提取3h，过滤再将滤渣同样提取2次过滤，合并三次滤液加饱和石灰水调pH值至10，产生污绿色沉淀，静置4h以上，过滤，加盐酸调节pH值5. 5，减压回收乙醇得到黑棕色粘稠物约300g，加1500ml热蒸馏水煮沸5分钟，过滤，滤渣用同样提取两次合并黄色水提液在0°C 冷藏过夜过滤后上大孔树脂柱(用800g树脂可完全吸附)控制滴速至水流尽后先以30% 乙醇洗杂质，至流出液无色后，再以50%乙醇洗脱至流出液无色为止，对50%乙醇洗脱液回收乙醇至无醇味，得到浓银杏叶提取液约450ml。含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(% ) :22.5;银杏内酯(% ) :2.6;白果内酯(% ) :1.8;总糖(% ) 5. 8 ；总氨基酸(％ ) 5. 3 ；银杏酸(百万分之)8 ；炽灼残渣(％ ) 0. 71 ’铅(百万分之) 2 ；镉(千万分之)1 ；砷(千万分之)5 ；汞(千万分之)未检出；铜(百万分之)8 ；正己烷(％ ):未检出；苯(％ ):未检出；甲苯(％ ) 0. 0002 ；对二甲苯(％ ):未检出；邻二甲苯(％ )未检出；苯乙烯(％ ) 0. 0005 ；1，2_ 二乙基苯(％ )未检出；二乙烯苯(％ ) 0.0005。对比例5 :200910154390. 7 的方法将银杏叶原料加入8倍65%的乙醇对银杏叶分3次进行浸提，浸提温度为70°C， 然后收集提取液，真空蒸发，回收乙醇，离心后收集上清液；将经过离心处理的提取液过径高比为1 10的大孔树脂层析柱，用5 15%的乙醇分批淋洗至洗出液澄明，然后用70% 的乙醇解吸，解吸完毕后，收集解吸液，将上述解吸液再过径高比为1 30的大孔树脂层析柱，收集解吸液，减压回收乙醇，浓缩成稠膏后，真空干燥即得银杏提取物。含量检测，方法同实施例1，结果如下总黄酮醇苷(% ) :23.3;银杏内酯(% ) :3.8;白果内酯(% ) :1.4;总糖(% ) 3. 7 ；总氨基酸(％ ) 3. 1 ；银杏酸(百万分之)6 ；炽灼残渣(％ ) 0. 68 ；铅(百万分之) 1 ；镉(千万分之)1 ；砷(千万分之)8 ；汞(千万分之)未检出；铜(百万分之)10; 正己烷(％ )未检出；苯(％ )未检出；甲苯(％ ) 0. 001 ；对二甲苯(％ )未检出；邻二甲苯(％ )未检出；苯乙烯(％ ) 0. 0012 ；1，2-二乙基苯(％ )未检出；二乙烯苯(％ ) 0.0008。实验例1 银杏叶提取物的成分分析将实施例1-3和对比例1-5的银杏叶提取物浓缩至生药重量的三分之一(此浓度下内酯不易析出，再浓缩内酯成分易析出)，然后对其进行分析，具体成分的分析方法见实施例1，结果见表1。表1:成分分析


本发明涉及一种银杏叶组合物及其制备方法，该组合物含有24-45％总黄酮醇苷、4-18％银杏内酯、2-6％白果内酯，且银杏酸少于百万分之五。本发明提供了一种简单易行、可靠的方法，在提取过程中可同时获得一定比例的总黄酮及萜内酯，收率高，有效成分纯度高、杂质少，并能有效去除烷基酚酸类有害物质。