专利名称：一种提高甜菊糖总甙的方法甜菊糖是从菊科草本植物甜叶菊中精提的新型天然甜味剂。它具有高甜度、低热能的特点，其甜度是蔗糖的200— 350倍，热值仅为蔗糖的I / 300。是继甘蔗、甜菜之外第三种最具有开价值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被誉为“世界第三糖源”。甜菊糖在一般着色性，安全无毒，被广泛应用于食品、酿酒、医药、日用化工等行业。甜菊糖的九种甜味成分中，甜菊甙、莱鲍迪甙A(RA)和莱鲍迪甙C(RC)的相对含量较高，共占90%以上，是决定甜菊糖味质的主要成分。RA甜度最高，相当于蔗糖的450倍，甜味特性也与蔗糖相接近；甜菊甙甜味相当于蔗糖的300倍，具有一定的苦味和不愉快的后 味，影响了甜菊糖的味质，限制了其更为广泛的应用。现在中国市场上的甜菊糖产品有相当一部分产品的总甙含量较低，不能满足客户的需求，需要再次精制以提高产品总甙。本发明提供一种简单易行的方法能将总甙含量较低的产品总甙提高到98%以上，同时将甜菊甙中的RA含量提高到60%以上。
本发明解决的技术问题是提供一种将总甙含量较低的产品总甙提高到98%以上的工艺。本发明提供一种利用下述工艺提高甜菊糖总甙含量，同时提高RA含量的方法。工艺流程为将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为10-35°C，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30-100rpm ;上述结晶溶液进行固液分离，固体再次洗晶分离，烘干获得精制甜菊糖；结晶溶液的固液分离选择抽滤或离心分离；所述甜菊糖原料的质量与溶剂的质暈体积比为1:2-6 ;上述甜菊糖原料总甙含量不得低于70%。所述有机溶剂为乙醇、异丙醇、氯仿中的一种或其混合溶剂；有机溶剂优选乙醇、异丙醇和氯仿的混合溶剂；所述乙醇纯度为100%，异丙醇纯度为100%，氯仿浓度为100% ；氯仿异丙醇乙醇的体积比为=1:2-5:5-10 ；异丙醇和乙醇的比例为1:2-6 ;氯仿和乙醇的比例为1: 5-10 ；异丙醇和乙醇的比例优选1:3-5 ；氯仿和乙醇的比例优选1:6-8;所述洗晶溶剂为100%的乙醇；洗晶过程中固体湿重和乙醇溶剂的质量体积比为1: 3 ;结晶时间优选4-6小时；所述结晶过程中搅拌转速优选40_60rpm ；所述精制样品的烘干温度为50_80°C。有益效果 本发明可将甜菊糖原料的总甙由70%提高至98%以上，可将甜菊糖原料的RA含量由30%提高至60%以上；本发明产品的收率较高，一般在35%_50%之间。甜菊甙标准品干重纯度>99%莱鲍迪甙A标准品干重纯度>99%含有9种甜菊糖甙的基准溶液鲍含甜菊甙、莱鲍迪甙A、莱鲍迪甙B、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙D、莱鲍迪甙F、杜尔克甙A、悬钩子甙和甜菊双糖甙。用7:3的水乙腈溶液将含有9种甜菊糖甙的标准溶液进行稀释，以便用来确定各个糖甙的出峰时间。标准品可在日本Wako公司和美国ChromaDex公司买到。标准品溶液的配制精确称取50毫克甜菊甙标准品和50毫克莱鲍迪甙A标准品，分别放入50毫升的容量瓶中，然后加入7:3的水乙腈溶液进行溶解至50毫升刻度。样品溶液的配制精确称取50 - 100毫克甜菊甙样品，放入50毫升的容量瓶中，然后加入7:3的水乙腈溶液进行溶解至50毫升刻度。检测步骤 在以下条件下注入5 U I的样品溶液。色谱柱Shiseido公司的 Capcell pak C18 MG II 型色谱柱或者 Phenomenex 公司的Luna5 u C18 (2) 100A型色谱柱或者相当规格的色谱柱(长度250毫米；内径4. 6毫米，填料粒度5 ii m)。；流动相比例为32:68的乙腈和磷酸钠缓冲液(规格10mmol/L，pH值2. 6)的混合液。磷酸钠缓冲液的配置方法将2. 76克磷酸二氢钠溶解到2升水中，加入磷酸将pH值调整到2. 6流速I毫升/每分钟。检测器210nm紫外检测。色谱柱温度40°C记录大约30分钟的检测结果。峰值识别和计算将样品溶液的出峰与含有9种甜菊糖甙的基准溶液的出峰时间相对比，确定样品溶液中各个出峰对应的糖甙。算出样品溶液中9种糖甙对应的峰面积，算出甜菊甙标准品溶液和莱鲍迪甙A标准品溶液的峰面积。按照以下公式，计算样品中莱鲍迪甙A之外的8种糖甙中每一种糖甙的百分比%X= [ffs/ff] X [fxAx/As] xlOO按照以下公式，计算样品中莱鲍迪甙A的百分比% 莱鲍迪式 A= [WR/ff] X [Ax/AR] xlOO公式中X代表每种糖甙Ws是甜菊甙标准品溶液中甜菊甙的干重(mg)WR是莱鲍迪甙A标准品溶液中莱鲍迪甙A的干重(mg)W是样品溶液中样品的干重(mg)As是甜菊甙标准品溶液的峰面积AR是莱鲍迪甙A标准品溶液的峰面积Ax是样品溶液每种糖甙的峰面积fx是每种糖甙的分子量与甜菊甙分子量的比值1. 00(甜菊甙)，I. 20(莱鲍迪甙A), 1.00(莱鲍迪甙B)，I. 18 (莱鲍迪甙C)，1.40(莱鲍迪甙D)，I. 16(莱鲍迪甙F)，0. 98(杜尔克甙A) ,0.80(悬钩子甙),0.80(甜菊双糖甙)。计算甜菊糖甙总量的百分比(将9种糖甙的百分比相加)实施例I取甜菊糖原料50g，加入IOOml溶剂，氯仿异丙醇乙醇=1:5:10，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度35摄氏度，搅拌速度为90rpm，时间为8小时，将结晶混合液用布氏漏斗进行抽滤，用100%纯度乙醇洗晶，固液比为1:3 ;再次抽滤，50°C过夜烘干，得干样18. 3g。液相测定结果为


本发明公开了一种提高甜菊糖总甙的方法，本发明属于生物工程和新型甜味剂领域，特别涉及甜菊糖总甙含量的方法。步骤如下将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为10-35℃，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30-100rpm；上述结晶溶液进行固液分离，固体再次洗晶分离，烘干获得精制甜菊糖，所述甜菊糖原料质量与溶剂的体积比为1:2-6；有机溶剂为乙醇、异丙醇、氯仿中的一种或其混合溶剂。本发明可将甜菊糖原料的总甙由70%提高至95%以上。