一种免疫调节剂多肽缓释微球制剂及其制备方法【技术领域】，尤其涉及一种免疫调节剂多肽的缓释微球制剂及制备方法。[0002]免疫调节剂是一种对正常的免疫功能不产生影响，但可增强已经低下的免疫功能，调节免疫反应的药物。在低免疫应答的病例中，能增强各类抗原的皮肤迟发性变态反应；并增强淋巴细胞介质的产生。当吞噬细胞和T细胞功能低下时，免疫调节剂可使其恢复正常。在临床上可用于治疗复发性及慢性感染、肿瘤、类风湿疾病、病毒感染后的低应答性疾病等。常见的免疫调节剂有免疫促进剂，免疫抑制剂，免疫双向调节剂。胸腺制剂是一种非特异性免疫调节制剂。[0003]胸腺肽作为一种免疫调节剂，目前市场上主要有两种胸腺肽应用较广，分别是胸腺五肽和胸腺法新，胸腺素β 4是一种新型胸腺肽。[0004]胸腺五肽是胸腺分泌物胸腺生成素II的有效部分，作用之一是诱导T细胞分化，可选择性地诱导Thy-1-的前胸腺细胞转化为Thy-1+的T细胞。胸腺五肽可用于恶性肿瘤病人经放化疗后，免疫功能损伤者；乙型肝炎的治疗；重大外科手术及严重感染；自身免疫性疾病,如类风湿性关节炎,红斑狼疮；II型糖尿病、更年期综合征；年老体衰免疫功能低下者。[0005]胸腺法新是人体内重要的免疫调节物质，可用于治疗慢性乙型肝炎和增强免疫系统。同时还具有刺激血管内皮细胞迁移、促进血管生成和伤口愈合等功效，已用于乙型肝炎、丙型肝炎、恶性肿瘤以及免疫缺陷疾病等的临床治疗和研究。[0006]胸腺素β 4是真核生物细胞中的一种主要的肌动蛋白螯合分子，广泛分布于哺乳动物和其他脊椎动物的多种组织和有核细胞中。近年来胸腺素β4的应用主要在创伤愈合、肿瘤转移、血管再生等方面。[0007]目前已上市的胸腺五肽剂型为注射用胸腺五肽，肌肉注射或加入葡萄糖中静脉点滴，每次I mg，每日或隔日一次，一般15日为一个疗程，或者根据病情决定。另有IOmg规格，疗程遵医嘱。临床已上市的胸腺法新剂型为注射用胸腺法新，每瓶胸腺法新(1.6mg)以Iml注射用水溶解后立即皮下注射(不应作肌注或静注)。治疗慢性乙型肝炎的推荐剂量:每次1.6mg，每周2次，两次相隔3-4天。连续给药6个月(共52针)，其间不应间断。作为免疫损害病者的疫苗免疫应答增强剂:每次1.6mg，每周2次，两次相隔3-4天，连续4周(共8针)，第一针应在给疫苗后立即皮下注射。这些剂型均需要多次给药，给药麻烦，因此，开发一种新型制剂成为当前的重要课题。本发明的多肽缓释制剂微球是近年来发展的新剂型，它是以高分子材料为载体制成的给药系统，微球中的药物分散或包埋在材料中而形成球状实体。这类剂型的开发，对于发展缓释与靶向给药系统有重要的意义。而且本发明的制剂以缓释微球形式给药，有效延长了有效成分在体内作用时间，减少给药次数和药物耐受性， 提高病人的适应性，方便临床使用和患者接受。另外，它还消除了普通注射剂多次给药产生的体内药物浓度峰谷现象，可获得平稳长时间的有效浓度，降低了毒副作用，并且总给药剂量减少。


[0008]目前免疫调节剂胸腺肽类给药剂型是注射用药，给药频繁，以缓释微球形式给药，有效延长了有效成分在体内作用时间，减少给药次数和药物耐受性，提高病人的适应性，方便临床使用和患者接受。另外，它还消除了普通注射剂多次给药产生的体内药物浓度峰谷现象，可获得平稳长时间的有效浓度，降低了毒副作用，并且总给药剂量减少。
[0009]本发明制备了一种免疫调节剂多肽缓释微球制剂，其特征在于所述制剂含有以微球总重量计，占微球重量0.1% — 30%(w/w)的免疫调节剂多肽，和占微球重量60% — 80%的分子量为5，000— 200，000道尔顿的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0.1%—20%的药学上可接受的其他辅料。本发明的缓释微球平均粒径为5 — 60 μ m，包封率大于90%。所述免疫调节剂多肽包括胸腺五肽、胸腺法新与胸腺素β4。所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料,可选自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)、聚羟丁酸(ΡΗΒ)、聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)、聚乳酸一聚乙二醇其中的一种或其混合物，优选聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯一乙交酯(PLGA)其中的一种或其混合物，分子量范围均在5，000— 200，000道尔顿。所述的药学上可接受的其他辅料包括明胶、甘油、乳化稳定剂及赋形剂，明胶用量范围为0.1% — 5%，甘油用量范围为0.1% — 5%，乳化稳定剂选自聚乙烯醇(PVA)，其用量范围为0.1% — 5%，赋形剂选自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖中的一种或其混合物，其用量范围为0.1% — 5%。
[0010]一种免疫调节剂多肽缓释微球制剂的制备方法，其特征是采用复乳一液中干燥法，分两步制备微球，具体方法如下:
第一步，首先将免疫调节剂多肽、明胶、甘油溶于纯化水，得内水相；另将高分子材料溶于有机溶剂中，得油相；将油相和内水相置于搅拌器内，高速乳匀，形成W/0乳液；然后将W/O乳液加入到聚乙烯醇溶液中，高速乳匀，形成W/0/W复乳；
第二步，将w/0/w复乳加入纯化水，室温下磁力搅拌，除去有机溶剂，超速离心，收集所得微球，用蒸馏水洗涤多次后，再离心收集，加入赋形剂，冷冻干燥，即得一种免疫调节剂多肽缓释微球制剂。
[0011 ] 所述的有机溶剂选自二氯甲烷、乙醚、丙酮、四氢呋喃等，优选二氯甲烷。

[0012]下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
[0013]实施例1
称取IOg胸腺五肽、5g明胶、5g甘油溶于纯化水，得内水相；称取160g聚丙交酯溶于二氯甲烷中，得油相；将油相和内水相置于搅拌器内，室温下置于乳化分散机上高速(30000rp m)乳匀30秒，形成W/0型乳液；配制浓度为5%的聚乙烯醇溶液50ml，然后将所得的W/0型乳剂转移至50ml5%聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀I分钟，得W/0/W型复乳JfW/O/W复乳加入纯化水中，室温下磁力搅拌2小时，除去有机溶剂，超速离心，收集所得微球，用蒸馏水洗涤多次后，再离心收集，加入5g山梨醇，冷冻干燥，即得一种免疫调节剂多肽缓释微球制剂。
[0014]精密称取实施例1制备的载药胸腺五肽缓释微球Ig溶于ImL 二氯甲烷，分次加入30mL和20mL纯化水提取药物，涡旋萃取lmin，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以纯化水定容至10mL，进样20μ 1，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例1制备的载药胸腺五肽缓释微球中药物含量，据此计算包封率是94.6%。
[0015]对实施例1制备的胸腺五肽缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下:
精密称取若干份实施例1制备的胸腺五肽缓释微球，每份10mg，置于35个IOOmL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na2HPO4和0.1M的NaH2PO4的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37°C恒温水浴中，分别在第O小时、2小时、I天、4天、10天、16天、24天、30天、40天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(I: lv/v)，色谱柱为C18 50 X 2mm,流动相为1:1的含有0.1%三氟醋酸和含有1%三氟醋酸的50%乙腈混合溶液，流速1.0ml/min,在220nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例1制备的胸腺五肽缓释微球制剂的体外释药测定结果如表1所示:
表1实施例1制备的胸腺五肽缓释微球制剂的体外释药实验结果