一种提高动物免疫力的药物组合物的制作方法[0002]动物病毒性疾病严重危害畜牧业发展，某些人兽共患病还威胁着人类健康，包括猪蓝耳病、猪瘟、口蹄疫等，疫苗免疫失败，猪群免疫功能低下，猪群疾病越来越复杂，对我国养猪业的健康、快速、稳定发展造成了严重的影响。2004年以来，农业部取消了抗病毒类化药在兽医临床的使用，即目前尚无抗病毒类化学类药物在兽医临床上的应用，因此兽医临床主要靠采用中兽药来进行病毒性疾病的防控。我国具有丰富的中兽药资源优势和扎实的研究基础，其中包括如黄芪、人参等具有提高免疫功能的中兽药的研究。在实际养殖过程中，中兽药的使用，以提高猪的免疫功能为目的，可防治免疫抑制性疾病的困扰，提高疫苗免疫效果，是保证我国养猪业的健康、快速、稳定发展的首要选择，这些中草药通过提高机体的防御功能，从而使机体达到“正气内存，邪不可干”的作用，从而起到有效的间接抗病毒作用，该类中药在提高动物机体免疫力的同时，可改善动物的机体的适应能力，健脾开胃，提高动物食欲，从而促进畜禽的顺利生长。[0003]超微粉碎技术是近30年来国际上迅速发展的一项新技术，它是利用机械或流体动力的方法将物料颗粒粉碎至微米甚至纳米级微粉的过程。中药材经超微粉碎后，可提高细胞的破壁率，增加药材的比表面积，使药物有效成分溶出增加，生物利用度提高，从而可减少临床用药量。因此，将该技术用于中药制剂中具有提高药物溶解度、改善制剂外观形态、促进药物吸收、增强临床疗效等作用。
[0004]本发明的目的在于提供一种提高动物免疫力的药物组合物。本发明的另一目的在于提供该药物组合物的制备方法及用途。[0005]本发明提供了一种提高动物免疫力的药物组合物，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型:[0006]紫锥菊根5~8份、白术2~4份、野山楂I~3份。[0007]进一步地，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型:
[0008]紫锥菊根5份、白术3份、野山楂2份。
[0009]进一步地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的剂型:
[0010]紫锥菊根5~8份、白术2~4份、野山楂I~3份。
[0011]优选地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的剂型:
[0012]紫锥菊根5份、白术3份、野山楂2份。
[0013]紫锥菊根来源于菊科(Asteraceae)松果菊属(Echinacea Moench)紫花紫锥菊Echinacea purpurea (L) Moench的干燥的根和根状莖。
[0014]野山楂来源于蔷薇科山楂属植物野山楂(Crataegus cuneata Sieb.et Zucc)、华中山楂(C.wilsonii Sarg.)等的干燥果实。
[0015]其中，它是由所述原料药的药粉、水提物或/和乙醇提取物为活性成分，加上兽药上常用的辅料或辅助性成分制备而成的剂型。
[0016]其中，所述剂型为经胃肠道吸收剂型。如散剂、颗粒剂、口服液、片剂、丸剂等。
[0017]水提物或以药粉入药，均是中药传统使用方式，水提后，由于水的溶解范围广，能够将大部分有效成分溶出，使药物更容易被人体吸收，起效更快，例如汤剂等给药形式；以原粉入药，药粉的表面积较大，也有利于药材中有效成分在体内的吸收，但药材未经提取，有效成分仍需在体内溶出再吸收，其起效相对水提物较慢，但也同时削弱了药材中有害成分对人体造成的毒副反应，适合于长期服用，如将原粉制备成丸剂等给药形式。目前在制药过程中，乙醇作为溶剂对药物进行提取，也是最为常见的提取方式之一，乙醇为半极性溶齐?，溶解性能界于极性与非极性溶剂之间，可以溶解水溶性的某些成分，也能溶解非极性溶剂溶解的一些成分，通常用乙醇提取代替水煎，从而避免大量无效成分的溶出，提高有效成分的浓度和提取效率，不过乙醇的价格较水贵，在现代制药工业大生产中，为了节省生产成本，通常还是以水煎为主。在本发明已知组合物水提物具有生理活性的情况下，为了适应各种生产和使用时的需求，可以任选水提、原粉、醇提或它们的组合方式来制备具体的剂型。
[0018]本发明所述药学上可接受的辅料包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸 氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡略烧丽或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸纳、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸纳、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
[0019]所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
[0020]当然，本发明药物组合物，还包括上述各药材的提取物，通过上述配比和提取率换算得到的各提取物配伍使用的组合物。
[0021]本发明还提供了上述药物组合物的制备方法，它包括如下操作步骤:
[0022](I)按配比称取原料药；
[0023](2)将原料药粉碎后，混匀，加上兽药上常用的辅料或辅助性成分制备成剂型。
[0024]进一步地,所述粉碎为超微粉碎。
[0025]本发明还提供了上述药物组合物在制备提高动物免疫力、促进动物生长的药物中的用途。
[0026]进一步地,所述动物为哺乳动物或禽类,如为鸡、鸭、猪、牛、羊或鼠。
[0027]本发明药物组合物，配伍精当，各原料药配合使用发挥了协同增效作用，能够显著提高动物免疫力和促进动物生长，为兽用药物提供了新的选择。

[0028]实施例1本发明组合物的制备
[0029]紫锥菊根500g白术300g野山楂200g
[0030](I)取白 术药材，加20倍量水，采取水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油备用，将提取液减压浓缩至密度为1.10~1.12的浸膏，喷雾干燥(喷雾干燥条件:进风温度:150~170°C，出风温度:90~100°C )制成白术浸膏粉。
[0031](2)取紫锥菊根、野山楂两味药材，鼓风干燥使含水量为5%以下，常规粉碎过五号筛(80目)，得药材细粉混合物，将混合物置超微粉碎机中，于_20°C的低温条件下超微粉碎20分钟以上，过300目筛，得粒径小于50 μ m的超微粉。
[0032](3)将超微粉、白术浸膏粉、挥发油混合均匀后，分装、灭菌，得到提高畜禽免疫力的中兽药超微散剂。
[0033]实施例2本发明组合物的制备
[0034]紫锥菊根800g白术200g野山楂100g
[0035](I)取白术药材，加15倍量水，采取水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油备用；
[0036](2)将白术药渣和野山楂药材加10倍量水提取三次，每次I小时，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至密度为1.10~1.12的浸膏，喷雾干燥(喷雾干燥条件:进风温度:150~170°C，出风温度:90~100°C )制成浸膏粉。
[0037](3)取紫锥菊根药材，鼓风干燥使含水量为5%以下，常规粉碎过五号筛(80目)，得药材细粉，将药材细粉置超微粉碎机中，于_20°C的低温条件下超微粉碎20分钟以上，过300目筛，得粒径小于50 μ m的超微粉。
[0038](4)将超微粉、浸膏粉、挥发油混合均匀后，分装、灭菌，得到提高畜禽免疫力的中兽药超微散剂。
[0039]实施例3本发明组合物的制备
[0040]紫锥菊根500g白术300g野山楂200g
[0041]将上述药材干燥后，粗碎，再经超微粉碎，过300目筛，得粒径小于50 μ m的超微粉，即得超微散剂。
[0042]实施例4本发明组合物的制备
[0043]紫锥菊根500g白术400g野山楂300g
[0044]上述药材，加水煎煮3次，每次煎煮2~3小时，合并水煎液，浓缩，制备常规中兽药剂型。
[0045]以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。下述各试验例中，各中药实验组给药剂量均以生药量计。本发明组合物超微散由实施例3制备。
[0046]试验例I本发明药物组合物的药效活性研究
[0047]I动物分组[0048]昆明小鼠180只，随机分为6组；
[0049]正常对照组:灌服生理盐水0.5ml/只，连续7d ；
[0050]环磷酰胺模型组:灌服生理盐水0.5ml/只，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重,连续2d ；
[0051]紫锥菊根+环磷酰胺组:灌服紫锥菊根单味药超微粉混悬液1000mg/kg体重，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d ；
[0052]白术+环磷酰胺组:灌服白术单味药超微粉混悬液1000mg/kg体重，连续7d，于灌服第3天,腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重,连续2d ；
[0053]野山楂+环磷酰胺组:灌服野山楂单味药超微粉混悬液1000mg/kg体重，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d ；
[0054]本发明组合物超微散+环磷酰胺组:灌服中药超微散1000mg/kg体重，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d。
[0055]其中，单味药材的超微粉碎方法与本发明组合物相同。
[0056]2小鼠免疫器官指数的测定
[0057]给药结束后称小鼠体重，颈椎脱曰处死小鼠，称其脾脏、胸腺湿重，计算脾指数和胸腺指数:
[0058]脾指数=脾重量(mg)/体重(g)
[0059]胸腺指数=胸腺重量(mg) /体重(g)
[0060]3单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的测定
[0061]各组末次给药后lh，称体重，各鼠均按0.lml/10g剂量由尾静脉注入印度墨汁(以生理盐水按1:5稀释)，注射后分别在Imin U1)和5min (t2)从小鼠眼眶静脉丛取血20 μ I，溶于2.0ml浓度0.1 % Na2CO3溶液中，摇匀，放置20min后于680nm处测其吸光度值㈧，以浓度0.1 % Na2CO3溶液作空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数α值。计算公式:
[0062]K= (logA1-logA2) / (t2_ti)
[0063]α = K1/3 X体重/ (肝重+脾重)
[0064]4小鼠血清溶血素的检测
[0065]给药第3天，每鼠腹腔注射2% SRBC0.2ml致敏，并继续给药。致敏后第4天于末次给药后90min取小鼠眼球血,静置lh, 2000r/min离心10min,取上层血清20 μ I,用NS稀释500倍，取该血清样Iml作为补体，37°C温浴lh，反应结束，将反应管立即移入冰浴中，以终止反应，以2000r/min离心10min，取Iml上清液盛于含3ml都氏试剂的试管摇匀，放置IOmin后于540nm测其吸光度值(A)。计算小鼠的半数溶血值(HC5tl)。
[0066]样品HC5tl =(样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值)x稀释倍数
[0067]5数据处理
[0068]利用SPSS13.0进行统计分析，显著性分析采用单因素方差分析和多重比较。 [0069]6结果及分析
[0070]表1中药超微散对小鼠免疫活性影响试验结果
[0071]