专利名称：：含格列奈类的预防肝纤维化医药组合物的制作方法：病毒性肝炎、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎等大部分肝疾病中，肝纤维化最终形态的肝硬化引发诸如肝细胞癌、食道及胃静脉瘤等威胁生命的疾病。因此急需确立包括肝硬化在内的肝纤维化的抑制方法。有报道表明，在病毒性肝炎中，通过干扰素和抗病毒剂的组合进行的病毒除去疗法具有改善纤维化的效果，但是在日本，即便是使用最新的干扰素、抗病毒剂的组合，代表性肝疾病之一的c型病毒性肝炎的完全去除率也才为60%左右，因此，如何延緩那些无应答患者的肝硬化发病十分重要。另一方面，以近年生活习惯病为背景，由于即便是无饮酒经历或病毒性肝炎，也与酒精性肝炎具有同样的肝组织病理，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)已成为公认的问题。Matteoni等人，在对单纯性脂肪肝、单纯性脂肪肝并发炎症、单纯性脂肪肝并发肝细胞变性、单纯性脂肪肝并发酒精小体或纤维化进行了长期跟踪之后，报道了单纯性脂肪肝并发肝细胞变性、单纯性脂肪肝并发酒精小体或纤维化当中的20%有了肝硬化发病(非专利文献1)。单纯性脂肪肝并发肝细胞变性、或单纯性脂肪肝并发酒精小体或纤维化被纳入到NASH的范畴当中。进一步地，对诊断为肝硬化阶段的NASH患者的长期跟踪揭示了其中的20-30%发展成了肝癌(非专利文献2、非专利文献3)。据预测由于饮食生活的西方化、肥胖的增加而具有肝硬化、肝癌发病可能性的NASH患者在美国有560万人，在日本有150万人(非专利文献4),正在寻找有效的治疗方法。尽管NASH的发病机制不明，但Day等人提倡2次打击理论(非专利文献5)。即，作为第一次打击，由糖代谢、脂质代谢的异常引起脂肪肝发病，之后，作为第二次打击，由炎症等引起氧化应激上升，引发肝细胞变性或细胞凋亡介导的肝纤维化、肝硬化。由于作为第一次打击的脂肪肝被认为是起因于生活习惯病尤其是诸如胰岛素抵抗、糖耐量异常、饭后高血糖、糖尿病等糖代谢的异常，故可假定糖尿病药物是适用的。虽然有通过改善胰岛素抵抗使血糖值下降的二甲双胍(非专利文献6)和格列酮(非专利文献7、非专利文献8)的报道，但是由于二甲双胍的效果有限，格列酮有损害肝功能的担忧和增加体重的报道，因此并不能满足作为NASH的治疗药物的要求。此外，有报道表明由于磺酰脲(SU)类药物、胰岛素(非专利文献9)通过使胰岛素浓度持续的上升而诱发作为NASH的危险因子的脂肪肝，故难以适用于NASH。在这种情况下，北原等人发现，以那格列奈为代表的速效型胰岛素分泌促进剂使门静脉中的胰岛素浓度和血糖浓度降低，作为其结果，抑制肝的脂肪酸合成，抑制肝TG量，并减轻面临NASH风险的脂肪肝。即专利文献l中，发现在糖尿病模型动物中，糖负荷前的那格列奈给药可抑制糖负荷后的肝脂肪酸合成限速酶ATP-枸橼酸裂解酶的表达增加，进一步地，在临床上发现对53例糖尿病脂肪肝或糖尿病脂肪肝病例中GPT>GOT的5例，12周那;f各列奈给药在统计学上显著抑制了作为肝损伤指标的GOT，GPT,表明对脂肪肝改善也抑制了其后续的肝损伤，从而完成了发明。随后，对通过肝活4企而祐:诊断为糖尿病的5例患者进4亍16周那格列奈给药，由给药前后的肝活检确认了脂肪肝的减小、和肝组织炎症、肝变性、肝纤维化的改善(非专利文献IO)。认为这些脂肪肝的减小和肝组织炎症、肝变性、肝纤维化的改善所涉及的药效的表达，可以由速效型胰岛素分泌促进剂的胰岛素分泌模式变化的结果产生的脂肪肝改善作用来充分说明。此外，目前为止还没有报道那格列奈除此以外的作用机制，例如通过不经胰岛素分泌的作用就引起肝组织炎症、肝变性、肝纤维化的改善。现在还不存在速效或可为临床专家所用的肝纤维化治疗药物。应说明的是，此处所述肝纤维化的程度是通过下述步骤来评价的将肝活片企的组织切片进4t诸如Masson的三色染色、Sweet的网状纤维染色或Azan染色等纤维成分的特异染色处理；然后对每个特征的纤维图像进行定量或者以阶段来评价。作为一例可列举出，由于NASH中肝细胞坏死、变性在多出现在Zone3部分，当与其对应的部位的细胞外周纤维化(类洞区纤维化)、静脉外周纤维化(肝静脉外周纤维化)或病态加深时，门静脉区纤维化按照其程度用0-4阶段来评价。此外综合地分类为阶段l:以Zone3为中心，部分或广泛地存在血管外周/窦状小管外周/细胞外周纤维化；阶段2:在阶段l的基础上，部分或广泛地存在门静脉区纤维化；阶段3:部分或广泛地存在桥接纤维化；阶段4:肝硬化。由于肝活检组织切片用苏木精-伊红染色处理后，细胞肿大为气球状，故以视野内观察到的细胞数为基准对肝细胞变性进行评价。(非专利文献11)专利文献l:WO03/099332号小册子非专利文献l:Gastroenterology1161413-1419,1999非专利文献2:ShimadaMetal.JournalofHepatology37154-160，2002非专利文献3:RatziuVetal.Hepatology351485-1493，2002非专利文献4:WanlessIRetal,Hepatology121106-11101990非专利文献5:DayCPetal.Gastroenterology114842-845,1998非专利文献6:MarchesiniGetal.Lancet358893-8942001非专利文献7:PromratKetal.Hepatology39188-1962004非专利文献8:Neuschwander誦TetriBAetal.Hepatology381008-10172003非专利文献9:KhaliliKetal.AJRAmJRoentgenol.1801601-16042003非专利文献10:MoritaYetal.Hepato國Gastorenterology521338-1343,2005非专利文献11:BruntEMetal.AmJGastroenterol.199994:2467-247
因此本发明的目的是提供预防、改善或治疗肝纤维化的医药组合物。本发明的目的也包括提供预防、改善或治疗肝细胞变性的医药组合物。本发明的目的还包括提供预防、改善或治疗肝硬化的医药组合物。本发明人，对糖尿病并发NASH的患者进行那格列奈给药后，对每一例的糖尿病改善效果和肝的炎症、变性、纤维化的改善效果作出比较，令人吃惊的是，发现即便是在糖尿病症状没有改善的病例当中，也产生了肝的炎症、变性、纤维化的改善，据此完成了本发明。NASH的病例包括未见糖代谢的病例、出现胰岛素抵抗的病例、出现耐糖量异常的病例，进一步地包括初期、中期、末期糖尿病。目前为止，虽然那格列奈被认为仅适用于耐糖量异常、胰岛素分泌延迟、饭后高血糖、初期糖尿病，但是本发明的发现表明，那格列奈可适用于糖尿病指标未被那格列奈等速效型胰岛素分泌促进剂改善的病例、或不能由胰脏有效分泌胰岛素的末期糖尿病患者的NASH的治疗。进一步地，本发明的发现还表明，不？1起速效型胰岛素分泌的低浓度的那格列奈直接作用于肝，有可能抑制、预防、改善或治疗包括具有高度胰岛素抵抗的患者、胰脏不能有效分泌胰岛素的末期糖尿病患者在内的所有患者的肝组织炎症、肝变性、肝纤维化。即本发明提供预防、改善或治疗肝纤维化的医药组合物，其特征在于含有格列奈类、优选含有那格列奈。本发明也提供预防、改善或治疗肝细胞变性的医药组合物，其特征在于含有格列奈类、优选含有那格列奈。本发明还提供预防、改善或治疗肝硬化的医药组合物，其特征在于含有格列奈类、优选含有那格列奈。本发明进一步提供格列奈类优选为那格列奈来的用途，以制备预防、改善或治疗肝纤维化、肝细胞变性或肝硬化的医药组合物。根据本发明，可提供在预防、改善或治疗肝纤维化、肝细胞变性或肝硬化中有用的医药组合物。作为格列奈类，那格列奈特别有用。具体实施例方式在本"i兑明书中，才各歹廿奈类为(HormoneandMetabolicResearch,vol.27，pp.263-266,1995)中所述的与美格列奈结构相似的化合物，可以举出优选为下述化学式所示的(-)-N-(反-4-异丙基环己烷羰基)-D-苯丙氨酸(称为"那格列奈")等的D-苯丙氨酸衍生物；(2S)-2-苯甲基-4-[(3aR，7aS)-八氢-2H-异吲哚-2-基]-4-氧代丁酸(称为"KAD-1299")等的千基琥珀酸衍生物；和(S)-2國乙氧基-4{2-[[3-甲基-1-[2-(l-哌啶基)苯基]丁基]氨基]-2-氧代乙基}苯甲酸(称为"瑞格列奈")等的苯曱酸衍生物，更优选为美格列奈、那格列奈、KAD-1229、瑞格列奈。ci.本发明中，上述格列奈类可单独使用，或以与至少一种选自降血糖药、高脂血症治疗药、降压药、抗氧化剂、保肝药及抗炎药的組合的形式来使用。此处，作为降血糖药，可以举出例如如胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素的胰岛素衍生物；如甲苯磺丁脲、格列齐特、格列本脲、格列美脲的磺酰脲类药；如阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇的oc-葡萄糖苷酶抑制剂；如二甲双胍、苯乙双胍的双胍类药；如吡格列酮、罗格列酮、曲格列酮的遙唑烷类或如GI-262570、JTT-501、YM-440、丽-622、KRP-297的含非p塞唑烷骨架的PPARy激动剂、拮抗剂的胰岛素抵抗改善剂；如AJ-9677的肾上腺素p3受体激动剂；如CLX-0901的类胰岛素激动剂；如GLP-l、醋酸艾塞那肽、NN-2211的GLP-1激动剂；如DPP-728A的DPPIV抑制剂；如T1095的SGLT抑制剂；或ACC抑制剂。此外，作为降低血中脂质的高脂血症治疗药可以举出例如如普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、阿托伐他汀、伊他伐他汀的HMG-CoA还原酶抑制剂；如双贝特、氯贝特、克利贝特、苯^L贝特、非诺贝特的贝特类药物；如考来替兰、考来烯胺的阴离子交换树脂；如尼可莫尔、戊四烟酯的烟酸制剂。作为降压药，可以举出例如血管紧张素转换酶抑制剂、钓离子通道拮抗剂、血管紧张素受体抑制剂等。作为抗氧化剂，可以举出例如维他命C、维他命E等的维他命类；N乙酰半胱氨酸、普罗布考、二十碳五烯酸及其酯等。作为保肝药，可以举出例如熊去氧胆酸、甜菜碱。进一步地作为抗炎药，可以举出例如己酮可可碱、抗TNF抗体等的细胞因子生成抑制剂。通过与上述药物的组合使用，可以进一步增强本发明的效果。该组合，既可以是一个医药组合物中两者同时含有的形式，也可以是分别含有各自成分的两个医药组合物同时或稍微间隔地给药的形式。医药组合物中的格列奈类和至少一种选自降血糖药、高脂血症治疗药、降压药、抗氧化剂、保肝药及抗炎药的药物的量可为任意的，格列奈类的含量优选为0.1-99重量％、至少一种选自降血糖药、高脂血症治疗药、降压药、抗氧化剂、保肝药及抗炎药的药物的含量优选为1-99.9重量％。此外，本发明的医药组合物中，除了上述成分，可含有可药用的各种制剂用物质(作为辅剂)(以下，称为"制剂学上允许的载体")。制剂用物质可根据制剂的剂型来适当地选择，例如可举出赋形剂、稀释剂、添加剂、崩解剂、粘合剂、包衣剂、润滑剂、光滑剂、增滑剂、矫味剂、甜味剂、增溶剂等。进一步地，作为制剂用物质的具体示例，可举出碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露醇及其它糖类，滑石、牛乳蛋白、明胶、淀粉、纤维素及其衍生物，动物及植物油，聚乙二醇，及溶剂、例如灭菌水和一元或多元醇、例如甘油。本发明的医药组合物，特别对在对糖尿病患者中进行格列奈类给药也未改善其糖尿病的患者的肝纤维化、肝细胞变性的预防、改善、治疗等有效，对于抑制向肝硬化发展有效。本发明的医药制剂的形式可制备为，例如口服给药、腹腔内给药、透皮给药、吸入给药等各种给药形式。具体地，可举出适当的固体或液体的制剂形态，例如颗粒、粉剂、包衣片剂、片剂、(微)胶嚢、栓剂、糖浆、果汁、悬浮液、乳液、滴剂、注射用溶液、延长活性物质释放的制剂等。对于本发明的药物中使用的格列奈类(有效成分)的给药量，按照格列奈类的种类、合并症的种类、合并症或神经障碍的症状的程度、制剂的形态、副作用的有无或其程度等来进行适当地选择。例如，制成以那格列奈作为有效成分的制剂时，按口服给药对患者每天，以那格列奈的净含量计优选为10mg-10g左右、更优选为30mg-lg左右、进一步优选为90-270mg左右。此外，对重症可进行进一步增量。对于给药的次数、时间，可以按数日1次或1日l次，但通常按每日数次，例如分为2-4次，优选为饭前进行给药。另外，静脉给药等非口服给药时，与上述口服给药相比给药量可以为1/10-1/20左右。此外，与至少一种选自降血糖药、高脂血症治疗药、降压药、抗氧化剂、保肝药及抗炎药的药物混合或组合使用时，对于这些药物的给药或使用量，作为所用该血糖药、高脂血症治疗药、降压药、抗氧化剂、保肝药及抗炎药，或者具有效果的药物，可按照已开发的或正在开发等其他已知的每个药物的有效量，来决定适当的使用量或给药量。实施例以腹部超声波诊断或腹部CT检查中具有脂肪肝特征；各种病毒标志物和自身抗体检查为阴性；可排除饮酒经历、药物经历；肝活检中按Bmnt标准(AmJGastroenterol.199994:2467-2474)诊断为NASH;此外食物运动疗法不能获得治疗效果的诊断为糖尿病的5例患者为对象。同时，试验方法通过了临床设施的伦理审查，并获得了所有受试者的知情同意。对这5位患者，按照卯mg、1日3次饭前口服，进行16周那格列奈给药。在第0周和第12周或16周，作为糖尿病的指标，对空腹血糖值，耐糖量试验2小时的血糖值、血红蛋白Alc值、作为肝评价的基于CT的肝/脾比的脂肪肝的程度、对肝活检组织进行组织学解析的肝细胞的细胞变性、细胞外周纤维化、静脉外周纤维化、门静脉区纤维化等进行了评分(BruntEMetal.AmJGastroenterol.199994:2467-2474)。那格列奈给药前的指标如表1所示。那格列奈给药后的指标如表2所示。第0周和第12周的各项指标的变动值A(给药前-给药后)如表3所示。表-1那格列奈给药前的测定指标<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表_2那格列奈给药后的测定指标<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表-3给药前后的测定指标变化△:给药前-*会药后<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>在由那格列奈的给药而确认的糖尿病指标有改善效果的病例中，观察到了脂肪肝、肝细胞的细胞变性、细胞外周纤维化、静脉外周纤维化、门静脉区纤维化的改善。在确认糖尿病指标的未^皮改善的病例中，观察到了脂肪肝的改善效果弱，可认为脂肪肝的改善效果与糖尿病的改善效果相对应。另一方面，在该确认糖尿病指标未^皮改善的病例(1，3)中也观察到了与糖尿病指标有改善效果的病例同程度的肝细胞的细胞变性、细胞外周纤维化、静脉外周纤维化、门静脉区纤维化的改善。权利要求1.预防、改善或治疗肝纤维化的医药组合物，其特征在于含有格列奈类。2.如权利要求1所述的医药组合物，其中，格列奈类选自美格列奈、那格列奈、KAD-1229和瑞格列奈。3.如权利要求2所述的医药组合物，其中，格列奈类为那格列奈。4.如权利要求l-3任意一项所述的医药组合物，所述医药组合物给药于糖尿病患者。5.如权利要求4所述的医药组合物，所述医药组合物给药于格列奈类给药未使糖尿病改善的患者。6.制备预防、改善或治疗肝纤维化的医药组合物的格列奈类的用途。7.预防、改善或治疗肝细胞变性的医药组合物，其特征在于含有格列奈类。8.如权利要求7所述的医药组合物，其中，格列奈类选自美格列奈、那格列奈、KAD-1229和瑞格列奈。9.如权利要求8所述的医药组合物，其中，格列奈类为那格列奈。10.如权利要求7-9任意一项所述的医药组合物，所述医药组合物给药于糖尿病患者。11.如权利要求IO所述的医药组合物，所述医药组合物给药于格列奈类给药未使糖尿病改善的患者。12.制备预防、改善或治疗肝细胞变性的医药组合物的^^列奈类的用途。13.预防、改善或治疗肝硬化的医药组合物，其特征在于含有格列奈类。14.如权利要求13所述的医药组合物，其中，格列奈类选自美格列奈、那格列奈、KAD-1229和瑞格列奈。15.如权利要求14所述的医药组合物，其中，格列奈类为那格列奈。16.如权利要求13-15任意一项所述的医药组合物，所述医药组合物给药于糖尿病患者。17.如权利要求16所述的医药组合物，所述医药組合物给药于^^各列奈类给药未使糖尿病改善的患者。18.制备预防、改善或治疗肝硬化的医药组合物的^^列奈类的用途。全文摘要本发明提供预防、改善或治疗肝纤维化、肝细胞变性或肝硬化的医药组合物，其特征在于含有那格列奈等的格列奈类。文档编号A61K31/185GK101378745SQ20078000479公开日2009年3月4日申请日期2007年2月8日优先权日2006年2月8日发明者上野隆登,佐田通夫,冈野明,森田恭代申请人:学校法人久留米大学;味之素株式会社