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一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具制作方法

  • 专利名称
    一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具制作方法
  • 发明者
    于丛一, 关蕾, 朱海
  • 公开日
    2012年11月7日
  • 申请日期
    2011年12月29日
  • 优先权日
    2011年12月29日
  • 申请人
    深圳市易瑞生物技术有限公司
  • 文档编号
    A01N1/02GK202514485SQ2011205647
  • 关键字
  • 权利要求
    1.本实用新型涉及一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其包括插杆和护套,所述插杆是由把手、插接体、载体组成的一体化直杆结构;护套为一端密封、另一端开口的管状结构;所述护套套在插接体和载体外部;插接体与把手相接的一端与护套开口的一端紧密接触,将载体密封在套管内部;载体上有一个或多个直径在0.之间的凹陷,每个凹陷都有一条宽0. l-2mm之间、长Imm-IOmm之间的凹槽或缝隙与之贯通;护套与插接体紧密接触的方式可以是螺纹、收缩锥度、环形凸起中的一种或两种2.如权利要求I所述的生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是制作插杆和护套的材料可以用金属或非金属材料,还可以同时采用金属和非金属材料3.如权利要求I所述的生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是插杆和护套可以采用不同颜色的材料制备4.如权利要求I所述的生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是护套的材质可以是透明、半透明或不透明材料
  • 技术领域
    本发明涉及生物医学领域,具体涉及一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具
  • 背景技术
  • 专利摘要
    本实用新型属于生物医学领域,具体涉及一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其包括插杆和护套,所述插杆主体是由把手、插接体、载体组成的一体化直杆结构。护套为一端密封、另一端开口的管状结构,插接体与把手相接的一端与护套开口的一端紧密接触,将载体密封在套管内部。本实用新型具有升降温速度快、结构简单、使用方便、无污染、生物材料不宜丢失等特点,是一种理想的生物材料玻璃化冷冻保存承载工具。
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具的制作方法玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,可避免冻融过程中细胞内冰晶的形成,最大限度地降低细胞的损伤。自1998年Mukaida等首次报道应用玻璃化冷冻保存人类卵裂期胚胎获得临床妊娠以来,玻璃化冷冻技术已成功应用于成熟卵母细胞、未成熟卵母细胞、精子及胚胎的各个发育时期的冷冻保存,并陆续有健康婴儿出生的报道。Shaw等通过对小鼠胚胎冷冻方法的研究发现,玻璃化冷冻法明显优于慢速程序化冷冻法。Lin等对临床患者的研究发现,使用玻璃化冷冻方法患者的胚胎存活率、胚胎种植率及临床妊娠 率明显高于程序化冷冻者,结果具有统计学意义。Asimakopoulos等研究发现,未成熟卵通过玻璃化冷冻在解冻后能够成熟并受精,而且它所受精产生的胚胎也能玻璃化冷冻,解冻后的胚胎也可获得临床妊娠。玻璃化冷冻技术具有操作简单、迅速、快捷等优点,已逐渐成为人类辅助生殖技术中重要的应用技术之一。胚胎的玻璃化冷冻就是将胚胎在适当的冷冻保护液中做短暂处理,然后直接投入到液氮中,使胚胎呈现一种玻璃化状态。胚胎细胞内的水分含量达80%以上,在冷冻过程中会有90%的水分形成游离水而冻结成冰晶,可以破坏蛋白质结构并发生不可逆的变化,从而导致胚胎细胞的死亡。在冷冻过程中可能会发生(I)降温速度过慢,胞质内水分有足够的时间渗出,并在胚胎外冻结;(2)降温速度过快,胞质内的大部分水分来不及渗出而在细胞内冻结,这样容易形成大的冰晶,使细胞受到致死性损伤。因此,在这个过程中需注意的事项主要有(I)冷冻速度,避免细胞内、外液体冰晶化;(2)冷冻保护剂的浓度;(3)降低高浓度保护剂的毒性,尽量缩小体积(< I Ul)。总言之,影响胚胎玻璃化冷冻存活率的主要因素有(I)冷冻保护剂的种类与浓度;(2)冷冻过程中玻璃化液的温度;(3)放入液氮前胚胎在玻璃化液中停留的时间;(4)玻璃化冷冻载体;(5)胚胎的质量与发育阶段。为了减少冷冻过程中对胚胎的损伤,提高冷冻效果,必须减少冷冻保护剂的体积。同在对玻璃化冷冻的不断研究中,研究者们不断改进冷冻方法和冷冻载体,并获得了较高的冷冻速度。这些冷冻方法和载体主要有传统细管法、半细管法(hemi-straw)、开放式拉长细管法(0PS)、冷冻帽法(Cryotop、金属筛网玻璃化法(MMV)、固体表面玻璃化法(SSV)、冷冻环法(Cryloop)、平皿玻璃化冷冻(plastic plate vitrification, PPV)、微滴法(Microdrop)、微细玻璃管法(GMP)、尼龙过滤网法(Nylon mesh)。这些方法所采用的冷冻载体要么导热性差,升降温速度慢(如传统细管法),要么易污染(如0PS),要么易丢失(如Cryloop)、有毒性(如PPV),要么价格昂贵(如Crytop)。在我国,目前已有的玻璃化冷冻载体,如中国专利公开号CN10386814A公开了一种生物材料玻璃化冷冻载体及其制备方法,其包括注射针头和麦片;所述的注射针头有针头和针头座组成;所述麦片为开放型拉细麦管,其一端套设于所述针头的内腔中;另一游离端的麦管壁缺失,余留麦管壁的横截面为圆周的1/5-1/3。其不足之处是存在潜在的生物污染。又如中国专利公开号CN101779623公开了一种冷冻网,该冷冻网由网体的网柄两部分组成。将胚胎置于冷冻网上,然后再直接置于液氮中保存,该方法虽然简便,但是不能解决无污染和生物样本的丢失问题。又如中国专利公开号CN201148434Y公开了一种以两端粗中间细的麦管作为玻璃化冷冻的载体。该方法需要将两端进行封闭,操作起来有些复杂。又如中国专利公开号CN201222947Y公开了一种针刺式组织片冷冻载体,由冻存管和针刺装置组成。该装置可将多个组织片穿在针上,然后进行玻璃化冷冻保存,该方法降温速度快,但是不适合胚胎操作。又如中国专利公开号CN101200706A公开了卵子和胚胎等生物样品玻璃化冷冻和保存工具,包括麦管和护套管,护套管套设在麦管上。麦管中部为纤细薄壁管,纤细薄壁管长度为20-30mm,直径为0. 3-0. 35mm ;护套管中部两侧对称设有内凹窗口。该麦管工具用于卵子或胚胎以及其他细胞的玻璃化冷冻保存,可使生物样品不直接暴露于液氮以防止潜在的生物污染危险。又如中国专利公开号CN201158654Y公开了一种玻璃化冷冻细胞承载器,包括管体,管体的一端设置有注射器连接管,注射器连接管内设置有棉塞。又如中国专利公开号CN201284339Y公开了一种由注射针头和麦片组成的玻璃 化冷冻载体。又如中国专利公开号CN201379022Y公开了一种由小圆环、滑动槽、小圆环的支撑结构、手柄、外管、保护帽和标记塞组成的玻璃化冷冻保存装置。又如中国专利公开号CN102204527A公开了一种由插杆主体和护套组成的玻璃化冷冻保存载体,在其插杆末端的载体上有一通孔,用于生物样本的聚集和快速冷冻。又如中国专利公开号CN201617121U公开了一种由管状手柄和承载部组成的玻璃化冷冻载体。又如中国专利公开号CN201789875U公开了一种蛇形管玻璃化冻存管,适用于大规模干细胞玻璃化冻存管。又如中国专利公开号CN201830802公开了一种由冷冻管、设置在冷冻管上的洗液头、以及陶灶冷冻管和洗液头外部的保护套管组成。发明内容本实用新型拟提供一种胚胎玻璃化载体,该工具具有升降温速度快、结构简单、使用方便、无污染、生物材料不宜丢失等特点。本实用新型涉及一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其包括插杆和护套,所述插杆是由把手、插接体、载体组成的一体化直杆结构。护套为一端密封、另一端开口的管状结构。所述护套套在插接体和载体外部。插接体与把手相接的一端与护套开口的一端紧密接触,将载体密封在套管内部。如上所述的玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是其载体的上有一个或多个直径在0.之间的凹陷,每个凹陷都有一条宽0. l_2mm之间、长Imm-IOmm之间的凹槽或缝隙与之贯通。如上所述的玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是护套与插接体紧密接触的方式可以是螺纹、收缩锥度、环形凸起中的一种或两种。如上所述的玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是制作插杆和护套的材料可以用金属或非金属材料,还可以同时采用金属和非金属材料。如上所述的玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是插杆和护套可以采用不同颜色的材料制备。如上所述的玻璃化冷冻保存承载工具,其特征是护套的材质可以是透明、半透明或不透明材料。本实用新型由于插杆主体与护套之间紧密相接,实现了密封的效果,避免了生物样品被液氮中的物质所污染。与凹陷想通的凹槽通过毛细作用将生物材料聚集到凹陷中,有利于材料的存放和查找。本实用新型结构合理、使用方便,是一种理想的生物材料玻璃化冷冻保存承载工具。以下结合附图对本实用新型做进一步说明。图I是本实用新型插杆的正面视图。图2是本实用新型插杆的侧面视图。图3是本实用新型插杆的右为背面视图。图4是本实用新型套管的结构示意图。图5是本实用新型的结构示意图。图6是本实用新型插杆A部的放大示意图。图中I :插杆;2 :护套;3 :把手;4 :插接体;5 :载体;6 :凹陷;7 :凹槽。从图I、图2、图3、图4可以看出,一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具,其包括插杆I和护套2,所述插杆由把手3、插接体4、载体5组成,把手3、插接体4、载体5依次相接,呈直杆分布。护套2是一端封闭一端开口的麦管。在载体5上有I个凹陷6与一个凹槽贯通,便于保存生物材料。本实用新型使用方法是1)在插杆主体I的把手上标记欲玻璃化冷冻保存的样本信息;2)将套管2置于液氮中;3)将插杆I的凹陷6置于显微镜视野内,通过微管将生物样本注入以凹陷6为中心的载体5上;4)用吸水材料吸走多余的液体;5)将插杆I的载体5端插入液氮中冷冻生物材料;6)用镊子夹起液氮中的套管2,套在插杆I上,拧紧,整个过程套管2和载体5始终浸没于液氮之中;7)迅速置于液氮罐中长时间保存。




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