专利名称：协同抗病毒组合物及其应用的制作方法在结构上，角叉菜胶是由重复的半乳糖相关单体单元构成的多糖的复杂集群。当前，辨别出三大类型的角叉菜胶，即，λ、K和t角叉菜胶。t -和K -角叉菜胶针对正粘病毒科、副粘病毒科和冠状病毒科的抗病毒作用之前已描述于W02009/027057中。t -和κ -角叉菜胶针对鼻病毒感染的抗病毒作用之前已 描述于W02008/067982中。已经显示这些聚合物可用于制备适于递送至呼吸道的黏膜的抗病毒药物组合物。神经氨酸酶抑制剂的治疗性应用广泛地描述于文献中。如Burch等(LancetInfect Dis.2009 Sep;9 (9) :537-45)所综述的，神经氨酸酶抑制剂的总的益处主要见于被流感病毒感染的成人中出现感染的第一症状与症状开始减轻之间所经历的平均时段的缩短。例如，对非风险成人组的感染患者，即不属于YOPI组(YOPI=青年、老年、孕妇、免疫缺失的(immunocompromised))的成人,施用抗病毒药物扎那米,(zanamavir)可以将实现可检测的症状减轻所经历的时间间隔的中值减少O. 57天，而施用替代药物奥司他韦(oseitamivir)实现减少O. 55天。当对YOPI组的个体(即，一旦病毒感染则患病风险增加的人)施用时，据报道在使用扎那米韦时直至检测到症状减轻的时间中值减少O. 98天，在使用奥司他韦时减少O. 74天。这些数据表明，治疗策略存在改善的余地和需求。根据TAMIFLU (奥司他韦)和RELENZA (扎那米韦)的市售包装中包含的处方信息，活性成分被指明用于治疗已出现症状不超过2天的患者中因流感病毒感染引起的没有并发症的急性病。因此，对于已出现症状超过2天的患者，目前似乎尚不能实现有效的治疗性治疗。此外，病毒对目前可获得的FDA批准的抗流感病毒药物的耐受性的频率日益增カロ，进ー步强调了迫切需求可用于抗击未来的流感病毒流行病或大流行病的改进的抗病毒化合物(Ludwig S. ; J Antimicrob Chemother. 2009 Jul; 64 (I) : 1-4.)。
因此，在权利要求书中规定的本发明的一个目标是为预防性治疗或治疗性治疗流感病毒感染提供有效的策略，克服上述缺点并且即使对于缓解出现症状2天以上的患者中的感染相关症状也是优选的。已经令人^(奇地发现，t -和/或K -角叉菜胶与如奥司他韦(TAMIFLU )或扎那米韦(RELENZA )等神经氨酸酶抑制剂的组合应用表现出协同治疗作用，即，在流感病毒感染过程中有疗效的作用或症状缓解作用与在単独施用时每ー种上述化合物的相应作用相比得到实质上改进。此外，还已令人惊奇地发现，^ -和/或K-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的组合为患者提供了另外的益处。与之前的观察相反，通过经验证的定量实时PCR程序确定，超过一半的诊断为上呼吸道感染的个体(42个儿童中有24人)被甲型流感病毒或こ型流感病毒感染并且另外被至少ー种其他呼吸道病毒感染。因此，可以得出下述结论仅靶向ー种病毒的治疗只能取得有限的成功。相反，I -和/或K-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂一起的组合治疗非常可能不仅对于流感病毒有效，还对引起共感染的呼吸道病毒有效，所述呼吸道病毒优选选自由鼻病毒、冠状病毒和副粘病毒组成的组。因此，在第一示例性实施方式中本发明涉及在组合预防性治疗或治疗性治疗由流感病毒感染所引起的或者与流感病毒感染相关的症状、病症或疾病中用作药剂的I -和/或K-角叉菜胶以及神经氨酸酶抑制剂，所述症状、病症或疾病可选地包括由至少ー种其他呼吸道病毒的共感染引起的此类症状、病症或疾病，所述其他呼吸道病毒通常选自由鼻 病毒、冠状病毒和副粘病毒组成的组。在另ー个方面中，本发明涉及用于此类应用的^ -和/或K-角叉菜胶以及神经氨酸酶抑制剂，其中流感病毒为甲型流感病毒或こ型流感病毒。在另ー个方面中，本发明涉及用于上述应用的^ -和/或K-角叉菜胶以及神经氨酸酶抑制剂，其中副粘病毒为呼吸道合胞病毒、偏肺病毒(metapneumovirus)或副流感病毒。神经氨酸酶抑制剂可以选自但不限于由扎那米韦、奥司他韦、帕拉米韦(peramivir)和拉尼娜米,(Ianinamivir)组成的组。在另ー个方面中，本发明涉及用于此类应用的^ -和/或K-角叉菜胶以及神经氨酸酶抑制剂，其中神经氨酸酶抑制剂为扎那米韦或奥司他韦。市售的TAMIFLU 包含磷酸奥司他韦，其为活性代谢物羧酸奥司他韦的前体药物，并且特别适于ロ服施用。当要根据本发明进行鼻内施用时，活性形式羧酸奥司他韦可以代替磷酸前体药物形式使用。因此，除非另有明确声明或者除非可由公开内容得到不同含义，否则本文中所使用的术语“奥司他韦”是指羧酸奥司他韦或磷酸奥司他韦。所要预防、治疗或减轻的病症或疾病主要选自由急性支气管炎、慢性支气管炎、鼻炎、鼻窦炎、假膜性喉炎(croup)、急性细支气管炎、咽炎、扁桃体炎、喉炎、气管炎、哮喘和肺炎组成的组，而所述要预防、治疗或减轻的症状选自由发烧、疼痛、头晕、发抖(shivering)、出汗和脱水组成的组。小鼠模型中的实验数据表明，I -和/或K -角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的协同作用提供了较长的治疗时间窗，所述治疗时间窗的开放超过了出现感染的第一症状之后仅48小时的当前可用治疗时间窗，后者如关于上述市售神经氨酸酶抑制剂药物的施用所报道。本发明首次使得即使在症状第一次出现起即使超过2天的时段之后也可以成功地治疗患病的患者。因此，本发明还涉及t -和/或K-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂用于上述目的的组合应用，其中在感染后24小时以上开始药物治疗。在另ー个方面中，本发明涉及用于上述应用的^ -和/或K-角叉菜胶以及神经氨酸酶抑制剂，其中，在感染后48小时以上开始施用含有角叉菜胶组分和神经氨酸酶抑制剂组分的药剂，所述角叉菜胶组分和神经氨酸酶抑制剂组分在単一药物组合物中是分开的或混合在一起的。在另ー个实施方式中，本发明涉及用于制造药物组合物或试剂盒的I-和/或K -角叉菜胶以及神经氨酸酶抑制剂，所述药物组合物或试剂盒适于组合预防性治疗或治疗性治疗由流感病毒感染所引起的或者与流感病毒感染相关的症状、病症或疾病。在另ー实施方式中，本发明涉及一种用于预防性或治疗性干预或治疗由流感病毒感染或至少ー种其他呼吸道病毒共感染所引起的或者与流感病毒感染或至少ー种其他呼吸道病毒共感染相关的症状、病症或疾病的方法，所述呼吸道病毒通常选自由鼻病毒、冠状病毒和副粘病毒组成的组，所述方法包含对处于所述感染和/或共感染风险或者遭受所述感染和/或共感染的个体施用抗病毒有效量的^ -和/或K-角叉菜胶与抗病毒有效量的神经氨酸酶抑制剂的组合。在另ー个方面中，本发明涉及所述方法，其中神经氨酸酶抑制剂选自由扎那米韦、奥司他,、帕拉米,和拉尼娜米,组成的组。 在另ー个方面中，本发明涉及所述方法，其中在感染后24小时以上开始施用I -和/或K-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的组合。在另ー个方面中，本发明涉及所述方法，其中在感染后48小时以上开始施用I -和/或K-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的组合。本发明的组合治疗的药物剂量単位可以通过任何合适的途径施用，其包括但不限于ロ服、吸入或鼻内施用，或者ロ服、吸入和鼻内施用的任意組合。在另ー个方面中，本发明涉及所述方法，其中施用通过ロ服、吸入或鼻内施用或者其任意组合完成。在另ー个方面中，本发明涉及所述方法，其中神经氨酸酶抑制剂以液体药物组合物提供并且ロ服施用，而角叉菜胶化合物以液体溶液提供并且鼻内施用，所述鼻内施用可选地通过喷射施用。在另ー个方面中，本发明涉及适于针对流感病毒感染的预防性或治疗性应用的药物组合物，所述药物组合物包含抗病毒有效量的^ -和/或K-角叉菜胶和抗病毒有效量的神经氨酸酶抑制剂。已经发现，ロ服施用的奥司他韦的活性代谢物的绝对生物利用度在小鼠模型中为约80%。活性代谢物可在施用后30分钟内在鼠类血浆中检测到，并在药物施用3 4小时后达到最大浓度。但是，已经发现，ロ服施用的扎那米韦的绝对生物利用度非常低，即，平均仅为约2%。在鼻内应用或口腔吸入扎那米韦之后，所施用的剂量被全身吸收的的中值为10% 20%，通常在施用后I 2小时内达到最大血清浓度。因为包含神经氨酸酶抑制剂以及^ -和/或K -角叉菜胶的液体溶液的粘度比不具有角叉菜胶化合物的液体溶液高，所以神经氨酸酶抑制剂对于黏膜的滞留时间增加，由此身体的全身吸收得到改善。因此，包含神经氨酸酶抑制剂以及^ -和/或K-角叉菜胶的液体溶液的鼻内施用不仅提供了在作为病毒复制的主要位置的鼻腔中使用神经氨酸酶抑制剂(即，扎那米韦，或奥司他韦的活性代谢物)直接治疗个体的可能性，还使得可以通过施用较低量的所述药物来获得神经氨酸酶抑制剂的必要的全身药物浓度。在另ー个方面中，本发明涉及此类药物组合物，其包含神经氨酸酶抑制剂以及I -和/或K-角叉菜胶，所述药物组合物适合作为喷鼻剂。当前可获得扎那米韦非ロ服制剂，这ー情况引起了目前需要吸入的药剂销售较差。使抗病毒有效量的扎那米韦包括在包含I -和/或K-角叉菜胶的喷鼻制剂中，引起了扎那米韦的局部和全身效用与t -和/或K-角叉菜胶的抗病毒作用联合，由此引起扎那米韦的抗流感治疗性作用的显著改善。在另ー个方面中，本发明涉及此类药物组合物，其中所述神经氨酸酶抑制剂为扎那米韦。在另ー个方面中，本发明涉及此类药物组合物，其中所述神经氨酸酶抑制剂为奥司他韦，特别是羧酸奥司他韦。在另ー个方面中，本发明涉及适于预防性治疗或治疗性治疗流感病毒感染的的试 体的第一容器，和含有抗病毒有效量的神经氨酸酶抑制剂和药学上可接受的载体的第二容器，以及优选的包括关于所述抗病毒有效组分的组合应用的说明的药品说明书(packageinsert)。根据本发明的K -和t -角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的组合的有效剂量可以包括下述常用药物剂量単位，所述常用药物剂量単位含有剂量通常为O. 01mg/kg/日 IOmg/kg/日(奥司他,)或0.01mg/kg/日 lmg/kg/日(扎那米,)的神经氨酸酶抑制剂和剂量为O. I μ g/kg/日 50 μ g/kg/日、优选2 μ g/kg/日 35 μ g/kg/日且最优选8 μ g/kg/日 25 μ g/kg/日的角叉菜胶聚合物的组合。所述聚合物剂量通过鼻内或通过吸入供给,通常姆次应用100 μ I 400 μ I。例如，含有浓度为2400 μ g/ml的κ -和t -角叉菜胶的组合产品通过每个鼻孔喷140 μ I、每日三次来应用。这对应于每日剂量为2016 μ g/日或者近似27 μ g/kg/日。本发明将通过以下附图和实施例进ー步说明，但不限于这些附图和实施例。图I显示了使用t -角叉菜胶和Tamiflu 的组合治疗对于感染有流感病毒的小鼠的存活率的作用；在感染后2天开始抗病毒治疗。纵坐标=小鼠存活率);横坐标=感染后的天数。空心菱形=阴性对照(安慰剂)；每个鼻孔使用25μ1 O. 5% NaCl溶液鼻内治疗，黑色方形=使用I -角叉菜胶治疗，黑色圆形=使用TAMIFLU 治疗，黑色三角形=使用I -角叉菜胶和TAMIFLU 的组合治疗。图2显示了当在感染后I天开始治疗时^ -角叉菜胶和Tamiflu 的组合治疗对于感染有流感病毒的小鼠的重量的作用。纵坐标=小鼠的平均重量(g);横坐标=感染后的天数。空心圆形=阴性对照(安慰剂)，每个鼻孔使用25 μ I O. 5% NaCl治疗；黑色方形=使用I -角叉菜胶治疗，黑色圆形=使用TAMIFLU 治疗，黑色三角形=使用I -角叉菜胶和TAMIFLU 的组合治疗。图3显示了 t -角叉菜胶和奥司他韦的组合治疗对于感染有流感病毒的小鼠的存活率的作用；在感染后2天开始抗病毒治疗。
纵坐标=小鼠存活率);横坐标=感染后的天数。黑色圆形=阴性对照(安慰剂);每个鼻孔使用25μ I O. 5 % NaCl溶液鼻内治疗，黒色方形=使用奥司他韦治疗，黒色菱形=使用I -角叉菜胶治疗，黒色三角形=使用
I -角叉菜胶和奥司他 韦的组合治疗。图4显示了 t -角叉菜胶、K -角叉菜胶和扎那米韦的组合治疗对于感染有流感病毒的小鼠的存活率的作用；在感染后2天开始抗病毒治疗。纵坐标=小鼠存活率);横坐标=感染后的天数。黑色圆形=阴性对照(安慰剂)，每个鼻孔使用25 μ I 0.5% NaCl溶液鼻内治疗；黒色方形=使用扎那米韦治疗；黑色菱形=使用I -角叉菜胶和K -角叉菜胶的组合治疗；黒色三角形=使用I -角叉菜胶、K -角叉菜胶和扎那米韦的组合治疗。
实施例为了更好地理解本发明，提供以下实施例。但不应将其解释为在任何方面限制本发明。实施例I :在感染后48小时开始治疗的小鼠中I -角叉菜胶和TAMIFLU 的协同治疗作用。通过不施麻醉的鼻内滴注(i. η.)利用致死剂量(IOxLD5ci)的流感A/PR/8/34病毒感染40C57BI6小鼠。鼻腔感染后病毒扩散至呼吸道中，并且最終在小鼠中引起致死性肺炎。该模型模拟的是有时导致严重病症的经由呼吸道的人的自然流感感染。小鼠分为四组，每组10只小鼠。感染之后48小时，毎日两次不施麻酔的鼻内滴注对小鼠进行治疗，其中第一组使用安慰剂治疗(每个鼻孔25 μ I O. 5% NaCl水溶液)作为阴性对照，第二组只使用每个鼻孔25 μ I浓度为1200 μ g/ml的ι -角叉菜胶聚合物水溶液来治疗。第三组和第四组ロ服(per os) 10mg/kg/日TAMIFLU ，其中第三组另外鼻内接受上述浓度的ι -角叉菜胶聚合物，而第四组除ロ服施用Tamiflu 之外还接受鼻内安慰剂治疗。不施麻酔的治疗确保所施用的角叉菜胶聚合物不会到达肺部，因而使得可以测量聚合物对于呼吸道中病毒的传播的抑制作用。毎日确定动物的存活率，作为健康的替代參数。利用对数秩检验(log-rank test)评价存活的动物的数量差异。如图I所示，安慰剂治疗组(空心菱形)的所有小鼠在11天内均死亡。当使用ι -角叉菜胶(黒色方形，4/10=10只中有4只存活)或TAMIFLU (黒色圆形，3/10)治疗时，小鼠的存活率得到显著改善。然而，当使用ι -角叉菜胶与TAMIFLU (黒色三角形)组合治疗小鼠吋，10只动物中有6只幸免于致命性流感病毒感染而存活。考虑到小鼠模型对于抗流感药物的开发具有高预测性，则该结果证明，即使在治疗仅仅是在感染后48小时开始的情况中，在与t -角叉菜胶剂量的鼻内施用组合提供时ロ服TAMIFLU 剂量的治疗功效也可以得到显著提高。由于对于这种情况目前似乎还没有可用的治疗方案，因此这一点特别重要。实施例2 :在感染后24小时开始治疗的小鼠中ι -角叉菜胶和TAMIFLU 的协同治疗作用。由于对于TAMIFLU (磷酸奥司他韦)而言已知当在出现感染的第一症状之后24小时内开始治疗时治疗功效最佳，因此分析了与ι -角叉菜胶的组合治疗是否能够改善TAMIFLU 的治疗功效。由于使用TAMIFLU 治疗已经提供了对疾病的致命爆发的高度防护，因此将平均动物重量用作评价动物健康的替代參数。利用t检验来比较动物重量。实验如实施例I中所述进行，唯一的不同之处仅在于在感染后已达24小时开始治疗。如图2所示，所有动物都遭遇了因致命性流感病毒感染而造成的重量减轻。虽然使用TAMIFLU (黒色圆形)或t -角叉菜胶(黒色方形)作为唯一活性成分的治疗已经引起存活率的显著升高(參见实施例I)，但是在感染后已达24小时开始的治疗不能在第一个七天中提供有关重量减轻的显著益处。与此相反，如图中自第3天开始所观察到的，通过与安慰剂治疗(空心圆形)比较时重量减轻显著更小可以确定，使用TAMIFLU 和ι-角叉菜 胶(黒色三角形)的组合治疗引起了协同作用(Pmax〈0. 004)。另外，当与单独的TAMIFLU 相比时，在第2、3和4天TAMIFLU 和t -角叉菜胶的组合明显更佳，这表明了组合治疗相对于使用TAMIFLU 作为唯一活性物的单独治疗的治疗优越性。实施例3 :在感染后48小时开始治疗的小鼠中ι -角叉菜胶和奥司他韦的协同治
疗作用。如实施例I中所述完成小鼠的感染。小鼠分为四组，每组10只小鼠。感染之后48小时，毎日两次不施麻酔的鼻内滴注对小鼠进行治疗，其中第一组使用安慰剂治疗(每个鼻孔25 μ I O. 5% NaCl水溶液)作为阴性对照，第二组使用剂量为5mg/kg/日的奥司他韦ロ服治疗，第三组每个鼻孔使用25 μ I的浓度为1200 μ g/ml的ι -角叉菜胶聚合物水溶液治疗，并且第四组每日两次使用ι -角叉菜胶和奥司他韦的组合治疗，其中奥司他韦以5mg/kg/日的剂量ロ服施用，并且鼻内施用的^ -角叉菜胶的总量为100μ 1，其对应于毎日120yg的量。毎日确定动物的存活率，作为健康的替代參数。利用对数秩检验评价存活的动物的数量差异。如图3所示，与安慰剂(0/10)、单独使用奥司他韦的治疗(3/10)或单独使用ι -角叉菜胶的治疗(4/10)相比，当使用包含^ -角叉菜胶的鼻内施用和奥司他韦的ロ服施用的组合治疗来进行治疗时小鼠的存活率得到显著提高(6/10)。该结果证明，当与
ι -角叉菜胶的鼻内治疗组合时，使用奥司他韦在感染后48小时对小鼠的治疗可以得到显
著改善。实施例4:在感染后48小时开始治疗的小鼠中t -角叉菜胶、K -角叉菜胶和扎那米韦的协同治疗作用。如实施例3中所述进行实验，不同之处在于，利用鼻内施用的扎那米韦(0.5mg/kg/日)代替ロ服施用的奥司他韦，利用^ -角叉菜胶和K-角叉菜胶的组合代替単独的I -角叉菜胶(鼻内施用的角叉菜胶聚合物的总量为100 μ I，其对应于每日120 μ g的量)，组的大小为每组20只小鼠，并且所使用的水溶液中扎那米韦浓度为O. lmg/ml，其对应于每Ikg重量O. 5mg活性药物(每只小鼠的平均重量为约20g)。如图4中所示，与単独使用扎那米韦(7/20)、使用t -角叉菜胶和K-角叉菜胶的组合(3/20)或使用安慰剂(5/20)治疗相比，在使用^ -角叉菜胶、K-角叉菜胶和扎那米韦的三元组合治疗时小鼠的存活率得到显著的提高(13/20)。该结果证明，当与K -角叉菜胶和ι -角叉菜胶的混合物组合时，使用扎那米韦对小鼠的其他无效的鼻内治疗可以得到显著改善，表明即使在晚于感染后48小时开始治疗时也会获得积极的治疗結果。


本发明涉及在预防性治疗或治疗性治疗由流感病毒感染所引起的或与流感病毒感染相关的症状、病症或疾病中用作药剂的ι-和/或κ-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的组合。