专利名称：一种水产用复合微生态制剂及其预混料的制作方法随着水产养殖集约化程度不断提高，养殖水体的理化环境和生态环境日趋恶化； 同吋，人类生活污水、各种エ业废水、农业废水等超量排放，均加剧了养殖水体质量的下降； 这些问题造成养殖病害日趋严重；与此同吋，人们生活水平提高，食品安全意识的提高，以及加入WTO后对动物源产品的要求越来越规范，在生产和使用渔药时，必不可少地需要考虑该渔药是否符合食品安全要求，否则不能生产或使用，这是与过去的渔药生产与使用的最大区別。人们从过去只重视渔药的效果，而不顾及对环境的破坏、药残对人类健康的影响，到现在，美国和欧盟等国家和地区相继出台了相关法律限制一些渔药如孔雀绿和抗生素等在水产养殖上的应用，因此水产养殖必须提供安全、优质的无公害緑色的水产品是大势所趋。很多研究结果表明微生态制剂不仅能够降低水体的有机污染，浄化水体，还可以抑制杀死病原微生物，并可作为适量添加剂从而部分替代抗生素的使用。复合微生态制剂由于同时具有改善肠道内环境、增加进食、抑制有害菌群、改善水质等多方面的作用，越来越多的被人们应用到水产养殖业中。市场上已经存在多种能够在水质改良和预防疾病某一或者某些方面取得明显效果的复合微生态制剂，但是很多制剂仍存在菌种性能不稳定、功能単一和环境适应性能差等问题，使其不能适应水体复杂多变的环境，施于水体后效果不稳定，从而限制了微生态制剂在水产养殖上的推广应用。
本发明的目的是提供一种水产用复合微生态制剂，该制剂可作为水产用饲料添加剂，也可用于水产养殖水体浄化和调理，该制剂环境适应性强、功能稳定且能够有效降解水体中的氨氮、硝态氮、亚硝态氮和COD等污染物。本发明的目的是通过如下技术方案实现的本发明提供一种水产用复合微生态制剂，该制剂的主要成分为枯草芽孢杆菌 CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌 CGMCC No. 5094 和粪肠球菌 CGMCC No. 5092。其中，本发明制剂中枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094 和粪肠球菌CGMCC No. 5092的配比为1-5 1-5 2-7。进一歩，本发明制剂中枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽抱杆菌CGMCC No. 5094和粪肠球菌CGMCC No. 5092的配比为1 1 2。本发明的复合微生态制剂可制备成液态制剂或颗粒剂；所述的液态制剂为枯草芽孢杆菌CGMCC No. 46 的发酵液、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094的发酵液和粪肠球菌CGMCC No. 5092的发酵液的混合液；所述的颗粒剂为枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628的菌泥、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094的菌泥和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌泥分别与载体混合，制成颗粒剂。其中，所述的液态制剂PH为6. 4-7. 2，活菌数为1_2X 101(lCfu/ml。所述的载体为玉米淀粉、麦芽糊精、玉米芯粉、麦麸粉中的ー种或两种与石粉的混合，颗粒剂中的活菌数为3-4X101(lCfU/g。本发明还提供了ー种包含该水产用复合微生态制剂的预混料，其特征在于预混料中复合微生态制剂添加的重量百分比为1-10%。。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为申请人从牛肠道中分离、经定向初筛和复筛得到。其营养细胞杆状，其芽孢为椭圆或长筒形，为中生或次端生，孢囊稍膨大。孤立或呈短链，杆端半圆形。在1 2 16h内能形成菌落，菌落为圆形，或不规则，边缘毛发状，菌落白色，不透明，无褶皱。革兰氏阳性。申请人对此株地衣芽孢杆菌进行了耐酸性、耐胆盐、耐高温性、发酵特性和抑菌活性等实验，此株地衣芽孢杆菌具有对逆环境耐受性强、粘附性强、生长快、生物量大、抑菌活性好等特点。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)申请人已于2011年7月沈日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 5094。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为申请人从猪大肠中分离得到，其生物学特征如下菌落圆整，表面光滑，不透明，乳白色，边缘光滑，革兰氏阳性菌；单个菌体为球状或椭圆状。本发明的粪肠球菌经过人工胃液、胆汁液及耐热性的筛选；又经过产酶能力筛选和抑菌能力筛选，可以耐受PH2. 0，胃蛋白酶的人 エ胃液，可以耐受0.3%的人工胆汁液，可以耐受85°C的制粒温度，也可以抑制致病性大肠杆菌K88，K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产酸和抑制豆粕、棉粕、玉米秸秆中霉菌的能力。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)申请人已于2011年7月沈日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址同上，保藏编号为CGMCC No. 5092。本发明所用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为申请人从传统发酵豆豉中分离得到，其生物学特征如下菌落表面粗糙，不透明，污白色，菌落圆形，边缘呈锯齿状， 革兰氏阳性菌；芽孢形态为椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽抱形成后菌体不膨大。本发明的枯草芽孢杆菌显著区别于现有的枯草芽孢杆菌，可以耐受pH2.0，l%胃蛋白酶的人 エ胃液，可以耐受0.3%的人工胆盐，可以耐受80°C的制粒温度，可以抑制致病性大肠杆菌 K88，K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产纤维素酶的能力，可以降解纤维素。本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)已于2011年3月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址同上，保藏编号为CGMCC No. 46观。有益效果1、本发明制剂含三种高质量的益生菌，其菌种是严格按照微生态学规律进行选种、选育的，保证菌种的优良，活菌含量高，其中液态的微生态制剂保质期长达6个月，而固态的微生态制剂保质期可达M个月，均具有良好的微生态调节、优化水质、促进水产动物的生长、增强免疫力的作用，且质量稳定，安全可靠，绿色环保，无污染。2、本发明制剂能够显著促进水产动物的个体增重，提高单位面积产量和总量，从而增加水产养殖的收入，提高效益。3、本发明活菌含量高、保质期长、作用范围大、生产成本低，是专门改善水质、増加水产动物免疫力及防治水产类病害发生的理想复菌剂。4、本发明的液态水产微生态单独使用能够在水中迅速扩散，并有良好的繁殖能力，更好的改善水质和抑制水中致病微生物。5、本发明的颗粒微生态产品单独使用可以迅速沉入水底，改善水底的环境和降解水底的有机物质，优化水产养殖环境。通过下列实施例将更具体的说明本发明，但是应理解所述实施例仅是为了说明本发明，而不是以任何形式限制本发明的范围。53) 二级种子的制备将步骤幻制备的一级种子用无菌水制成菌悬液，接种到装有60L BPY种子培养基的100L种子罐中，温度30°C，转速300rpm，罐压0. 05MPA，通风比1 1培养14h，得二级种子液。4)枯草芽孢杆菌发酵液的制备将步骤幻制备的二级种子液按10%的接种量接种到600L发酵培养基的Im3发酵罐中，温度30°C，转速300rpm，罐压0. 05Mpa，通风比1 1，培养16h，得芽孢生成率90%以上，活菌数为l.OgXKTcfu/ml的枯草芽孢杆菌发酵液；所述的发酵培养基为(质量百分比)蔗糖1.0%，蛋白胨1.0%、酵母浸粉0.5%，硫酸铵0.2%，硫酸镁0. 04% ；硫酸锰0. 08%,消泡剂0. 06%，pH为6. 8。4、本发明微生态制剂的制备将1、2，3得到的发酵液按2 1 1的比例混合均勻后调节pH至7.0左右，进行分袋包装，每袋IOOOmL,制剂中活菌数为lX101(lCfu/mL。实施例2本发明微生态制剂颗粒剂的制备按体积比分别取实施例1中1、2、3的发酵液进行离心，其比例为粪肠球菌地衣芽孢杆菌枯草芽孢杆菌=2 1 1，离心转速为15000rpm，将离心后得到的菌泥进行混合，然后加入离心前3种发酵液总体积的25%的载体与菌泥进行混合，采用旋转挤压造粒法进行造粒，并通过震动流化床进行干燥，进风70°C，出风35°C，进料速度为120kg/h ；得到水分含量为8. 5%微生态制剂颗粒剂，活菌数在3. 5X101(lCfU/g。实施例3本发明的微生态制剂对鲫鱼消化酶活性和肠道内菌群的影响将180尾鱼种随机分为3组，每组3个重复，分别投喂3种饲料基础日粮(I组)，在基础日粮(组成成分和营养水平如表1所示)中加入质量百分比为0.02%的实施例2中的复合微生态颗粒制剂(II组)，在基础日粮中添加质量百分比为0. 02%的复合微生态液态(III组)。试验水族箱体积为0. 85mX0. 45mX0. 55m，每箱投20尾鱼。表1鲫鱼基础日粮的成分及营养水平

本发明属于应用生物技术领域，涉及一种水产用复合微生态制剂及其预混料。该制剂利用多种功能不同的有益菌种，按照一定的比例进行组合，形成高效多功能的复合微生态制剂，能够显著促进水产动物的个体增重，提高单位面积产量和总量，从而增加水产养殖的收入，提高效益；本发明制剂还能够改善水质、增加水中藻类、抑制有害菌群、改善水产养殖动物的肠道内环境、增加进食等多方面作用。