专利名称:一种猪瘟亚单位疫苗复合免疫佐剂的制作方法猪瘟(Classical Swine i^ever)是由猪瘟病毒引起猪的一种急性热性传染病,该病传染性强,病死率高,给我国养猪业造成重大经济损失。世界动物卫生组织将它列入A类 16种动物传染病之一。猪瘟病毒只有一个血清型。猪群对猪瘟的免疫力与中和抗体一致,以体液免疫为主。免疫母猪可通过初乳将抗体传给仔猪,并使其获得一定的被动免疫力,可以持续1-2个月。母源抗体对猪瘟弱毒疫苗的免疫有一定的干扰作用。我国从1956年起就广泛应用兔化弱毒疫苗进行猪群的预防接种,取得了显著的效果。但是免疫猪群仍时有猪瘟发生,猪群先天性感染或发生免疫抑制导致免疫失败是重要原因之一。目前尚没有方法区分商品猪群的弱毒疫苗接种和野毒感染,因此一些发达国家禁止使用弱毒疫苗进行猪瘟的预防。近年来,欧洲一些国家研制的猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗显示出良好的应用前景。尽管基因工程亚单位疫苗由于安全性好、受母源抗体干扰小、能够配套试剂盒区分疫苗免疫和野毒感染等优点具有广阔的应用前景,但是基因工程亚单位抗原免疫原性相对较弱、抗体应答慢,为了更好的激发猪体的免疫系统,使其对猪瘟病毒有足够的抵抗力, 有必要寻求安全高效的方法提高基因工程亚单位疫苗的免疫活性。目前提高亚单位疫苗免疫活性的方法不仅限于疫苗抗原的改进,选择合适的免疫佐剂来刺激免疫系统,增强动物免疫系统对抗原物质的摄取、加工和递呈等免疫应答也是一个重要的途径。一个理想的免疫佐剂应该特异性辅助疫苗抗原激活免疫系统,同时不会对动机体产生副作用。α干扰素是动物机体遭受病原感染时产生的一种具有抗病毒和免疫调节功能的细胞因子。近年来的研究发现,IFN-α在动物的先天性免疫向获得性免疫的发展中起着十分重要的作用。一方面抑制病原的增殖与传播,另一方面刺激抗原递呈细胞的分化和成熟、 激活淋巴免疫细胞,如提高NK细胞的杀伤活性、巨噬细胞的吞噬活性等,从而建立高效的病原或抗原特异性获得性免疫应答。国外近期研究发现与单独免疫流感疫苗相比,一定剂量的α干扰素配合流感疫苗免疫小鼠可显著提高血清中特异性IgG2 α和IgA的水平,并对10倍致死剂量流感病毒的攻击产生完全的免疫保护,而单独流感疫苗免疫小鼠的保护率近有60%。但是α干扰素在动物机体中的半衰期较短,难以发挥较为持续的免疫刺激作用,免疫佐剂效果有时不够稳定。氢氧化铝佐剂是以4. 5nmX2. 2nmX IOnm存在的纤维状粒子,这种粒子聚集后以松散的1-10 μ m大小的形式存在。抗原与氢氧化铝佐剂的吸附作用主要是依靠静电引力、 疏水作用和配体交换。因此,氢氧化铝佐剂与干扰素和抗原蛋白等配合后不会引起活性蛋白的变性和失活,从而发挥协同增强的免疫调节功能。
针对以上所述,本发明提供了一种猪瘟亚单位疫苗的复合免疫佐剂,用于与猪瘟亚单位抗原配合,通过肌注免疫提高猪瘟亚单位疫苗的免疫原性,增强猪体免疫系统对猪瘟抗原的免疫应答,更安全、高效的预防猪瘟的发生。为达到以上目的,本发明采用了以下技术方案一种猪瘟亚单位疫苗的复合免疫佐剂,该复合免疫佐剂由重组猪α干扰素和氢氧化铝佐剂配合而成,每头份猪瘟亚单位疫苗中重组猪α干扰素的含量为IX 10 ;所述的重组猪α干扰素是通过重组DNA技术将猪 α干扰素基因在各种表达系统中高效表达产生的具有抗病毒活性的猪α干扰素蛋白;复合免疫佐剂综合了氢氧化铝佐剂颗粒化缓释作用和猪α干扰素的免疫调节作用。采用以上技术方案后,本发明具有以下有益效果复合免疫佐剂可显著增强仔猪对猪瘟Ε2蛋白抗原的免疫应答;复合免疫佐剂显著提高猪瘟Ε2蛋白抗原颈部肌注免疫仔猪后产生的猪瘟特异性中和抗体水平;复合免疫佐剂可显著增强猪瘟Ε2蛋白抗原免疫猪体后产生的免疫记忆。图1为本发明复合免疫佐剂对猪瘟亚单位疫苗单次免疫诱导抗体消长的影响。图2为本发明复合免疫佐剂对猪瘟亚单位疫苗初免和二免后产生中和抗体水平的影响。图3为本发明复合免疫佐剂对猪瘟亚单位疫苗接种猪免疫记忆的影响。 表1猪血清样品中猪瘟中和抗体滴度检测结果
本发明涉及一种猪瘟亚单位疫苗复合免疫佐剂,该复合免疫佐剂由重组猪α干扰素和氢氧化铝佐剂配合而成,每头份猪瘟亚单位疫苗中重组猪α干扰素的含量为1×106U;所述的重组猪α干扰素是通过重组DNA技术将猪α干扰素基因在各种表达系统中高效表达产生的具有抗病毒活性的猪α干扰素蛋白;复合免疫佐剂综合了氢氧化铝佐剂颗粒化缓释作用和猪α干扰素的免疫调节作用。
一种猪瘟亚单位疫苗复合免疫佐剂制作方法
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