专利名称：L-鸟氨酸苯乙酸盐及其制备方法高血氨症是肝脏疾病的特点，其特征为在血流中含有过量的氨。肝性脑病是进行性高血氨症的主要临床后果并且是一种复杂的可并发急性或慢性肝衰竭的神经精神综合症。其特征在于精神状态的改变，包括很宽范围的神经精神综合症，从大脑功能改变这种微小信号到明显的精神和/或神经综合症，或者甚至深度昏迷。未代谢的氨的蓄积被认为是涉及肝性脑病的发病机理的主要因素，但可能还与其他机理有关。L-鸟氨酸单盐酸盐和其他L-鸟氨酸盐可用于高血氨症和肝性脑病的治疗。例如， 美国公开文本2008/01195M (其全部内容以引用的方式纳入本说明书中)描述了用于治疗肝性脑病的L-鸟氨酸和苯乙酸盐的组合物。L-鸟氨酸通过酶促转化方法制备。例如，美国专利5，405，761和5，591，613 (两者的全部内容均以引用的方式纳入本说明书中)描述了精氨酸酶促转化形成L-鸟氨酸盐。苯乙酸钠可商购得，也可作为用于治疗急性高血氨症的可注射溶液得到。可注射溶液的商标为AMM0NUL。尽管盐形式可显示出改善的降解特性，某些盐类，特别是钠盐或氯化物盐，当治疗患有与肝病有关的疾病(如肝性脑病)患者时可能是不良的。例如，高钠摄入对于倾向于腹水、体液过负荷以及电解质失衡的肝硬化患者很危险。类似地，某些盐类由于增高的渗透压(即溶液是高渗的)将难以静脉给药。高浓度的过量盐分可要求稀释很大体积的溶液用于静脉给药，这样反过来又导致过度的体液过负荷。因此，存在那些有利于肝性脑病或普遍存在体液过负荷和电解质失衡的其他情况有利的L-鸟氨酸和苯乙酸盐的制剂的需求。
本文公开的一些实施方案包括一种包含L-鸟氨酸苯乙酸盐晶形的组合物。在一些实施方案中，晶形显示出包含至少一个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约 6.0°、13. 9°、14. 8° ,17. 1°、17. 8° ^P 24. 1° 2Θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含至少三个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约6.0°、13. 9°、14.8° ,17. 1°、17.8°和24.1° 2 θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含在大约6.0° ,13. 9° ,14. 8° ,17. 1° ,17. 8°和24. 1° 2 θ处的特征峰的X-射线粉末衍射图案。在一些实施方案中，晶形的熔点为约202°C。在一些实施方案中，晶形显示出单晶7X-射线晶体学分析，具有晶体参数约等于晶胞尺寸a=6.594(2) A,b=6.5448(18) A,C=31.632(8) Α, α = 90°，β = 91. 12(3)° , γ = 90° ；晶系单斜晶系；空间群Ρ&。在一些实施方案中，晶形由式[C5H13N2O2] [C8H7O2]表示。一些实施方案具有的晶形显示出包含至少一个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约4. 9° ,13. 2°、17.4°、20· 8° ^P 24.4° 2Θ。在一些实施方案中， 晶形显示出包含至少三个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约4.9°、 13.2°、17.4°、20.8°和24. 4° 2Θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含在大约4. 9°、 13.2°、17. 4°、20. 8°和24. 4° 2 θ处的特征峰的X-射线粉末衍射图。一些实施方案具有包含水和/或乙醇分子的晶形。在一些实施方案中，晶形包含约的所述分子，由热重分析法测定。在一些实施方案中，晶形由差示扫描量热法表征为在约35°C包含一个吸热峰。在一些实施方案中，晶形的熔点为约203°C。一些实施方案具有的晶形显示出单晶X-射线晶体学分析，具有晶体参数约等于晶胞尺寸a=5.3652(4)A’b=7.7136(6)A,c=20.9602(18)A, α = 90°，β = 94. 986(6)°，Y = 90° ；晶系单斜晶系；空间群P&。在一些实施方案中，晶形是由式 [C5H13N2O2] [C8H7O2JEtOH. H2O 表示。一些实施方案具有的晶形显示出包含至少一个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约5. 8° ,14. 1°、18.6°、19.4° ,22. 3°和对.8° 2 θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含至少三个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约5. 8° ,14. 1°、18. 6°、19. 4° ,22. 3°和对.8° 2 θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含特征峰在大约5.8° ,14. 1°、18. 6°、19. 4° ,22. 3°和24. 8° 2 θ的X-射线粉末衍射图。在一些实施方案中，晶形由差示扫描量热法表征为在约40°C包含一个吸热峰。在一些实施方案中，晶形的熔点约为203°C。在一些实施方案中，晶形显示出包含至少一个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约13. 7°、17. 4°、19. 8°、20. 6°和23. 7° 2Θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含至少三个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约 13.7°、17. 4°、19. 8°、20. 6°和23. 7° 2 θ。在一些实施方案中，晶形显示出包含特征峰在大约13. 7°、17·4°、19·8°、20· 6°和23. 7° 2 θ的X-射线粉末衍射图。在一些实施方案中，晶形由差示扫描量热法表征为在约174°C包含一个吸热峰。在一些实施方案中，晶形具有熔点约为196°C。在一些实施方案中，晶形包含可药用的载体。本文公开的一些实施方案具有一种组合物，其包含至少约50wt%的一种L-鸟氨酸苯乙酸盐晶形和至少约0. 01wt%的苯甲酸或其盐。在一些实施方案中，组合物包含至少约0. 10wt%的苯甲酸或其盐。在一些实施方案中，组合物包含不超过5wt%的苯甲酸或其盐。在一些实施方案中，组合物包含不超过 Iwt %的苯甲酸或其盐。在一些实施方案中，组合物还包含至少IOppm的银。在一些实施方案中，组合物包含至少20ppm的银。在一些实施方案中，组合物还包含至少25ppm的银。在一些实施方案中，组合物包含不超过600ppm的银。在一些实施方案中，组合物包含不超过IOOppm的银。在一些实施方案中，组合物包含不超过65ppm的银。在一些实施方案中，约50mg/mL的组合物在水中的溶液与体液是等渗的。在一些实施方案中，等渗溶液的渗透度在约280至约330m0sm/kg范围内。在一些实施方案中，组合物的密度在约1. 1至约1. 3kg/m3范围内。本文公开的一些实施方案包括一种制备L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法，其包含将 L-鸟氨酸盐、苯甲酸盐和溶剂混合以形成一种中间体溶液；将苯乙酸盐与所述中间体溶液混合；然后分离出一种包含至少70wt%的结晶L-鸟氨酸苯乙酸盐的组合物。在一些实施方案中，方法包含在与苯乙酸盐混合前从所述中间体溶液中除去至少一部分盐，其中所述盐不是L-鸟氨酸盐。在一些实施方案中，方法包含在除去至少一部分盐之前加入盐酸。在一些实施方案中，混合L-鸟氨酸盐、苯甲酸盐和溶剂的步骤包含将L-鸟氨酸盐分散于水中形成第一种溶液；将苯甲酸盐分散于DMSO中形成第二种溶液；然后混合所述第一种溶液与所述第二种溶液以形成所述溶液。在一些实施方案中，组合物包含至少约0. IOwt %的苯甲酸盐。在一些实施方案中， 组合物包含不超过5wt %的苯甲酸盐。在一些实施方案中，组合物包含不超过Iwt %的苯甲酸盐。在一些实施方案中，L-鸟氨酸盐为L-鸟氨酸盐酸盐。在一些实施方案中，苯甲酸盐为苯甲酸银盐。在一些实施方案中，组合物包含至少IOppm的银。在一些实施方案中，组合物包含至少20ppm的银。在一些实施方案中，组合物包含至少25ppm的银。在一些实施方案中，组合物包含不超过600ppm的银。在一些实施方案中，组合物包含不超过IOOppm的银。在一些实施方案中，组合物包含不超过65ppm的银。在一些实施方案中，苯乙酸盐为碱金属盐。在一些实施方案中，碱金属盐为苯乙酸钠。在一些实施方案中，组合物包含不超过IOOppm的钠。在一些实施方案中，组合物包含不超过20ppm的钠。在一些实施方案中，L-鸟氨酸为卤化物盐。在一些实施方案中，所述卤化物盐为 L-鸟氨酸盐酸盐。在一些实施方案中，组合物包含不超过0. 的氯化物。在一些实施方案中，组合物包含不超过0. 0Iwt %的氯化物。本文公开的一些实施方案包括一种由本文所公开的任意方法得到的组合物。本文公开的一些实施方案包括一种制备L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法，其包含将包含L-鸟氨酸盐的溶液的pH值至少增加至一种中间体盐发生沉淀，其中所述中间体盐不是 L-鸟氨酸盐；从所述溶液中分离出中间体盐；将苯乙酸与所述溶液混合；然后从所述溶液分离出L-鸟氨酸苯乙酸盐。在一些实施方案中，pH值增加至至少8. 0。在一些实施方案中，pH值增加至至少 9.0。在一些实施方案中，增加pH值包含加入一种选自以下的pH调节剂氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、叔丁醇钾、碳酸钠、碳酸钙、二丁胺、色胺、氢化钠、氢化钙、丁基锂、乙基溴化镁或其结合。本文公开的一些实施方案包括一种通过给予治疗有效量的L-鸟氨酸苯乙酸盐晶形而治疗或改善受试者的高血氨症的方法。在一些实施方案中，晶形通过口服给予。在一些实施方案中，晶形选自晶形I、晶形II、晶形III、晶形V，其中晶形I显示出包含特征峰在大约4.9° ,13. 2°、17. 4°、20. 8°和对.4° 2 θ的X-射线粉末衍射图；晶形II显示出包含特征峰在大约6.0°、13·9°、14.8° ,17. 1°、17.8° ^P 24. 1 ° 2 θ 的X-射线粉末衍射图；晶形III显示出包含特征峰在大约5. 8° ,14. 1°、18.6°、19.4°、 22.3°和对.8° 2 θ的X-射线粉末衍射图；并且晶形V显示出包含特征峰在大约13. 7°、 17.4°、19·8°、20.6°和23. 7° 2 θ的X-射线粉末衍射图。在一些实施方案中，晶形为晶形I。在一些实施方案中，晶形为晶形II。在一些实施方案中，晶形为晶形III。在一些实施方案中，晶形为晶形V。在一些实施方案中，给予了选自晶形I、晶形II、晶形III、晶形V的至少两种晶形。 在一些实施方案中，所述至少两种晶形大约同时给予。在一些实施方案中，晶形每天给予1至3次。在一些实施方案中，治疗有效量在约 500mg至约50g范围内。在一些实施方案中，受试者被诊断为患有肝性脑病。在一些实施方案中，受试者被诊断为患有高血氨症。本文公开的一些实施方案包括一种制备L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法，其包含将 L-鸟氨酸盐、苯乙酸银和溶剂混合以形成一种溶液，其中所述L-鸟氨酸盐为碱金属盐；然后从所述溶液中分离出L-鸟氨酸苯乙酸盐。本文公开的一些实施方案包括一种治疗或改善高血氨症的方法，其包含静脉给予治疗有效量的一种包含L-鸟氨酸苯乙酸盐的溶液，其中所述治疗有效量包含不超过 500mL所述溶液。在一些实施方案中，溶液包含至少约25mg/mL的L-鸟氨酸苯乙酸盐。在一些实施方案中，溶液包含至少约40mg/mL的L-鸟氨酸苯乙酸盐。在一些实施方案中，溶液包含不超过300mg/mL的L-鸟氨酸苯乙酸盐。在一些实施方案中，溶液与体液是等渗的。本文公开的一些实施方案包括一种压缩L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法，该方法包含向L-鸟氨酸苯乙酸盐的亚稳形式施加压力以诱导其相转变。在一些实施方案中，亚稳形式为无定形的。在一些实施方案中，亚稳形式显示出包含至少一个特征峰的X-射线粉末衍射图，其中所述特征峰选自大约4.9°、13.2°、 20. 8° 和 24. 4° 2 θ。在一些实施方案中，压力施加持续预定的时间。在一些实施方案中，预定时间约为 1秒或更短。在一些实施方案中，压力至少为约500psi。在一些实施方案中，在施加压力后相转变产生了一种密度在约1. 1至约1. 3kg/m3 范围内的组合物。在一些实施方案中，相转变产生了一种显示出包含至少一个特征峰的X-射线粉末衍射图的组合物，其中所述特征峰选自大约6.0°、13.9°、14.8° ,17. 1°、17.8°和 24. 1° 2 θ。本文公开的一些实施方案包括一种通过向L-鸟氨酸苯乙酸盐的亚稳形式施加压力以促使其相转变而得到的组合物。

图1为晶形I的一个X-射线粉末衍射图。图2显示了晶形I的差示扫描量热法结果。图3显示了晶形I的热重/差热分析。图4显示了从晶形I的一个样品得到的 核磁共振谱。图5显示了晶形I的动态蒸汽吸附结果。图6为晶形II的一个X-射线粉末衍射图。图7显示了晶形II的差示扫描量热法结果。图8显示了晶形II的热重/差热分析。图9显示了从晶形II的一个样品得到的1H核磁共振谱。图10显示了晶形II的动态蒸汽吸附结果。图11为晶形III的一个X-射线粉末衍射图。图12显示了晶形III的差示扫描量热法结果。图13显示了晶形III的热重/差热分析。图14显示了从晶形III的一个样品得到的1H核磁共振谱。图15显示了晶形III的动态蒸汽吸附结果。图16为晶形V的一个X-射线粉末衍射图。图17显示了晶形V的差示扫描量热法结果。图18显示了晶形V的热重/差热分析。图19显示了从晶形V的一个样品得到的1H核磁共振谱。图20显示了晶形V的动态蒸汽吸附结果。图21显示了从L-鸟氨酸苯甲酸盐的一个样品得到的 核磁共振谱。图22显示了从L-鸟氨酸苯乙酸盐的一个样品得到的1H核磁共振谱。详细说明本文公开了制备L-鸟氨酸苯乙酸盐——并且具体地为所述盐的晶形——的方法。 这些方法允许采用经济的方法大规模生产L-鸟氨酸苯乙酸盐的可药用形式。此外，还公开了 L-鸟氨酸苯乙酸盐的晶形，包括晶形I、II、ΙΙΙ和V。所述L-鸟氨酸苯乙酸盐允许静脉给药，具有可忽略的钠负荷，并因此使得所需的静脉液体量最小。本申请涉及新的L-鸟氨酸苯乙酸盐晶形，以及制备和使用L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法。所述盐有利地显示出长期稳定性，不含有显著量的钠或氯化物。因此，预期L-鸟氨酸苯乙酸盐提供与L-鸟氨酸和苯乙酸盐的其他盐相比改善的安全性。此外，L-鸟氨酸苯乙酸盐与其他盐相比显示出更低的毒性，并因此可以更高浓度静脉给予。因此，预期L-鸟氨酸苯乙酸盐提供对于肝性脑病治疗的显著的临床改进。本申请还涉及L-鸟氨酸苯乙酸盐的多种多晶形物。不同晶形(多晶形)的出现是一些分子和分子复合物的特性。盐复合物(如L-鸟氨酸苯乙酸盐)可产生多种具有不同物理特性(如熔点、X-射线衍射图、红外吸收指纹和NMR谱)的固体。多晶形物的物理特性的差异来自于在整个固体中相邻分子(复合物)的取向和分子间相互作用。因此，多晶形物可为独特的固体，其与多晶形物家族中的其他形式相比具有相同的活性药物组分却具有不同的有利的和/或不利的物理化学性质。制备L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法本文公开的一些实施方案包括一种制备L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法。L-鸟氨酸苯乙酸盐可通过，例如一种中间体盐(如L-鸟氨酸苯甲酸盐)制备。如路线1所示，一种式 I的L-鸟氨酸盐可与一种式II的苯甲酸盐反应得到中间体L-鸟氨酸苯甲酸盐。


本文公开了L-鸟氨酸苯乙酸盐的晶形及其制备方法。在一些实施方案中，所述晶形可为晶形Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ，或其混合物。所述晶形可配成制剂用于治疗患有肝病(如肝性脑病)的受试者。因此，一些实施方案包括制剂和给予L-鸟氨酸苯乙酸盐的方法。