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检测肝硬化的miRNA血清标志物及其应用制作方法

  • 专利名称
    检测肝硬化的miRNA血清标志物及其应用制作方法
  • 发明者
    汪保灿, 汪余勤, 范建高
  • 公开日
    2013年6月19日
  • 申请日期
    2011年12月19日
  • 优先权日
    2011年12月19日
  • 申请人
    上海交通大学医学院附属新华医院
  • 文档编号
    C12N15/11GK103160507SQ20111042830
  • 关键字
  • 权利要求
    1.一种分离的miRNA,所述的miRNA选自 (i)序列如SEQID NO1所示的miRNA,或 (ii)与SEQID NO1所示序列互补的miRNA2.如权利要求1所述的miRNA,其特征在于,所述的miRNA分离自人3.一种分离的或人工构建的前体miRNA,所述的前体miRNA能在人细胞内剪切并表达成如权利要求1或2所述的miRNA4.一种分离的多核苷酸,所述的多核苷酸能被人细胞转录成前体miRNA,所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达成如权利要求1或2所述的miRNA5.如权利要求4所述的多核苷酸,其特征在于,所述的多核苷酸具有式I所示的结构 Seq正向Ueq反向 式I 式I中, Seq1^1为能在人细胞中表达成所述的miRNA的核苷酸序列; Seq&@为与Seq1^1基本上互补或完全互补的核苷酸序列; X为位于Seqtt和Seq&^^间的间隔序列,并且所述间隔序列与Seqtt和Seqg不互补; 并且式I所示的结构在转入人细胞后,形成式II所示的二级结构6.一种载体,其特征在于,所述载体含有权利要求1或2所述的miRNA,或权利要求4或5所述的多核苷酸7.权利要求1所述miRNA的用途,其特征在于,用于制备区分肝硬化样本和正常样本的芯片或试剂盒8.一种miRNA芯片,所述的miRNA芯片包括 固相载体;以及 有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针,所述的寡核苷酸探针特异性地对应于SEQ ID NO1所示的序列9.权利要求8所述miRNA芯片的用途,其特征在于,用于制备区分肝硬化样本和正常样本的试剂盒10.一种试剂盒,所述的试剂盒中含有权利要求8所述的miRNA芯片
  • 技术领域
    本发明涉及生物技术领域,更具体地,本发明涉及可用于区分肝硬化样本及正常样本的microRNA标志物hsa_miR-181b经检验证明,该特异性的microRNA标志物可非常有效地区分肝硬化样本及正常样本本发明还涉及用于检测肝硬化的试剂盒
  • 背景技术
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:检测肝硬化的miRNA血清标志物及其应用的制作方法肝硬化(liver cirrhosis)是我国一种常见的慢性肝病,可由一种或多种原因引起肝脏损害,肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。具体表现为肝细胞弥漫性变性坏死,继而出现纤维组织增生和肝细胞结节状再生,这三种改变反复交错进行,结果肝小叶结构和血液循环途径逐渐被改建,使肝变形、变硬而导致肝硬化。该病早期无明显症状,后期则出现一系列不同程度的门静脉高压和肝功能障碍,直至出现上消化道出血、肝性脑病等并发症死亡。因此,肝硬化的尽早诊断就愈发显得迫切。任何事物的发生发展都处于内外因共同作用之下,内因为主,外因为辅。基因作为生命的遗传介质,在生物体的生、老、病、死中处于基础的内因地位。绝大部分基因通过转录生成核糖核酸,再翻译生成蛋白质而发挥生物学功能。microRNA (miR或miRNA,微小RNA)是一类在较高等的真核生物体内广泛存在的,长度约18-26个碱基的单链RNA分子。它可以通过碱基配对原则特异性地与一些mRNA上的靶位点相结合,引起靶mRNA降解或翻译抑制,进而在转录后水平对靶基因进行调控。microRNA来源于长度约IOOObp的长链RNA初始转录产物(Pr1-miRNA),Pr1-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60_80nt的具有茎环结构的miRNA前体(PreniRNA)。PreniRNA转运至胞质后,被Dicer酶进一步切割成长约22nt的双链miRNA。双链miRNA解开后,成熟的miRNA进入RNA诱导基因沉默复合物(RNA-1nducedsilencing complex, RISC),与互补mRNA完全或不完全配对,降解祀mRNA或阻遏其表达。尽管microRNA在细胞总RNA中所占的比重很小,但由于它可以高效地对所有具有靶位点的mRNA产生调控作用,microRNA在生物体的发育乃至疾病的发生、发展过程所起的作用仍不可小视。然而,迄今为止,本领域对于与肝脏疾病(尤其是肝硬化)相关的microRNA 了解甚少,因此本领域迫切需要进一步地分离标志物microRNA,尤其是与肝硬化的发生、转移、复发或检测有关的microRNA。
本发明的目的就是提供一种新的、可用于区分肝硬化样本及正常样本的microRNA标志物及其用途。本发明的另一目的是提供检测所述疾病的芯片和试剂盒。 在本发明的第一方面,提供了一种分离的miRNA,所述的miRNA选自:(i)序列如 SEQ ID NO:1 所示的 miRNA,或(ii)与 SEQ ID NO:1 所示序列互补的 miRNA。在另一优选例中,所述的miRNA分离自人。在本发明的第二方面,提供了一种分离的或人工构建的前体miRNA,所述的前体miRNA能在人细胞内剪切并表达成如本发明第一方面所述的miRNA。在本发明的第三方面,提供了一种分离的多核苷酸,所述的多核苷酸能被人细胞转录成前体miRNA,所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达成如本发明第一方面所述的miRNA。在另一优选例中,所述的多核苷酸具有式I所示的结构:Seq正向-X-Ueq反向式I式I 中,能在人细胞中表达成所述的miRNA的核苷酸序列;Seqi反向为与Seq基本上互补或完全互补的核苷酸序列; X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列,并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补;并且式I所示的结构在转入人细胞后,形成式II所示的二级结构:
本发明涉及用于区分肝硬化与正常组织的microRNA标志物。具体地,本发明涉及可用于区分肝硬化组织及正常组织的microRNA标志物hsa-miR-181b。经检验证明,该特异性的microRNA标志物可非常有效地区分肝硬化组织及正常组织。本发明还涉及标志物microRNA hsa-miR-181b的应用及用于检测肝硬化的试剂盒。



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