专利名称：一种抗疲劳中药组合物及其制备方法随着近年来社会竞争的激烈和生活节奏的加快，疲劳已成为21世纪人类健康最大的隐患，是人们的日常生活和工作受到严重影响。疲劳，是指由于身体与精神状态的下降而导致的周身疲软、困乏与神疲力竭之感，是机体复杂的生理生化变化的综合反应，可导致机体神经、内分泌、免疫诸系统调节失常，在祖国医学中属于气虚、虚损、劳倦的范畴。人参具有改善微循环、提高组织抗缺氧能力、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、抗福射、等多种生物活性。远志富含皂苷类、寡糖酯类等化合物，具有益智、镇静催眠、抗抑郁、抗氧化衰老、抑菌抗炎等多方面的生物活性。茯苓主要化学成分为多糖和三萜类成分，具有抑制肿瘤、抗炎、调节免疫等作用。石菖蒲性味辛苦温，入心、胃经，具芳香之气，行散之力较强，为宣气通窍之佳品，功能豁痰开窍、化湿和胃、醒神益智，是芳香宁神，涤痰开窍之要药。综上，该组方能增强机体免疫功能，提高机体的适应能力，由此可推测其具有抗疲劳活性。
本发明首次公开了人参、茯苓、石菖蒲、远志的组合物及其活性成分组合用于治疗西医范畴的以疲劳症状为主的疾病和中医范畴的懈怠性疾病。该抗疲劳药物的制备方法为人参切片，用60%乙醇5-10倍量，加热回流提取3次，每次O. 5-2h，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；人参药渣备用；石菖蒲加水6-10倍，提取挥发油6-10h，挥发油备用；石菖蒲药渣及水液、人参药渣、茯苓、远志共煎，加水量8-10倍，提取2次，每次O. 5-2h，合并药液，浓缩至相对密度为I. 10 I. 15(50°C测)，加乙醇使药液含醇量达50%，冷藏(5 10°C)过夜，滤过。回收乙醇，加入人参提取液，浓缩至相对密度为I. 32 I. 35(50°C测)，减压干燥得药粉。使用时按比例将挥发油和药粉配制成药液。可以按照常规的制剂工艺，将人参、茯苓、石菖蒲、远志药材或提取物粉碎后加入常规的赋性剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等药物辅料，制成任何一种适合于临床上使用的口服剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂坐寸ο可以将人参、茯苓、石菖蒲、远志经提取、浓缩、精制得到各药物活性成分，即人参皂苷、茯苓多糖、石菖蒲挥发性成分、非挥发性成分、远志皂苷或/和多糖组成组合物后制成上述任一种剂型。图I中药组方对运动性疲劳小鼠力竭运动电击次数的影响，与安静对照组比较/P<O. 05与溶剂对照组比较，*P < O. 05，**P < O. 01.图2中药组方对运动性疲劳小鼠中枢5-HT含量的影响，与溶剂对照组比较，*P
<O. 05，**P < O. 01 ;与安静对照组比较，flP < O. 05图3中药组方对大鼠跑台力竭时间的影响，与模型组比较， < O. 05广P < O. 01.

动物分组动物分组雄性KM小鼠84只，18 22g，随机分为正常组、中药组方大、中、小剂量组、红景天组、莫达非尼组和安静对照组。中药组方剂量分别按1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg灌胃给药,红景天胶囊按180mg/kg、莫达非尼按13mg/kg灌胃给药，正常组和安静对照组灌胃等量蒸馏水。每天灌胃Ih后，除去安静对照组，将各鼠在转轮式疲劳仪上训练，持续4周，每周5天,休息2天,每周的转速分别为10m/min、12m/min、13m/min及15m/min,运动时间分别为30min、30min、60min及60min.。4周后进行17m/min时间为60min的力竭运动(安静对照组除外)，记录各鼠力竭运动电击次数，力竭运动后迅速将各鼠取血、全脑、肝脏、大腿内侧肌肉待做试剂盒。小鼠处死后，立即将其浸入75%的酒精中持续I分钟，之后立即在无菌条件下取出脾脏，在4°CHank’ s液的平皿中清洗一遍，后在200目不锈钢丝网上用注射器针芯碾碎组织使单个细胞透过丝网进入Hank’ s液里，IOOOrpm离心5min,弃上清，再加5ml含5%NH4Cl的Tris · HCl中，静置IOmin使红细胞破裂,再次IOOOrpm离心IOmin,弃上清,加入含10 %胎牛血清的RPMI 1640培养液中，使细胞密度达2*106/L，分为正常组和ConA刺激组。取96孔培养板，正常的各组每孔加90 μ L皮细胞悬液，10 μ L空白培养基，每组8个复 孔。ConA刺激的各组每孔加90ul脾细胞悬液；ConA (使终浓度为10 μ g/mL) 10 μ L，每组8个复孔。置37°C，5% C02培养箱中培养72h。MTT法检测脾细胞增殖取培养72h的脾细胞，每孔加入20 μ L MTT,继续孵育4h，小心吸弃上清后加入DMSO 150 μ L，37°C振荡30min，于570nm处测OD值。采用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液中IL-2和IL-4含量，实验结果在酶标仪450nm处读OD值。3.大鼠抗疲劳试验动物分组雄性SD大鼠42只，180 220g，随机分为正常组、中药组方大、中、小剂量组、红景天组、莫达非尼组和安静对照组，每组6只。中药组方剂量分别按1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg灌胃给药,红景天胶囊按180mg/kg、莫达非尼按13mg/kg灌胃给药,溶剂对照组和安静对照组灌胃等量蒸馏水。每天灌胃Ih后，将各鼠在大鼠跑台上训练，持续5周，每周6天。除安静对照组外，对各组大鼠于跑台上每天训练20min，每周6天，坡度为0，跑速每周递增，依次为15，22，25，31,35m/min,共5周.随后进行进行坡度为O,速度为35m/min的跑台训练,直至力竭。力竭判断标准为动物跟不上预定跑速，臀部后坐于跑台后壁，后肢随转动皮带托达30s之久，声光电以及毛刷刺激无效、呼吸急促、神情疲倦、俯卧垂头，对刺激没有反应。最力竭运动后对所有实验大鼠眼眶取血、全脑，待做试剂盒。七、试验结果I.小鼠耐缺氧试验中药组方连续灌胃7天后，中药组方在500mg/kg和1000mg/kg剂量,存活时间明显延长(P < 0. 01)，见表I。其中1000mg/kg剂量组能升高缺氧小鼠脑组织SOD活力，降低MDA浓度。本试验说明中药组方在此模型上有明显的耐缺氧活性。表I 中药组方对小鼠常压耐缺氧存活时间及脑组织SOD活力、MDA浓度的影响(x±s, η = 10)


本发明涉及一种对疲劳症状有显著治疗作用的中药组合物的新用途和制备方法。该药物制剂是由人参、茯苓、远志和石菖蒲仁按一定比例混合，或经提取活性部位(即人参皂苷、茯苓多糖、石菖蒲挥发性成分/非挥发性成分、远志皂苷或/和寡糖酯)后的组合物，可制备成各种剂型。本品适用于各种原因导致的疲劳症状，其机理在于本品能通过对中枢神经递质的调节以及对免疫系统的增强来恢复中枢兴奋性与抑制性的平衡，从而达到抗运动性疲劳效应，以及改善中枢性疲劳状态。