一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物的制作方法(-)【技术领域】。(二)[0002]雷公藤为卫矛 科雷公藤属植物雷公藤(Triptergium wilf ordii Hook.F)的根，又名断肠草、黄藤根等，性苦味寒，有大毒，归心、肝经。具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛、杀虫解毒之功效。临床运用始见于《本草纲目拾遗》中的《汪连仕方》，主要用作杀虫剂及用于治疗类风湿性关节炎等疾病，现作为免疫抑制药物广泛运用于临床。[0003]由于雷公藤为有毒中药，随着雷公藤及其制剂使用范围的扩大和国家对药品安全监控制度的完善，雷公藤及其制剂的不良反应报告日趋增多。据统计，不良反应虽然涉及生殖系统和泌尿系统、神经系统、心血管系统、血液系统、消化系统等多个方面，但是以药物性肝损害最为常见。药物性肝损害(drug-1nduced liver injury, DILI)是指在药物治疗过程中，由于药物或其代谢产物引起的肝细胞毒性损害或肝脏对药物及代谢产物的过敏反应所致的疾病，可以发生在原来没有肝病的人群或原来有基础肝脏疾病的患者中。很多病人在服用雷公藤及其制剂的过程中，因血清转氨酶的升高而不得不停止给药，一般给予保肝降酶治疗，多能恢复正常，但是严重的可产生肝肿大或者急性肝坏死。因此，在临床运用雷公藤及其制剂过程中，通常配伍保肝类中药，以降低毒性提高疗效。[0004]本发明通过体外细胞实验、对佐剂性关节炎大鼠(AA)模型的研究，考察了雷公藤配伍五味子后的免疫活性、肝脏毒性以及对类风湿性关节炎的疗效，发现雷公藤配伍五味子后使用，不仅能有效缓解模型大鼠的肝脏损伤，还提高了对类风湿性关节炎的治疗作用。(三)
[0005]本发明目的是提供一种由五味子、雷公藤两味中药制成的，且能有效治疗类风湿性关节炎的中药组合物，该配伍对治疗类风湿性关节炎具有确切的疗效，并对雷公藤所引起的肝脏损伤有显著的改善作用。[0006]本发明采用的技术方案是:
[0007]—种治疗类风湿性关节炎的中药组合物，由如下质量配比的原料药制得:雷公藤I~20份、五味子10~600份。
[0008]本发明所述的治疗类风湿性关节炎的中药组合物，优选所述中药组合物中各原料药的质量配比为:雷公藤5~15份、五味子10~60份。
[0009]本发明所述的治疗类风湿性关节炎的中药组合物，特别优选所述中药组合物中各原料药的质量配比为:雷公藤10份、五味子30份。
[0010]进一步，本发明所述的治疗类风湿性关节炎的中药组合物为雷公藤与五味子的水提取物；所述的水提取物按如下方法制得:取组方量的雷公藤与五味子，雷公藤先煎Ih~2h,再加入五味子共煎Ih~2h，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再共煎2h~4h，过滤得二次滤液，合并两次滤液浓缩得雷公藤与五味子的水提取物。
[0011]本发明所述雷公藤与五味子的水提取物的相对密度为500mg~1000mg/mL。
[0012]本发明所述的中药组合物可进一步制成治疗类风湿性关节炎的药物。
[0013]本发明的有益效果主要体现在:本发明配伍来源于临床实践，配伍合理，经药效学验证，既能保持雷公藤显著的免疫抑制活性，又能降低雷公藤所引起的肝脏毒性。
(四)


[0014]图1是实施例5空白组大鼠肝脏病理切片图(X400倍)；
[0015]图2是实施例5模型组大鼠肝脏病理切片图(X 400倍)；
[0016]图3是实施例5雷公藤治疗组大鼠肝脏病理切片图(X400倍)；[0017]图4是实施例5雷公藤配伍五味子治疗组大鼠肝脏病理切片图(X400倍)；
[0018]图5是实施例5五味子治疗组大鼠肝脏病理切片图(X 400倍)；
[0019]图6是实施例6空白组大鼠踝关节病理切片图(X200倍)；
[0020]图7是实施例6模型组大鼠踝关节病理切片图(X 200倍)；
[0021 ]图8是实施例6雷公藤治疗组大鼠踝关节病理切片图(X 200倍)；
[0022]图9是实施例6雷公藤配伍五味子治疗组大鼠踝关节病理切片图(X200倍)。
[0023]图10是实施例6五味子治疗组大鼠踝关节病理切片图(X200倍)。
(五)
[0024]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
[0025]实施例1:雷公藤配伍五味子对小鼠脾淋巴细胞增值作用的影响
[0026]( I)材料:五味子、雷公藤。
[0027]中药材料水提物:6mg/mL、15mg/mL雷公藤配伍五味子培养液的制备:取雷公藤药材9g，加360mL纯化水先煎lh，后加入27g五味子，共煎lh，过滤；滤渣再加入360mL纯化水，共煎lh，过滤；合并滤液，常压浓缩至每mL含雷公藤生药材600mg，得药物浓度为600mg/mL的雷公藤五味子水提物备用。临用时，取备用药液ImL,加入无菌的1640培养液定容至50mL,制备成每mL含雷公藤生药材12mg的供试品溶液；取备用药液ImL,加入无菌的1640培养液定容至20mL，制备成每mL含雷公藤生药材30mg的供试品溶液。将供试品溶液以1:1的比例加入培养基，制备成药物终浓度分别为每mL含雷公藤生药材6mg (浓度I)和15mg(浓度2)的培养液。
[0028]6mg/mL、15mg/mL雷公藤培养液的制备:取雷公藤药材9g,加360mL纯化水煎煮2h，过滤；滤渣再加入360mL纯化水，煎煮2h，过滤；合并滤液，常压浓缩至每mL含雷公藤生药材600mg，得药物浓度为600mg/mL的雷公藤水提物备用。临用时，取备用药液lmL，加入无菌的PBS溶液定容至50mL，制备成每mL含雷公藤生药材12mg的供试品溶液；取备用药液ImL,加入无菌的1640培养液定容至20mL,制备成每mL含雷公藤生药材30mg的供试品溶液。将供试品溶液以1:1的比例加入培养基，制备成药物终浓度分别为每mL含雷公藤生药材6mg(浓度I)和15mg(浓度2)的培养液。[0029]18mg/mL、45mg/mL五味子培养液的制备:取五味子药材9g，加360mL纯化水煎煮2h，过滤；滤渣再加入360mL纯化水，煎煮2h，过滤；合并滤液，常压浓缩至每mL含五味子生药材1.8g，得药物浓度为1.8g/mL的五味子水提物备用。临用时，取备用药液lmL，加入无菌的1640培养液定容至50mL,制备成每mL含五味子生药材36mg的供试品溶液；取备用药液ImL,加入无菌的1640培养液定容至20mL,制备成每mL含五味子生药材90mg的供试品溶液。将供试品溶液以1:1的比例加入培养基，制备成药物终浓度分别为每mL含五味子生药材18mg(浓度I)和45mg(浓度2)的培养液。
[0030]实验动物:清洁级ICR鼠，雌性，18~22g。
[0031](2)实验方法:取ICR小鼠6只，断椎处死后浸泡于75%酒精中消毒lOmin，于超净工作台上取脾脏，Hank’ s液(37°C)冲洗后放置培养皿中，将脾脏细胞捻碎后过100目尼龙筛网，4°C离心10min (转速1500r/min),弃去上清液；沉淀重悬于5mL0.83%Tr1-NH4Cl溶液中静置5min后加入含10%灭活FBS的RPMI1640培养液悬浮、离心(4 °C，1500r/min, lOmin)、洗涤3次弃去上清液，沉淀用10%灭活FBS的RPMI1640培养液将细胞定容至lmL，混匀后取样细胞计数和细胞活力检测.[0032]在96孔板中，每孔加入淋巴细胞混悬液100 μ L，conA50 μ L，分别加入雷公藤、五味子和雷公藤配伍五味子不同浓度的水提物50 μ L，空白用RPMI1640培养液，一次6复孔/组。37。。，5%C02培养72h，1500转离心15min,弃去上清液，每孔加入MTT (2mg/ml) 50 μ L，37°C，5%C02培养4h。1500转离心10min，弃去上清液，每孔加入DMS0150 μ L，待全部溶解后，选择570nm波长，用酶联免疫检测仪测定各孔吸光值。用spss17.0软件进行数据分析。
[0033](3)实验结果:在6mg/mL和15mg/mL浓度下,雷公藤组与雷公藤配伍五味子组对小鼠脾淋巴细胞的增值抑制作用均十分明显，与空白组相比，差异均有统计学意义(P〈0.05，n=6);在这两个浓度下，雷公藤组和雷公藤配伍五味子组对小鼠脾淋巴细胞的增值抑制作用相差不大，差异无统 计学意义(P>0.05，n=6)，五味子两个浓度组与空白组对比，差异无统计学意义(P>0.05，n=6)。说明雷公藤与五味子配伍后，没有降低雷公藤的免疫抑制活性，五味子水提物不具有免疫抑制作用，具体见实验数据表1。
[0034]表1:雷公藤配伍五味子对小鼠脾淋巴细胞增值作用影响的数据(SI值，n=6)
药物浓度空白组雷公藤组五味子组


五味子组
[0035]~
浓度 Il.7S3_UU>S() 0.S9U0.022 1.743±0.0520.900丄().()53
浓度 2l.7S3±0.0H0 U.S72丄().023 LSIU(U)M(>.912丄0.015
[0036]实施例2:雷公藤配伍五味子对小鼠肝脏细胞增值作用的影响
[0037](I)材料:五味子、雷公藤。
[0038]中药材料培养液及其制备同实施例1。
[0039]实验动物:清洁级ICR小鼠，雌性，18~22g。
[0040](2)实验方法:用含10%胎牛血清、100IU/ml青霉素、100 μ g/ml链霉素的RPMI1640培养基将购买的L-02人肝细胞，于37°C、5%C02饱和湿度的培养箱中传代培养。取对数生长期细胞，经0.25%胰蛋白酶消化后，用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液；取20 μ L细胞混悬液与0.4%台盼蓝液按1:1混匀，加入红细胞计数板的方格中并盖上玻片，Imin后计数200个细胞,活细胞数占计数的总细胞数的百分比表示细胞活力，细胞活力>95%。经活力检测后的脾淋巴细胞悬液，用RPMI1640完全培养液(37°C )稀释成细胞浓度约为I X 107个细胞/mL的细胞悬液备用。
[0041]在96孔板中，每孔加入L-02人肝细胞混悬液100 μ L，分别加入雷公藤、五味子和雷公藤配伍五味子不同浓度的水提物50 μ L,空白用RPMI1640培养液，一次6复孔/组。37 °C，5%C02培养72h，1500转离心15min，弃去上清液，每孔加入MTT (2mg/ml) 50 μ L，37 V 5%C02培养4h。1500转离心10min，弃去上清液，每孔加入DMSO150 μ L，待全部溶解后，选择570nm波长，用酶联免疫检测仪测定各孔吸光值。