专利名称：铁皮石斛高效组培快繁方法铁皮石斛(Dendrobium candidu m Wall, ex Until.)为兰科石斛属多年生草本植物，别名铁皮兰、黑节草等。是ー种分布在岩溶地区的珍贵中药材植物，民间有“救命仙草”、“中华仙草”的美称。石斛属植物的茎段又名“石斛枫斗”，为ー种传统中药，其中所含有的石斛多糖具有益胃生津、抑制肿瘤等作用。早在1900年前的《神农本草经》上就有关于石斛的记载。入药的石斛主要有铁皮石斛、霍山石斛、束花石斛、美花石斛以及金钗石斛，其中以铁皮石斛的药效最为显著。然而铁皮石斛生长条件十分苛刻，自然产量极少，更因民间长期过度采挖，致使野生资源濒临绝种，国内市场供应紧缺，国际市场干品价已达1000美元/kg以上。建立高效的组培快繁体系是推进铁皮石斛药源良性发展的有效途径。
本发明的目的在于提供一种铁皮石斛的组织培养方法，以提高铁皮石斛的组织培养的分芽率和苗木质量。本发明通过如下的技术方案实现。一种铁皮石斛的组织培养方法，包括提供LED光源；提供适宜于所述LED光源的多层矮化培养架；在所述LED光源下铁皮石斛分芽培养；和在所述LED光源下铁皮石斛生根培养。优选地，所述培养架层间距15cm，宽50cm，长150cm，15m2培养室，可放置12个培养架，每个培养架12层，实现苗木培养14，400瓶。优选地，所述LED光源使用24V LED灯带，每架3条，实现30001X的均匀光照強度。优选地，所述LED光源的光照控制器采用14/10小时的光/暗培养。优选地，所述铁皮石斛分芽培养所使用的原球茎増殖培养基中的药品包括1800mg/L 的 KNO3360mg/L 的 NH4NO3270mg/L 的 KH2PO4600mg/L 的 Ca (NO3) 2362. 5mg/L 的 MgSO4. 7H2022. 3mg/L 的 MnSO4. 4H208. 6mg/L 的 ZnSO4. 7H206. 2mg/L 的 H3BO30. 83mg/L 的 KI适量的Na2Mo4. 2H200. 025mg/L 的 CuSO4. 5H200. 025mg/L 的 CoCl2. 6H200. 025mg/L 的 AlCl337. 3mg/L 的 Na2EDTA27. 8mg/L 的 FeSO4. 7H20 lOOmg/L 的肌醇4mg/L的甘氨酸12mg/L 的 VB1I. 2mg/L 的 VB62. 5mg/L 的烟酸2-4mg/L 的 D_ 泛酸钙2mg/L 的 VC5mg/L的L_半胱氨酸0. 24mg/L 的生物素2mg/L 的 6BAI. 2mg/L 的活性炭I. 5g/L的香蕉泥l.Og/L 的土豆泥。优选地，所述铁皮石斛生根培养所使用的生根壮苗培养基中的药品包括246. 6mg/L 的 KNO3216mg/L 的 NH4NO3334. 8mg/L 的 KH2PO4250. 2mg/L 的 Ca (NO3) 2258. 8mg/L 的 MgSO4. 7H2022. 3mg/L 的 MnSO4. 4H208. 6mg/L 的 ZnSO4. 7H206. 2mg/L 的 H3BO30.83mg/L 的 KI适量的Na2Mo4. 2H200. 025mg/L 的 CuSO4. 5H200. 025mg/L 的 CoCl2. 6H200. 025mg/L 的 AlCl337. 3mg/L 的 Na2EDTA27. 8mg/L 的 FeSO4. 7H2040mg/L 的肌醇I. 6mg/L 的甘氨酸4. 8mg/L 的 VB10.48mg/L 的 VB6lmg/L 的烟酸0. 8-1. 6mg/L 的 D_ 泛酸钙0. 8mg/L 的 VC2mg/L的L_半胱氨酸0. 09mg/L6 的生物素0. 6mg/L 的根太阳 0. 6mg/L 的 ABT0. 5mg/L 的 IBAI. 2mg/L 的活性炭1.5g/L的香蕉泥l.Og/L 的土豆泥。通过以上技术方案，本发明能够达到如下技术效果。(I)利用LED光源替代传统白炽灯或自然光，作为铁皮石斛组培快繁的光源，实现低成本高效苗木培育。LED (light-emitting diodes),即发光二极管,是ー种可以有效地把电能转变成电磁辐射的装置。LED具有较窄的波谱，波谱半宽范围从几纳米到几十纳米，在±20nm左右，波长正好与植物光合成和光形态形成的光谱范围相吻合。在植物组织培养中米用LED提供照明，不仅能够调控组培植物的生长发育和形态建成、缩短培养周期、提高品质，而且能够大大減少能耗，降低成本。(2)提供了适宜于LED光源的多层矮化培养架，实现了空间利用的高效率。本发明的技术方案，提高培养空间利用率I倍以上；且能有效控制污染，适应了铁皮石斛培养周期长(3个月)的特点(3)对LED光源下铁皮石斛分芽培养的培养基进行了优化，提高了分芽率。本发明对MS培养基进行了优化，以适应LED光源下铁皮石斛的原球茎高效分化，主要优化内容包括，大量元素品种及使用量调整、有机元素的品种及使用量调整、外源有机物添加、激素使用量调整等。(4)对LED光源下铁皮石斛生根培养的培养基进行了优化，提高了苗木质量。铁皮石斛生根苗培育，一般采用1/2MS培养基。本发明对生根培养基进行了优化，以适应LED光源下铁皮石斛的高质量苗木培育，主要优化内容包括，大量元素品种及使用量调整、有机元素的品种及使用量调整、外源有机物添加、外源生根刺激物质添加、激素使用量调整等。经优化的生根培养基，培养的苗木，75天，苗高普遍7cm以上，茎粗0. 4cm以上，茎6节以上，根系数量8条以上，普遍高于目前培养的生根苗。


图I是根据本发明的LED光源培养室。图2是根据本发明的LED光源培养室中的LED光帯。图3是根据本发明的LED光源培养室中的培养架。图4a是使用现有技术中的MS培养基的分芽培养效果。
图4b是使用根据本发明的原球茎増殖培养基的分芽培养效果。图5a_5c是使用根据本发明的生根壮苗培养基的生根培养效果。

LED灯带选择使用24V LED灯带，每架3条，实现30001x的光照强度；光照控制器采用14/10小时的光/暗培养2.高效铁皮石斛原球茎増殖培养基配方如下


本发明提供了一种铁皮石斛高效组培快繁方法，利用LED光源替代传统白炽灯或自然光，作为铁皮石斛组培快繁的光源，实现低成本高效苗木培育；提供了适宜于LED光源的多层矮化培养架，实现了空间利用的高效率。本发明还对LED光源下铁皮石斛分芽培养和生根培养的培养基进行了优化，提高了分芽率和苗木质量。