专利名称：一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法胸腺法新(Thymosin)是1984年发现并由胸腺分泌的一种重要的T淋巴细胞调 节因子，与细胞免疫调节有关。胸腺法新作为一种免疫调节剂，它的良好疗效已得到确证， 临床应用前景极为光明。就乙型肝炎来说，乙型肝炎病毒(HBV)感染是人类最常见的病毒 性感染之一。全世界慢性HBV感染者约有3亿，其中大部分在亚洲地区。我国人群中慢性 HBV携带者约占10%-15%，慢性乙型肝炎(CHB)患者中每年发生肝硬化和肝细胞癌者分别占 2 %和1%。显然，积极治疗HBV感染，阻止其向肝硬化和肝癌发展，具有重要意义。此外，胸 腺法新对爱滋病、恶性肿瘤等这些人类健康大敌亦有良好疗效。目前已经有注射用胸腺法新上市销售，该制剂为冻干粉针剂，其在治疗慢性乙型 肝炎的推荐量是每针1. 6mg皮下注射每周二次，两剂量大约相隔3-4日，治疗应连续6个月 (52针)期间不可中断。这样的给药方式病人的顺应性很差，因此开发出能够每月给药一次 的缓释微球制剂可以极大的提高病人的顺应性，提高该药物的治愈率。复乳法(W/0/W)是一种制备PLGA缓释微球的经典方法，采用复乳法(W/0/W)制备 缓释微球的文献和专利已经越来越多，但目前仅有中国人民解放军第二军医大学的钟延强 等发表的文章和专利(中国专利申请号200610118413.5)中采用复乳法(W/0/W)制备了胸 腺法新缓释微球。在其文章和专利中所制备的胸腺法新缓释微球的载药量均不大于0. 9%， 这给实际临床应用带来很大的困难。按照注射用胸腺法新粉针剂治疗慢性乙型肝炎时的给 药剂量(每针1. 6mg皮下注射每周二次，两剂量大约相隔3-4日，参见《注射用胸腺法新说明 书》)计算，采用一月的缓释微球给药时的剂量大约为12. 8mg，按0. 9%的载药量计算对应的 辅料总量不少于1422mg，含有这样大量的辅料是无法进行皮下注射的。
本发明要解决的技术问题是提供一种能有效延长在体内作用时间的胸腺法新缓 释微球制剂，降低了胸腺法新的给药频率。为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案实现本发明提供一种稳定的胸腺法新缓释微球制剂，包括胸腺法新、乙交酯丙交酯共聚物， 其质量百分比分别为胸腺法新0. 1%-10%，乙交酯丙交酯共聚物85%-99%。其中本发明的微 球是指药物分散或被吸附在高分子、聚合物基质中而形成的微粒分散体系。乙交酯丙交酯 共聚物[poly (lactide-co-glycolide), PLGA]是有乙交酯和丙交酯以不同比例嵌段共聚 而成的一种高分子材料，具有良好的生物相容性和可降解性，其最终降解产物是二氧化碳 和水。本发明中所述的乙交酯丙交酯共聚物是乙交酯丙交酯为25:75-75:25的共聚物，其 分子量为5000-25000道尔顿，特性粘度为0. 1-0. 5dL/g。为了实现胸腺法新缓释微球具有理想的载药量，使其在临床上应用成为一种可 能。发明人对胸腺法新的理化性质以及处方因素进行研究，结果意外的发现，采用胸腺法 新0. 1%_10%，乙交酯丙交酯共聚物85%_99%，的处方制备成缓释微球，可以实现载药量为 4. 5%-6. 1%的胸腺法新缓释微球，对于现有技术而言显著的减少辅料应用，在制剂学上取得 突破。该缓释微球的缓释周期可以实现长达25—35天。本发明所述的胸腺法新缓释微球制剂还包含质量百分比为0. 1-5. 0%的保护剂， 该保护剂选自人血清白蛋白、明胶、海藻糖或甘露醇中的一种或其任意两种或两种以上的 组合物。发明人发现，当保护剂的浓度小于0. 1%时，其提高胸腺法新稳定性的作用较弱， 效果不明显；而当保护剂的浓度大于5. 0%时会因为用量过大而导致内水相的密度和粘度 增加，所制备的初乳的粒径会增加，进一步导致最终得到的缓释微球的粒径变大，不利于药 物的控制释放。发明人在研究过程中发现，保护剂的浓度在0. 1-5. 0%时，由于加入保护剂 可提高胸腺法新的稳定性；同时发现还可以增加缓释微球的载药量。通过对比发现，胸腺法新中的醋酸含量的对微球的载药量有显著的影响，试验发 现含量分别为0. 23%,0. 56%、1%和3. 2%时所对应的微球的载药量分别为6. 1%、5· 8%、4· 5% 和0. 9%。本发明所述的胸腺法新为醋酸盐，其醋酸的百分含量要求大于0%而小于3. 0%，优 选大于0%而小于1. 0%，在此范围内可以获得高载药量的缓释微球。本发明还提供了复乳法(W/0/W)制备胸腺法新缓释微球的方法，包括以下步骤1)将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，得乙交酯丙交酯共聚物浓度为10%-40%(W/ V)的油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其组合物；2)将胸腺法新、保护剂溶于水，得胸腺法新浓度为1%_30%(W/V)的内水相；3)内水相与油相混合，得初乳，并将初乳加入到含有表面活性剂的外水相中，得复乳；
4)待有机溶剂挥发后，得到包裹有胸腺法新的缓释微球。步骤3)所述“得初乳”，可以采用高速搅拌、高压均质或超声破碎等方式制备，只要 能够保证初乳的粒径符合要求即可。所制备的初乳要存放在20°C以下的环境中以增加初乳 的稳定性。所述“得复乳”，将初乳在搅拌的状态下加入到外水相中得复乳。本发明所述的外水相的pH值为3. 0-5. 0，可以采用醋酸、盐酸、硫酸等调节pH。发 明人发现，通过控制外水相的PH值可以提高胸腺法新的稳定性，还可以提高制备过程中的 包封率，从而提高缓释微球的载药量。所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸钠、硬脂酸钠、吐温、或司盘中 的一种或其组合物，其浓度为0. 1%-5% (W/V)。优选的表面活性剂为聚乙烯醇，其浓度为 0. 1%-5% (ff/V)o本发明所制备的胸腺法新缓释微球制剂可以缓释一个月。

图1是本发明胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放曲线； 图2是本发明胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放另一曲线。

实施例一
称取300mg胸腺法新和200mg明胶溶于Iml注射用水中，作为内水相；称取4g乙交
4酯丙交酯共聚物溶于IOml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入到内水相中，采用高速搅 拌(20000rpm) 15秒，得初乳，存放在20°C以下的环境中；将此初乳在搅拌的状态下加入到 5000毫升0. 5% (W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续搅拌3小时挥去二氯甲烷，离 心、洗涤收集得到微球，微球粒径小于100微米，载药量为6. 1%。实施例二
称取500mg胸腺法新、300mg明胶溶于2ml注射用水中，作为内水相；称取8g乙交酯丙 交酯共聚物溶于80ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入到内水相中，采用超声波细胞破 碎仪(Branson S-250D)进行超声10秒，得初乳，存放在20°C以下的环境中；将此初乳在搅 拌的状态下加入到8000毫升1. 0% (W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续搅拌3小 时挥去二氯甲烷，离心、洗涤收集得到微球，微球粒径小于50微米，载药量为4. 5%。实施例三
胸腺法新缓释微球体外释放的测定
将上述实施例制备的胸腺法新缓释微球制剂进行体外释放的测定，测定方法为精密 称取含药微球IOOmg置于IOml具塞试管中，以pH为7. 4的磷酸盐缓冲液(含0. 02%叠氮化 钠作为抑菌剂，0. 05%的吐温80为润湿剂)IOml为释放介质，置于恒温水浴摇床中，在振荡 速度lOOrpm、温度37°C 士0. 5°C条件下进行微球的体外释放度测定。分别在ld、2d、4d、7d、 14d、21d、28d各取0. 5ml释放介质用于高效液相色谱法测定胸腺法新的含量，并补充新鲜 的释放介质。图1、2分别为实施例1、2所制备的胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放曲 线。由图1、2可以看出，本发明所制备的胸腺法新缓释微球制剂具有良好的缓释效果，1天 内的突释均小于20%。其缓释周期为一个月。以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的 保护范围。


本发明提供了一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法。一种的胸腺法新缓释微球制剂，包括胸腺法新、乙交酯丙交酯共聚物，其质量百分比分别为胸腺法新0.1%-10%，乙交酯丙交酯共聚物85%-99%，所述的乙交酯丙交酯共聚物是乙交酯丙交酯为25:75-75:25的共聚物，其分子量为5000-25000道尔顿，特性粘度为0.1-0.5dL/g。本发明的外水相的pH值为3.0-5.0，可以采用醋酸、盐酸、硫酸等调节pH。发明人发现，通过控制外水相的pH值可以提高胸腺法新的稳定性，还可以提高制备过程中的包封率，从而提高缓释微球的载药量。