专利摘要： 本发明属于基因工程领域，更具体地说，涉及CRISPR-Cas9特异性敲除乙型肝炎病毒cccDNA的方法以及用于特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA的sgRNA。本发明提供了CRISPR-Cas9特异性敲除乙型肝炎病毒cccDNA的方法以及用于特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA的sgRNA。利用本发明制备的特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA的sgRNA能够精确靶向乙型肝炎病毒cccDNA并且实现基因敲除。该制备方法步骤简单、sgRNA靶向性好，CRISPR-Cas9系统的敲除效率高。

专利摘要：

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专利摘要： 本发明涉及一种靶向敲除家蚕核型多角体病毒BmNPV复制非必需基因的方法，所述方法以BmNPV为材料，通过PCR对其一个复制非必需片段两端的同源序列进行扩增并克隆至载体pUC19中；通过重叠PCR法依次拼接BmNPV的IE1早期启动子、标记基因(EGFP)、终止序列SV40polyA，并克隆至上述载体pUC19获得重组转移载体pUC19-lef7-IE1-EGFP-SV40polyA-gp64；将该载体与野生BmNPV的基因组共转染BmN细胞，经同源重组获得带有荧光标记的重组病毒RBmNPV-EGFP；将其基因组DNA与不带有标记基因的转移载体pUC19-lef7-gp64共转染BmN细胞，通过同源重组获得不带有荧光标记基因的重组病毒RBmNPV。本发明解决了重组病毒基因组中带有标记基因的问题，提高了阳性重组病毒的筛选效率，且此标记基因可以被反复利用。